王坤，吳月靜，王興珍，勵(lì)麗

目前，我國(guó)糖尿病患病率增加趨勢(shì)明顯，2015 年至2017 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)內(nèi)分泌學(xué)分會(huì)的流行病學(xué)調(diào)查顯示我國(guó)18歲及以上人群糖尿病患病率為11.2%，其中2 型糖尿病占90%以上[1]。過(guò)去一直認(rèn)為2 型糖尿病是遺傳與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，近年來(lái)出現(xiàn)了一個(gè)嶄新的醫(yī)學(xué)科學(xué)方向-免疫代謝學(xué)[2]，主要研究?jī)?nèi)容為免疫與代謝在生理及各種疾病中的相互影響。研究發(fā)現(xiàn)，適應(yīng)性免疫調(diào)節(jié)尤其是CD4+T淋巴細(xì)胞亞群在2 型糖尿病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[3]。CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群根據(jù)其功能和產(chǎn)生細(xì)胞因子的類(lèi)型，可以分為促炎性Th1 細(xì)胞和抗炎性Th2 細(xì)胞。本文通過(guò)比較健康人群與初發(fā)2 型糖尿病患者外周血Th1 和Th2 的表達(dá)差異，分析其相關(guān)性并為進(jìn)一步探索免疫機(jī)制在2 型糖尿病發(fā)病過(guò)程中的作用提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2021 年7-11 月在寧波市第一醫(yī)院內(nèi)分泌門(mén)診就診的2型糖尿病患者作為觀察組，其中男13 例，女17 例；年齡（48.0±12.3）歲。另選擇同期無(wú)糖耐量、尿酸及高胰島素血癥等代謝指標(biāo)異常的正常志愿者10 例作為健康對(duì)照組，男5 例，女5 例；年齡（39.0±11.5）歲。兩組的性別、年齡等一般情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，且已獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有檢測(cè)均獲得患者的知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合WHO 2 型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡≥18 歲；（2）體質(zhì)量指數(shù)（BMI）≥19 kg/m2；（3）簽署知情同意書(shū)；（4）未使用過(guò)任何降糖藥物（包括各類(lèi)中藥）。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）受檢者本人或直系親屬有自身免疫性疾病史（如1 型糖尿病、風(fēng)濕性疾病等）；（2）近期有不明原因發(fā)熱；（3）存在感染等其他原因引起的炎癥狀態(tài)；（4）腫瘤患者。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本和數(shù)據(jù)采集 記錄所有研究對(duì)象一般資料，包括性別、年齡、身高及BMI；測(cè)量頸圍、腰圍、臀圍，測(cè)量?jī)?nèi)臟脂肪面積和皮下脂肪面積；抽取空腹（空腹10 h 以上）靜脈采血，以貝克曼au5800生化分析儀檢測(cè)肝腎功能、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）；羅氏Cobas E602 全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)空腹胰島素、空腹C肽；糖化血紅蛋白分析儀檢測(cè)糖化血紅蛋白，希森美康xn9000 全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)血常規(guī)（白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞絕對(duì)值和淋巴細(xì)胞絕對(duì)值）。

1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血Th1 和Th2 細(xì)胞 取肝素抗凝全血125 l，加入RPMI 1640 培養(yǎng)液125 l，1 l 佛波酯/離子霉素混合物（250×，杭州聯(lián)科生物）和1 l 布雷非德菌素/莫能霉素混合物（250×，杭州聯(lián)科生物），37 ℃孵育箱中培養(yǎng)4～6 h 后收集細(xì)胞。用人抗CD3（FITC，克隆號(hào)：OKT3，聯(lián)科生物）和抗人CD8（PerCP-Cy5.5，克隆號(hào)：RPAT8，聯(lián)科生物）進(jìn)行細(xì)胞表面染色，分別加入抗人IFN-（PE，克隆號(hào)：4SB3，聯(lián)科生物），抗人IL-4（APC克隆號(hào)：8D48，聯(lián)科生物）進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)因子染色。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析，以CD4+IFN-+/CD4+T表示Th1 占CD4+T 細(xì)胞的比例，CD4+IL-4+/CD4+T 表示Th2 占CD4+T 細(xì)胞的比例。用Flow jo 軟件分析數(shù)據(jù)。

1.3.3 胰島素抵抗指數(shù) 穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估的胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）=空腹血糖×空腹胰島素/22.5，穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估的胰島 細(xì)胞功能指數(shù)（HOMA-）=20×空腹胰島素/（空腹血糖－3.5）。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 25.0 軟件處理數(shù)據(jù)。正態(tài)分布的計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t 檢驗(yàn)；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)以M（P25，P75）表示，比較采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)；相關(guān)因素分析采用Spearman 相關(guān)性分析。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 兩組身高、頸圍、臀圍、UA、TC、TG、LDL-C、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＞0.05）。觀察組體質(zhì)量、BMI、腰圍、內(nèi)臟脂肪面積、皮下脂肪面積、空腹血糖、空腹胰島素、空腹C 肽、HOMA-IR 及糖化血紅蛋白均高于對(duì)照組（均P＜0.05），HOMA-、HDL-C 均低于對(duì)照組（均P ＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組外周血Th1、Th2 和Th1/Th2比值 與對(duì)照組相比，觀察組Th1 在外周血CD4+T 淋巴細(xì)胞中的比例、Th1/Th2 比值均升高（均P ＜0.05），Th2 在CD4+T 淋巴細(xì)胞中的比例降低（P ＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組Th1、Th2 和Th1/Th2 比較

2.3 外周血Th1、Th2 和Th1/Th2 與HOMA-IR、HOMA-和糖化血紅蛋白的相關(guān)性分析 Spearman 分析顯示，人體外周血Th1 與Th2 比例呈負(fù)相關(guān)（r=－0.358，P=0.023），Th2 比例與HOMA-呈正相關(guān)（r=0.391，P=0.013），Th1/Th2與 HOMA-呈負(fù)相關(guān)（r=－ 0.438，P=0.005），與 HOMA-IR呈正相關(guān)（r=0.322，P=0.043），與糖化血紅蛋白呈正相關(guān)（r=0.349，P=0.027），見(jiàn)表3。

表3 Th1、Th2 和Th1/Th2 與HOMA-IR、HOMA-和糖化血紅蛋白的相關(guān)性

3 討論

2 型糖尿病的發(fā)病是一個(gè)復(fù)雜的病理過(guò)程，2 型糖尿病患者存在免疫異常及器官特異性抗體的改變。在2 型糖尿病發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)脂肪組織中巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)增加，相關(guān)炎性細(xì)胞因子表達(dá)上升，而Wu 等[4]及Kintscher 等[5]的研究結(jié)果分別證實(shí)了T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)早于巨噬細(xì)胞的出現(xiàn)。Nishimura 等[6]研究再次證實(shí)了T淋巴細(xì)胞在脂肪組織炎癥的起始階段即已介入，并且與該炎癥所介導(dǎo)的糖耐量異常和胰島素抵抗的進(jìn)展變化一致。上述研究結(jié)果均提示了T 淋巴細(xì)胞在2 型糖尿病發(fā)病的上游啟動(dòng)和維持過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。

本研究納入的2 型糖尿病均為初發(fā)患者，糖化血紅蛋白均值為6.59%，BMI、腰圍、內(nèi)臟脂肪面積及HOMA-IR均比對(duì)照組明顯升高，這說(shuō)明在2 型糖尿病初發(fā)階段胰島素抵抗已經(jīng)參與到發(fā)病過(guò)程中，而HOMA-也同時(shí)降低，提示在胰島素抵抗的同時(shí)合并胰島功能不足。分析其原因可能為增多的脂肪加重了慢性炎癥，使胰島素敏感性下降，刺激胰島素抵抗發(fā)生，促使患者血糖升高，高血糖刺激機(jī)體分泌更多的胰島素，加重了胰島的負(fù)擔(dān)，從而導(dǎo)致胰島功能不足。龐邵杰等[7]研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)糖尿病患者胰島素抵抗指數(shù)高于正常人群，并且在糖尿病前期已經(jīng)出現(xiàn)了胰島素抵抗。

本研究還發(fā)現(xiàn)2 型糖尿病患者較正常對(duì)照組Th1 升高、Th2 降低以及Th1/Th2 比值升高。研究顯示，CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群比例的平衡是維持免疫穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵，其包括Thl 細(xì)胞和Th2 細(xì)胞，Th1淋巴細(xì)胞表現(xiàn)為促炎作用，Th2 淋巴細(xì)胞則為抗炎細(xì)胞，二者之間的比例平衡是維持免疫穩(wěn)態(tài)基礎(chǔ)[8-9]。本研究結(jié)果提示觀察組促炎作用增強(qiáng)，抗炎作用減弱，并且出現(xiàn)促炎和抗炎細(xì)胞比例失衡，這與盛志新等[10]結(jié)果一致。

在相關(guān)分析方面，本研究發(fā)現(xiàn)人群中Th1 與Th2 呈負(fù)相關(guān)，支持目前的相關(guān)理論，即Th1 與Th2 作用互相拮抗。同時(shí)發(fā)現(xiàn)Th2 與胰島 細(xì)胞功能指數(shù)成正相關(guān)，Th1/Th2 與胰島素抵抗指數(shù)、糖化血紅蛋白正相關(guān)，與胰島 細(xì)胞功能指數(shù)負(fù)相關(guān)，這提示Th1/Th2的升高和Th2的下降可能參與了胰島素抵抗加重和胰島 細(xì)胞功能下降的過(guò)程，但是具體的機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究。而其他衡量肥胖的指標(biāo)如BMI、腰圍和內(nèi)臟脂肪面積等均未發(fā)現(xiàn)與Th1 和Th2 有相關(guān)性，分析可能與納入的2 型糖尿病患者患病時(shí)間不長(zhǎng)，并且血糖不夠高有關(guān)。