李朝一 張慧敏 李振坤 牧?xí)? 李麗娟

摘要：探索金合歡素對(duì)感染大腸桿菌腸道小鼠腸道的保護(hù)作用，觀察小鼠腸道HE染色情況，用藥前后的體重對(duì)比、白細(xì)胞的變化，對(duì)比單一腸道感染大腸桿菌的小鼠，實(shí)驗(yàn)表明金合歡素對(duì)小鼠腸道黏膜有保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：腸道;大腸桿菌;金合歡素

中圖分類號(hào)：S816文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2022.02.003

Protective Effect of Acacia on Intestinal Tract of mice Infected with Eschrichia Coli

LI Zhaoyi，ZHANG Huimin，LI Zhenkun，MU Shuhao，LI Lijuan

（Jinzhong Information Institute in Taigu District，Taigu Shanxi 030801，China）

Abstract：To explore the protective effect of acacia on intestinal tract of mice infected with E. Coli，and to observe the changes of intestinal HE staining，body weight and white blood cells before and after administration of Acacia，and to compare the effect of acacia on intestinal tract of mice infected with E. coli alone，the results showed that Leucaena had protective effect on Intestinal Mucosa of mice.

Keywords：Intestinal tract，escherichia coli，acacia

0引言

采用藥敏試驗(yàn)觀察金合歡素體外抑菌作用;采用單因素隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為3組：空白組、金合歡素組和大腸桿菌組，預(yù)飼1周，試驗(yàn)期為7 d，測(cè)量試驗(yàn)前后體重，肉眼觀察，采集腸道制作病理切片分析不同處理腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)。藥敏試驗(yàn)表明：金合歡素有體外抑制大腸桿菌作用[1];體內(nèi)試驗(yàn)表明：肉眼觀察到空白組腸壁有明顯的肌理、更有彈性、更厚的組織層，是正常的白色健康組織;金合歡素組腸壁的環(huán)狀皺褶趨向光滑，呈半透明狀，可見(jiàn)輕度腹水;大腸桿菌組管通透，有大量積水和少量血管，無(wú)彈性，易斷裂，損傷較重。病理切片鏡下觀：空白對(duì)照組的腸絨毛排列整齊，黏膜，粘膜下層清晰可見(jiàn)，界面齊整[2];金合歡素組個(gè)別絨毛破碎，分離，略浮于上面，但整體可見(jiàn)，大部分腸絨毛還是黏著排列在一起，大腸桿菌則腸絨毛全部紊亂，分散，黏膜，粘膜下層開(kāi)始漂浮，破壞嚴(yán)重⑶。

1材料與方法

1.1材料

取SPF級(jí)雌性ICR小鼠20只，體重18～22 g，購(gòu)自山西醫(yī)科大學(xué)。

1.2方法

1.2.1復(fù)蘇菌

將高壓滅菌后的液體培養(yǎng)基分裝入10 mL的試管中，放入37 ℃培養(yǎng)箱中，震蕩搖晃12 h，得到原菌液。

1.2.2倍比稀釋

將原菌液倍比稀釋為2¹，2²，2³，2⁴，2⁵，2⁶，2⁷，2⁸，2⁹，2¹⁰即1024倍，從2¹⁰試管中抽取5 μL涂布于固體培養(yǎng)基中，再次放入37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1晚，之后用菌落計(jì)數(shù)器數(shù)出菌落數(shù)，取平均值，得出23試管中的最大感染菌落數(shù)。同時(shí)涂布原菌液放入藥敏片，確定金合歡素對(duì)大腸桿菌是否有抑菌作用。

1.2.3藥物制備

聚乙二醇（PEG）以0.05 g/100mL，用蒸餾水溶解;取金合歡素的最大溶解度60 mg/kg，用PEG溶劑分化;苦味酸標(biāo)記液按苦味酸：甲醛：冰醋酸=15：5：1配置。

1.2.4正式試驗(yàn)

小鼠按體重隨機(jī)分配，一組5只，用苦味酸標(biāo)記液，按一定順序染色背毛，做好標(biāo)記?？瞻讓?duì)照組連續(xù)灌胃PEG7 d，金合歡素組連續(xù)灌胃金合歡素6 d，造模成功，腹腔注射大腸桿菌1d。大腸桿菌組連續(xù)灌胃PEG6 d，隨后1 d腹腔注射大腸桿菌。見(jiàn)表1。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處置

處死前稱取體重，與分組時(shí)的體重相比較。眼眶采血，測(cè)出白細(xì)胞指數(shù)，病理解剖，取結(jié)腸做石蠟切片。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果表示均采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行反差分析和檢驗(yàn)，用t檢驗(yàn)法進(jìn)行比較，以ρ<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1預(yù)實(shí)驗(yàn)

觀察到正常組活潑好動(dòng)，背毛柔順，反應(yīng)迅速，感染大腸桿菌的小鼠呆立不動(dòng)，背毛紊亂，眼睛睜不開(kāi)，肛門糞便粘滯。打開(kāi)腹腔，正常組腸道無(wú)明顯異常，而模型組腸壁變薄，變透。見(jiàn)圖1。

2.2正式試驗(yàn)

第一張圖片為空白對(duì)照下的腸道，腸壁組織紋理清晰可見(jiàn)，彈性較大，組織層較厚，為白色健康正常組織;第二張圖片組織層相較于第一張變薄，腸壁的環(huán)形褶皺趨于平滑，為半透明顏色，見(jiàn)于輕微腹水;第三張為單一腹腔注射大腸桿菌下的腸道，腸道透明，積水嚴(yán)重，見(jiàn)輕微血絲，彈性消失，容易斷開(kāi)，病變嚴(yán)重。見(jiàn)圖2。

2.3HE染色顯微鏡觀察

空白對(duì)照下的腸絨毛排列整齊，黏膜下層清晰可見(jiàn);金合歡素治愈的第2張圖片，個(gè)別絨毛破碎，而第3 張大腸桿菌則腸絨毛全部紊亂，分散，黏膜，粘膜下層開(kāi)始漂浮，破壞嚴(yán)重。見(jiàn)圖3。

2.4白細(xì)胞分析

小鼠正常的白細(xì)胞值為2.5～15.0，在第1組中，我們發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞值在5～10，說(shuō)明全部正常;第2組有80%處于正常值，20%超過(guò)正常值，說(shuō)明金合歡素對(duì)大腸桿菌有一定抑菌作用;第3組100%超過(guò)范圍，提示炎癥癥狀嚴(yán)重。見(jiàn)圖4。

3討論

大腸桿菌屬于腸道中本身存在的細(xì)菌，從糞便中提取容易，數(shù)量過(guò)多會(huì)導(dǎo)致腸道緊張性收縮和容受性舒張消失，內(nèi)容物變成糊狀導(dǎo)致壓力過(guò)大，肛門括約肌承受不住壓力，直接腹瀉不止，脫水，Na-K失衡;數(shù)量過(guò)少則使腸道的分節(jié)運(yùn)動(dòng)減慢，糞便阻塞腸道，導(dǎo)致便秘。選用小鼠作為大腸桿菌的感染模型原因有3方面。一是哺乳動(dòng)物更接近人類;二是體型小，容易飼養(yǎng)和控制;三是小鼠更敏感，產(chǎn)生級(jí)聯(lián)放大發(fā)應(yīng)，效果更顯著。灌胃金合歡素模擬口服給藥，確保劑量，使藥物利用最大化，但是灌胃中不可避免對(duì)小鼠食道造成損害，可能也會(huì)導(dǎo)致食欲不佳，體重下降。當(dāng)前對(duì)耐藥性的研究中，中藥是個(gè)很好的選擇，性價(jià)比較高，標(biāo)本兼治，通過(guò)藥敏實(shí)驗(yàn)觀察金合歡素是否對(duì)大腸桿菌有抑菌性，確保可行性。

4結(jié)束語(yǔ)

通過(guò)肉眼觀察的狀態(tài)、顯微鏡下的形態(tài)觀察、白細(xì)胞指數(shù)變化等多方面對(duì)金合歡素的功能進(jìn)行評(píng)判，金合歡素組的白細(xì)胞指標(biāo)相對(duì)于單一大腸桿菌組的指標(biāo)明顯趨于正常，金合歡素對(duì)大腸桿菌感染小鼠腸道的保護(hù)作用效果顯著。

參考文獻(xiàn)

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