【摘要】目的:研究大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬總黃酮的工藝,為細(xì)氈毛忍冬化學(xué)成分的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。方法:以靜態(tài)吸附容量及解析率篩選樹脂類型,在動態(tài)吸附條件上,對影響純化的工藝參數(shù)條件進(jìn)行篩選。結(jié)果:確定了大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物的工藝為:D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物,上柱藥液生藥濃度為0.10g/mL,比上柱量2.74g/g(藥材/干樹脂)上柱吸附。結(jié)論:D101樹脂綜合性能較好,適用于細(xì)氈毛忍冬中總黃酮成分的分離純化。
【關(guān)鍵詞】細(xì)氈毛忍冬;大孔樹脂;總黃酮;純化
【中圖分類號】R284.2【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號】1007-8517(2022)11-0032-04
ResearchonTechniquesofPurifyingtheTotalFlavonoidsinLonicera
SimilesHemslwithMacroporousResin
ZHENGGuangya
CentralHospitalofSichuanProvincialPrisonAdministration,Chengdu610000,China
Abstract:ObjectiveToresearchonapurificationprocessforthetotalflavonoidsfromLonicerasimilesHemslbymacmporousresin,andlaythefoundationforthefurtherresearchofthechemicalcompositionofLonicerasimilesHemsl.MethodsBasedonthedifferentstaticadsorptioncapacityandelutionrateoftotalflavonoids,thetechnologicalconditionsforabsorptionofmacroporousabsorptiveresinwereselected.ResultTheresultindicatesthattheoptimumpurificationprocessareasfollows:D101macroporousresinisusedtopurifytheextractofLonicerasimilesHemsl,Thesamplesolutionconcentrationis0.10gcrudedrug/mLandtherateamountis2.74g/gcrudedrugdryresin.ConclusionWithgoodcomprehensiveproperties,D101resinissuitableforpurifyingtheelementoftotalflavonefromLonicerasimilesHemsl.
Keywords:LoniceraSimilesHemsl;MacroporousResin;TotalFlavonoids;Purification
細(xì)氈毛忍冬LonicerasimilesHemsl(圖1、圖2)為西南地區(qū)金銀花的主流品種[1],該種資源豐富,使用歷史悠久。大量研究表明,金銀花及其同屬植物的化學(xué)成分以有機(jī)酸、黃酮類、皂苷類成分為主,但細(xì)氈毛忍冬相關(guān)研究鮮見報(bào)道。近年來國內(nèi)外新發(fā)展的分離技術(shù)大孔吸附樹脂在醫(yī)藥領(lǐng)域特別是天然藥物精制中廣泛應(yīng)用,是提取分離中草藥有效成分的一種有效方法[2-3]。本文以細(xì)氈毛忍冬提取物為研究對象,采用大孔樹脂對其黃酮類成分進(jìn)行分離、純化研究,為細(xì)氈毛忍冬化學(xué)成分的進(jìn)一步深入研究奠定基礎(chǔ)。
1儀器與材料
1.1儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-5203(上海亞榮生化儀器廠);紫外-可見分光光度計(jì)UV1100(上海天美科技有限公司);電子天平TD6001(天津天與儀器廠);大孔樹脂D101(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)。
1.2材料蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢驗(yàn)所);大孔樹脂D101、DM301、DA201、AB-8(均為天津農(nóng)藥股份有限公司樹脂分公司),LD605(為晨光化工研究院);乙醇、亞硝酸鈉溶液、硝酸鋁溶液、氫氧化鈉等均為分析純。
細(xì)氈毛忍冬藥材采購于四川省南江縣,經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)馬逾英教授鑒定為忍冬科植物細(xì)氈毛忍冬LonicerasimilisHemsl。
2方法與結(jié)果
2.1總黃酮的含量測定
2.1.1對照品溶液的制備取蘆丁對照品約25mg,置50mL容量瓶中,加75%乙醇適量,超聲處理使溶解,放冷,加75%乙醇至刻度,搖勻。精密量取20mL,置50mL容量瓶中,加75%乙醇至刻度,搖勻,即得。
2.1.2供試品溶液的制備稱取細(xì)氈毛忍冬干燥花蕾475g,采用文獻(xiàn)[4-5]方法進(jìn)行提取得浸膏。精密稱取浸膏0.5g,置50mL容量瓶中,加75%乙醇至刻度,搖勻。精密量取1mL,置50mL容量瓶中,加75%乙醇至刻度,搖勻,即得。
2.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,分別置25mL容量瓶中,亞硝酸鈉-硝酸鋁顯色。再加水定容至刻度,搖勻,放置15min,以相應(yīng)試劑為空白,照紫外-可見分光光度法[6],于510nm波長處測定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo),濃度(C)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程:A=0.0137C+0.0008,r=0.9999,n=6。線性范圍:8.0179~48.1074μg/mL。
2.1.4細(xì)氈毛忍冬提取物中總黃酮的測定取供試品溶液適量,參照2.1.3中方法測定其吸光度,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出總黃酮的含量。
2.2篩選不同型號大孔吸附樹脂的研究
2.2.1大孔樹脂的預(yù)處理試驗(yàn)用5種大孔樹脂(D101、DM301、DA201、AB-8、LD605)用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡24h,再用蒸餾水反復(fù)洗滌6~8次,至無乙醇味,然后用5%HC1溶液浸泡8h,用蒸餾水洗至中性,再用5%的NaOH溶液浸泡8h,用蒸餾水洗至中性,備用。
2.2.2不同類型大孔樹脂吸附性能的考察量取各種類型的大孔樹脂(干重約為1g)置150mL的具塞錐形瓶中,分別精密加入細(xì)氈毛忍冬供試品溶液90mL,靜置24h,時時振搖,使其充分吸附后,過濾,按照2.1.3中的方法測定濾液中剩余總黃酮的含量,計(jì)算吸附量;將吸附平衡后的大孔樹脂轉(zhuǎn)移至錐形瓶中,用95%乙醇解吸,測定解吸液中總黃酮的含量,計(jì)算解析率;結(jié)果見表1、圖3。
吸附量=上柱液中總黃酮含量(mg)-泄漏液中總黃酮含量(mg)
吸附率=[吸附量(mg)/上柱液中總黃酮含量(mg)]×100%
解吸率(%)=[解吸液中總黃酮含量(mg)/吸附量(mg)]×100%
結(jié)果表明:通過對五種不同的大孔樹脂進(jìn)行考察,發(fā)現(xiàn)LD605吸附能力最強(qiáng),但是很難被解吸下來;D101大孔樹脂在所給的實(shí)驗(yàn)條件下對總黃酮吸附有較大的吸附量,而且能夠把絕大部分解吸下來。故選擇D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物。
2.3D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬中總黃酮的的工藝參數(shù)考察
2.3.1上柱液濃度對總黃酮含量的影響稱取一定量的細(xì)氈毛忍冬浸膏,分別稀釋成不同濃度,通過裝有D101大孔樹脂(干重約4g)的吸咐柱中,以2~3mL/min流速進(jìn)行吸附,收集流出液,測定總黃酮的含量,計(jì)算大孔樹脂的比吸附量,結(jié)果見表2、圖4。
比吸附量=吸附量(mg)/樹脂干重(g)
結(jié)果表明:上柱液生藥濃度為0.10g/mL時,D101大孔樹脂對細(xì)氈毛忍冬總黃酮的比吸附量最大,為97.55mg/g,因此選擇上柱液生藥濃度為0.10g/mL。
2.3.2比上柱量對總黃酮含量的影響將180mL的細(xì)氈毛忍冬提取液通過D101大孔樹脂(干重約4g),上柱分離純化,分段收集流出液,每份10mL。測定流出液中總黃酮的含量,計(jì)算出其泄漏百分率,結(jié)果見表3、圖5。
比上樣量=生藥量(g)/樹脂干重(g)
結(jié)果表明:上樣至第14份時泄漏的細(xì)氈毛忍冬總黃酮開始顯著增大,說明樹脂柱開始不能完全吸附藥液中的總黃酮。為了細(xì)氈毛忍冬總黃酮保留完全,將最大上樣量80%的量即110mL作為上樣量,以總黃酮在藥材含量為3.39%計(jì),得到樹脂的比上柱量為2.74g/g(藥材/干樹脂)。
3結(jié)論
大孔吸附樹脂為一種有機(jī)高聚吸附劑,具有選擇性好、吸附容量大、解吸容易、再生簡便等優(yōu)點(diǎn),對苷類、黃酮類等成分的富集純化有較好的效果,在生物堿類、酚類等方面的分離純化中也有廣泛應(yīng)用[7]。鑒于細(xì)氈毛忍冬的有效成分有黃酮類和皂苷類成分,本研究采用大孔樹脂對細(xì)氈毛忍冬的提取物進(jìn)行分離純化。大孔樹脂法技術(shù)條件要求較高,本實(shí)驗(yàn)以靜態(tài)吸附量及解析率篩選樹脂類型,在動態(tài)吸附條件上,研究影響純化的工藝參數(shù)如上樣液濃度、比上柱量等,最終確定了大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物的工藝為:D101大孔樹脂純化細(xì)氈毛忍冬提取物,上柱藥液生藥濃度為0.10g/mL,比上柱量2.74g/g(藥材/干樹脂)上柱吸附。本法簡單,成本較低,且能達(dá)到較好的分離純化效果,該法可用于擴(kuò)大生產(chǎn),為下一步深入研究細(xì)氈毛忍冬中黃酮類化合物奠定了基礎(chǔ)。
參考文獻(xiàn)
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(收稿日期:2021-10-13編輯:劉斌)
基金項(xiàng)目:四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目課題(川銀花主流品種細(xì)氈毛忍冬特征性成分的分離及含量測定研究,項(xiàng)目編號:10ZA085)。
作者簡介:鄭光雅(1986-),女,漢族,碩士研究生,主管中藥師,研究方向?yàn)橹兴庤b定、藥事管理。E-mail:412212711@qq.com