夏圣坤，王 輝，陳曉敏，陳春華，周文淦，黃曉君，聶少平

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中加食品科學(xué)技術(shù)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

炎癥性腸病（inflammatory bowel disease，IBD）包括克羅恩病（Crohn’s disease，CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC），是病因不明的特發(fā)性腸道炎癥。IBD的臨床表現(xiàn)主要為腹瀉、直腸出血、腹痛和體質(zhì)量減輕等癥狀，常常給患者帶來(lái)巨大的痛苦[1]。此外，已有研究表明，除了腸道，IBD還會(huì)累及全身各器官，進(jìn)而引發(fā)關(guān)節(jié)炎、口腔潰瘍、皮膚黏膜損害、眼部、肝腎臟等病變[2]。IBD發(fā)病率仍持續(xù)上升，已成為全球關(guān)注的健康問(wèn)題。目前，治療IBD的藥物種類大多為糖皮質(zhì)激素、氨基水楊酸、免疫抑制劑和生物制劑等[3-4]。除藥物醫(yī)治外，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)一些非藥物類方法也具有改善作用，包括基因治療及糞便移植等。但是這些療法都有其局限性，并非對(duì)所有患者都有效。此外，皮質(zhì)類固醇和免疫抑制劑還具有一定副作用，可引起多種不良反應(yīng)。因此，尋找新的手段用于緩解患者癥狀迫在眉睫[5]。

芹菜（Apium graveolensLinn.）屬于傘形花科的草本植物，適宜生長(zhǎng)在肥沃的土壤，主要分布于南北美洲、南歐、非洲、亞洲[6]。芹菜具有優(yōu)良的食療效果，已被用于緩解炎癥、便秘、高血壓和高血脂、肝臟病變等疾病[7-9]。黃酮類化合物是植物次生代謝產(chǎn)物，在植物界廣泛分布，大量報(bào)道顯示其在細(xì)胞和嚙齒動(dòng)物模型中具有抗氧化和抗炎活性[10-11]。芹菜中的黃酮類化合物是其重要活性成分之一。目前，芹菜黃酮的研究熱點(diǎn)主要集中在芹菜素，已有研究報(bào)道芹菜素具有抗氧化[12]、抗炎[13]、抗腫瘤[14]的生理活性。然而黃酮在植物中主要以其衍生物的形式存在，而非苷元。作為芹菜苷苷元的芹菜素在芹菜中含量較低，質(zhì)量分?jǐn)?shù)僅為0.003%～0.088%[15]。芹菜苷作為芹菜中芹菜素的主要存在形式之一，其含量是芹菜素的10～20 倍[16]，然而其相關(guān)的功能活性鮮有報(bào)道。

因此，本研究以芹菜苷作為對(duì)象，對(duì)葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium，DSS）誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠給予芹菜苷干預(yù)，利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段評(píng)價(jià)芹菜苷緩解結(jié)腸炎的效果，以期提高芹菜的綜合利用，并可為結(jié)腸炎患者膳食選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

5周齡雄性近交系C57BL/6J小鼠（（18f2）g）購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006），在清潔級(jí)動(dòng)物房中進(jìn)行飼養(yǎng)，條件為室溫（25.0f0.5）℃、相對(duì)濕度（50f5）%、光/暗循環(huán)為12 h/12 h。

芹菜苷（芹菜苷（67.85f0.89）%、3-甲氧基芹菜苷（9.76f0.23）%和木樨草素-7-O-芹糖苷（10.22f0.05）%）由南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 芹菜苷及其衍生物結(jié)構(gòu)圖Fig. 1 Structures of apiin and its derivatives

DSS 美國(guó)MP Biomedical公司；0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）（pH 7.2～7.4）、4%多聚甲醛溶液 上海碧云天生物技術(shù)有限公司；蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）、阿利新藍(lán)（alcian blue，AB）-過(guò)碘酸席夫（periodic acid Schiff，PAS）染色試劑盒 武漢賽維爾生物有限公司；髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducable nitric oxide synthase，iNOS）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α與白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒 南京森貝伽生物科技有限公司；其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Feica APERIO LV1型病理切片掃描儀、倒置熒光顯微鏡德國(guó)徠卡顯微系統(tǒng)公司；3K15冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；Varioshan Flash多功能酶標(biāo)儀、702型－80 ℃冰箱 美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1.1 小鼠飼料配方的確定

AIN93G飼料定制于上海帆泊生物技術(shù)有限公司。飼料成分如表1所示，芹菜苷飲食配方基于AIN93G飼料進(jìn)行調(diào)整。以小鼠3 g/d的飲食劑量為參照，芹菜苷劑量為25 mg/kgmb，相當(dāng)于人的劑量為2.75 mg/kgmb[17]。

表1 飲食成分表Table 1 Ingredients of experimental diets

1.3.1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及模型建立

參照文獻(xiàn)[18]方法并適當(dāng)修改，利用DSS誘導(dǎo)建立小鼠結(jié)腸炎模型。靜養(yǎng)1周后，選用30只C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將小鼠隨機(jī)分成3 組（n＝10）：正常組、模型組、芹菜苷組。正常組和模型組全程給予AIN93G正常飼料，芹菜苷組全程給予根據(jù)AIN93G飼料配方調(diào)整的芹菜苷定制飼料。飼喂7 d后，模型組和芹菜苷組的飲水更換為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)3% DSS的無(wú)菌水進(jìn)行腸炎造模；正常組依然給予正常無(wú)菌水。造模6 d后，停止給予DSS無(wú)菌水（正常組也停止給予無(wú)菌水），24 h后，小鼠稱質(zhì)量后脫頸處死，眼眶取血，室溫下靜置1 h，3 000 r/min離心20 min，取上清液（血清），－80 ℃凍存待用。量取升結(jié)腸到直腸末端的距離作為小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度，稱量脾臟質(zhì)量并記錄，收集小鼠各器官部分保存于－80 ℃冰箱或多聚甲醛溶液中。實(shí)驗(yàn)期間記錄每天小鼠的體質(zhì)量和飲食量。本研究中涉及動(dòng)物的所有程序均按照國(guó)家衛(wèi)生研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南進(jìn)行，并經(jīng)南昌大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.3.2 疾病活動(dòng)指數(shù)測(cè)定

從第8天開(kāi)始到動(dòng)物飼養(yǎng)結(jié)束，參照文獻(xiàn)[19]的方法，對(duì)小鼠的糞便形態(tài)、便血情況和體質(zhì)量下降率3 個(gè)方面進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表2所示。疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index，DAI）為以上3 個(gè)指標(biāo)得分總和的平均值。

表2 DAI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Scoring criteria for DAI

1.3.3 脾臟指數(shù)測(cè)定

稱取小鼠脾臟質(zhì)量并記錄，按如下公式計(jì)算小鼠脾臟指數(shù)。

1.3.4 炎癥因子水平測(cè)定

根據(jù)ELISA試劑盒操作說(shuō)明，測(cè)定小鼠血清中炎癥因子TNF-α與IL-6的質(zhì)量濃度。

1.3.5 氧化應(yīng)激指標(biāo)測(cè)定

稱取適量結(jié)腸樣本，向其中加入預(yù)冷（4 ℃）的PBS勻漿，4 ℃、3 000 r/min離心10 min獲得結(jié)腸上清液，根據(jù)ELISA試劑盒操作說(shuō)明，測(cè)定小鼠結(jié)腸中MPO及iNOS活力。

1.3.6 結(jié)腸組織病理學(xué)分析

4%多聚甲醛固定結(jié)腸組織樣本，石蠟包埋后，經(jīng)切片、脫蠟、覆水、蘇木精染色、乙酸分化、伊紅染色、脫水和封片后，在病理切片掃描儀下觀察各組的結(jié)腸組織學(xué)形態(tài)，并用相機(jī)采集圖像。結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表3所示，組織損傷評(píng)分為各項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分的總和[20]。

表3 結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 3 Scoring criteria for colonic histological injury

1.3.7 結(jié)腸杯狀細(xì)胞觀察

AB可以將唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成藍(lán)色，而PAS可以將既含中性黏蛋白又含酸性黏蛋白的組織和細(xì)胞染成深淺不同的紫色，因此常用AB-PAS技術(shù)研究腸道杯狀細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況[21]。根據(jù)AB-PAS染色試劑盒說(shuō)明書，對(duì)結(jié)腸切片進(jìn)行AB-PAS染色。石蠟切片脫蠟復(fù)水，使用染液進(jìn)行浸染，切片用無(wú)水乙醇脫水、中性樹(shù)膠封片。在病理切片掃描儀下采集切片圖像信息。采用Image pro plus 6.0軟件對(duì)切片中杯狀細(xì)胞面積占結(jié)腸總面積的百分比（杯狀細(xì)胞面積占比）進(jìn)行計(jì)算。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

通過(guò)Graph Pad Prism 8.0軟件繪制統(tǒng)計(jì)圖表，采用SPSS Statistics 23軟件對(duì)數(shù)據(jù)通過(guò)單因素方差分析進(jìn)行最小顯著差異（least significant difference，LSD）的事后分析檢驗(yàn)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各處理組小鼠飲食狀況

對(duì)各處理組小鼠飲食量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并計(jì)算平均每只小鼠飲食量，結(jié)果如圖2所示，在第2～9天，各處理組小鼠飲食量之間沒(méi)有明顯差異，均穩(wěn)定在2.1～3.2 g之間，而從第10天開(kāi)始，模型組和芹菜苷組小鼠飲食量開(kāi)始逐漸下降，這可能是DSS處理使得小鼠腸道損傷所引起的。

圖2 各處理組小鼠飲食量Fig. 2 Food intake of mice in each treatment group

2.2 芹菜苷對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

為評(píng)估芹菜苷對(duì)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠體質(zhì)量的影響，對(duì)小鼠體質(zhì)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。從圖3A可以看出，在第1～8天，各組小鼠體質(zhì)量均緩慢上升，而在給予DSS后，模型組和芹菜苷組小鼠體質(zhì)量逐漸下降。對(duì)比模型組，芹菜苷可減緩體質(zhì)量降低，且在第14天時(shí)，芹菜苷組小鼠體質(zhì)量顯著高于模型組（P＜0.05）。為消除前7 d芹菜苷干預(yù)對(duì)體質(zhì)量的影響，以第8天小鼠體質(zhì)量為基準(zhǔn)，計(jì)算8～14 d的體質(zhì)量與第8天體質(zhì)量的比值（相對(duì)體質(zhì)量）（圖3B）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在第14天，模型組的體質(zhì)量降至第8天時(shí)的89.34%，而芹菜苷可顯著緩解由DSS誘導(dǎo)的體質(zhì)量降低（P＜0.05）。

圖3 芹菜苷對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響Fig. 3 Effect of apiin on body mass in mice

2.3 芹菜苷對(duì)小鼠脾臟指數(shù)的影響

脾臟是最大的免疫器官，炎癥反應(yīng)會(huì)使脾臟發(fā)生腫大，導(dǎo)致質(zhì)量增加。如圖4所示，模型組小鼠脾臟指數(shù)與正常組小鼠相比高度顯著升高（P＜0.001），芹菜苷可高度顯著降低腸炎小鼠脾臟指數(shù)（P＜0.001）。

圖4 芹菜苷對(duì)小鼠脾臟指數(shù)的影響Fig. 4 Effect of apiin on spleen index in mice

2.4 芹菜苷對(duì)小鼠DAI的影響

為判斷小鼠結(jié)腸炎的嚴(yán)重程度，對(duì)小鼠DAI進(jìn)行評(píng)分，結(jié)果如圖5所示。在造模期間，正常組DAI基本保持為0。給予3% DSS 2 d（第10天）后，與正常組相比，模型組DAI顯著升高（P＜0.05），且在第14天DAI達(dá)到約3.5。而芹菜苷可顯著降低結(jié)腸炎小鼠的DAI，芹菜苷組在第14天DAI為2，高度顯著低于模型組（P＜0.001）。

圖5 芹菜苷對(duì)小鼠DAI的影響Fig. 5 Effect of apiin on DAI in mice

2.5 芹菜苷對(duì)小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的影響

結(jié)腸炎會(huì)引起結(jié)腸長(zhǎng)度縮短，因此結(jié)腸長(zhǎng)度變化是評(píng)價(jià)小鼠結(jié)腸炎嚴(yán)重程度的又一重要參數(shù)[22]。如圖6所示，正常小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度為6.5 cm，而模型組小鼠的結(jié)腸平均長(zhǎng)度僅為5.0 cm，高度顯著低于正常組（P＜0.001），而芹菜苷飲食干預(yù)可極顯著緩解結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸縮短（P＜0.01）。

圖6 芹菜苷對(duì)小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的影響Fig. 6 Effect of apiin on colonic length

2.6 芹菜苷對(duì)小鼠氧化應(yīng)激的影響

為評(píng)價(jià)芹菜苷對(duì)氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)能力，測(cè)定了結(jié)腸中MPO及iNOS的活力，結(jié)果如圖7所示。正常組的MPO和iNOS活力分別為15 U/μg和0.75 U/μg，DSS的攝入會(huì)引起小鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)，表現(xiàn)為模型組小鼠的MPO和iNOS活力顯著增加（P＜0.001、P＜0.01），然而芹菜苷的攝入可以高度顯著抑制MPO與iNOS活力的增加（P＜0.001），說(shuō)明芹菜苷具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激能力。

圖7 芹菜苷對(duì)小鼠氧化應(yīng)激的影響Fig. 7 Effect of apiin on oxidative stress in mice

2.7 芹菜苷對(duì)小鼠炎癥因子分泌水平的影響

結(jié)腸炎患者常伴有嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而體內(nèi)產(chǎn)生高濃度的促炎因子[23]，為了評(píng)價(jià)芹菜苷的抗炎能力，本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了血清中TNF-α與IL-6的質(zhì)量濃度，結(jié)果如圖8所示。與正常組相比，模型組小鼠血清中促炎因子TNF-α和IL-6分泌水平顯著升高（P＜0.05），質(zhì)量濃度分別達(dá)到493 ng/L、99 pg/mL，而芹菜苷干預(yù)可顯著降低血清中這兩種炎癥因子質(zhì)量濃度（P＜0.001、P＜0.01），并達(dá)到與正常組相近的水平。

圖8 芹菜苷對(duì)小鼠血清TNF-α（A）和IL-6（B）質(zhì)量濃度的影響Fig. 8 Effect of apiin on serum TNF-α (A) and IL-6 (B) levels in mice

2.8 芹菜苷對(duì)結(jié)腸組織病理的影響

為評(píng)價(jià)芹菜苷對(duì)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)的影響，對(duì)小鼠結(jié)腸組織進(jìn)行HE染色及組織病理學(xué)綜合評(píng)分。如圖9A所示，正常組小鼠結(jié)腸上皮及隱窩結(jié)構(gòu)正常，且無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)發(fā)生；模型組小鼠結(jié)腸出現(xiàn)嚴(yán)重的腸上皮損傷、隱窩結(jié)構(gòu)變形或消失，以及大范圍的炎癥浸潤(rùn)；芹菜苷組小鼠結(jié)腸結(jié)構(gòu)較為完整，組織損傷輕微，黏膜上皮結(jié)構(gòu)較為完整，隱窩結(jié)構(gòu)基本完整與規(guī)則。如圖9B所示，與模型組相比，芹菜苷組結(jié)腸組織損傷得分高度顯著降低（P＜0.001），說(shuō)明芹菜苷可顯著減輕DSS引起的小鼠結(jié)腸組織損傷。

圖9 芹菜苷對(duì)小鼠結(jié)腸病理組織的影響Fig. 9 Effect of apiin on colonic damage score in mice

2.9 芹菜苷對(duì)結(jié)腸組織中杯狀細(xì)胞的影響

與正常組相比，模型組小鼠組織學(xué)檢查結(jié)果顯示隱窩結(jié)構(gòu)變形或消失，這表明芹菜苷可能通過(guò)刺激杯狀細(xì)胞分泌黏液對(duì)腸道上皮細(xì)胞產(chǎn)生有益作用。因此用ABPAS進(jìn)行特異性染色，以評(píng)估芹菜苷處理后的小鼠杯狀細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。如圖10A所示，在模型組小鼠結(jié)腸中，杯狀細(xì)胞萎縮且?guī)缀醣煌耆茐?，而芹菜苷組小鼠結(jié)腸杯狀細(xì)胞數(shù)量眾多并均勻地分布在隱窩當(dāng)中，且分泌有大量黏液。如圖10B所示，與模型組相比，芹菜苷處理小鼠杯狀細(xì)胞的AB-PAS染色面積百分比顯著更高（P＜0.05），這表明芹菜苷的攝入對(duì)杯狀細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用。

圖10 芹菜苷對(duì)結(jié)腸組織中杯狀細(xì)胞的影響Fig. 10 Effect of apiin on number of goblet cells in colon tissue

3 討 論

DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎具有與人類UC相似的病理特征，表現(xiàn)為體質(zhì)量減輕、糞便出血、腸上皮細(xì)胞丟失和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變[24]。在本研究中，通過(guò)連續(xù)6 d在雄性C57BL/6小鼠的飲水中添加3%的DSS誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎。模型組體質(zhì)量急劇下降，肛門可見(jiàn)血便，組織病理改變，結(jié)腸組織出現(xiàn)隱窩破壞、杯狀細(xì)胞的丟失、黏膜下水腫和上皮結(jié)構(gòu)損傷以及大范圍的炎癥浸潤(rùn)等現(xiàn)象。而芹菜苷能減輕DSS處理小鼠的結(jié)腸炎癥狀和炎癥反應(yīng)，維持正常的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。

氧化應(yīng)激和氧化細(xì)胞損傷是結(jié)腸炎的標(biāo)志之一。氧化應(yīng)激酶活力升高會(huì)導(dǎo)致自由基大量生成，而自由基會(huì)與腸細(xì)胞膜上脂類物質(zhì)發(fā)生相互作用，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，從而破壞腸道黏膜屏障，加重炎癥反應(yīng)[25-26]。MPO是一種中性粒細(xì)胞溶酶體中富含的酶，其活性與炎癥直接相關(guān)，在特定條件下，MPO催化反應(yīng)生成過(guò)量的氧化自由基，會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激和氧化性組織損傷[27]。iNOS是催化NO生成的協(xié)助巨噬細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中對(duì)抗病原體的一類氧化應(yīng)激酶。研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸炎患者內(nèi)NO含量超過(guò)正常值時(shí)，iNOS表達(dá)合成量升高[28]。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，DSS處理的模型組小鼠MPO和iNOS活力顯著升高，而添加芹菜苷處理后，這兩種酶活力恢復(fù)至正常水平，表明芹菜苷具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)機(jī)體氧化應(yīng)激能力。賈佳等[29]在對(duì)芹菜苷體外活性研究中發(fā)現(xiàn)，芹菜苷具有強(qiáng)抗氧化能力，能減緩油脂過(guò)氧化。

炎癥因子是一類主要由免疫系統(tǒng)細(xì)胞分泌的具有許多強(qiáng)大生物學(xué)效應(yīng)的內(nèi)源性多肽，可介導(dǎo)單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)腸組織，從而引起腸組織損傷[29]。TNF-α是炎癥反應(yīng)過(guò)程中出現(xiàn)的最早、最重要的炎性介質(zhì)，能激活中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，使血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加。IL-6能誘導(dǎo)B細(xì)胞分化和產(chǎn)生抗體，并誘導(dǎo)T細(xì)胞活化增殖、分化，參與機(jī)體免疫應(yīng)答，是炎癥反應(yīng)的促發(fā)劑[30]。IL-6水平常與結(jié)腸炎患者疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[31]。研究結(jié)果表明，促炎因子（如TNF-α和IL-6）的表達(dá)量升高可促使腸道炎癥發(fā)生，導(dǎo)致疾病惡化和組織破壞[32]。也有研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α可以通過(guò)調(diào)節(jié)核因子（nuclear factor，NF）-κB誘導(dǎo)激酶和抑制酶比例（NF-κB-inducing kinase/inhibitory-κB kinase α，NIK/IKK-α）激活NF-κB通路促進(jìn)腸道通透性增加[33]。據(jù)報(bào)道，NO產(chǎn)量的增加與促炎細(xì)胞因子釋放的增加成正比，而iNOS活力增加會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生大量的NO[34]。因此，本研究利用ELISA法測(cè)定血清中的TNF-α及IL-6的質(zhì)量濃度，結(jié)果表明，DSS誘導(dǎo)能顯著提高血清中這些炎癥因子的質(zhì)量濃度，而芹菜苷可顯著抑制這些細(xì)胞因子的表達(dá)，提示芹菜苷可以緩解全身性的炎癥。

腸道黏液層作為腸道屏障的重要組成部分，主要由杯狀細(xì)胞及其分泌的黏蛋白組成。黏蛋白是一類糖蛋白，其結(jié)合位點(diǎn)可與腸上皮細(xì)胞上的結(jié)合位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)，以阻止細(xì)菌與腸上皮結(jié)合，使細(xì)菌處于黏液層，以利于腸蠕動(dòng)時(shí)被清除，以維護(hù)腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)[35]。結(jié)腸組織中過(guò)多的炎癥細(xì)胞因子會(huì)引起杯狀細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致黏膜屏障完整性嚴(yán)重被破壞[36]。因此，利用AB-PAS進(jìn)行特異性染色，以評(píng)估芹菜苷處理后的杯狀細(xì)胞生長(zhǎng)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，芹菜苷組小鼠的杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著高于模型組，這表明芹菜苷可能通過(guò)刺激杯狀細(xì)胞增殖分泌黏液對(duì)腸道屏障產(chǎn)生有益作用。也有研究表明，一些黃酮具有上調(diào)黏蛋白和保護(hù)結(jié)腸黏液層完整性的功能[37]，與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相似。

芹菜苷作為芹菜素的天然存在形式，其結(jié)構(gòu)上比芹菜素多連有兩個(gè)糖苷；且與芹菜素相比，芹菜苷在體外幾乎不被細(xì)胞吸收，并且沒(méi)有表現(xiàn)出明顯抗炎活性[38]。這表明芹菜苷發(fā)揮抗炎作用可能涉及到其他機(jī)制，如機(jī)體代謝及腸道菌群的改變，有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，芹菜苷可以緩解結(jié)腸炎小鼠的體質(zhì)量降低和結(jié)腸縮短，降低DAI；并減弱DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的組織病理學(xué)改變。此外，芹菜苷能抑制結(jié)腸炎小鼠血清中促炎細(xì)胞因子表達(dá)水平的增加，調(diào)節(jié)結(jié)腸氧化應(yīng)激酶MPO及iNOS活力，促進(jìn)杯狀細(xì)胞增殖，保護(hù)腸道屏障完整性，修復(fù)結(jié)腸炎導(dǎo)致的腸道損傷。因此，芹菜苷可作為緩解結(jié)腸炎的潛在天然活性物質(zhì)。