李 偉，潘 婉△，楊 錢，郭 瑯，鄭永強，寧望成，崔騰斌

1.湖北省宜昌市第二人民醫(yī)院/三峽大學(xué)第二人民醫(yī)院心內(nèi)科，湖北宜昌 443000；2.湖北省宜昌市第二人民醫(yī)院/三峽大學(xué)第二人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖北宜昌 443000；3.三峽大學(xué)附屬仁和醫(yī)院心血管內(nèi)科，湖北宜昌 443000；4.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團第二師庫爾勒醫(yī)院心血管內(nèi)科，新疆庫爾勒 841000

慢性心力衰竭(CHF)是常見的心血管疾病并發(fā)癥，CHF患者因多種原因引起心肌損傷，心肌收縮力減弱，無法維持正常心排血量，臨床表現(xiàn)為乏力、呼吸困難、體液潴留等[1]。近年來，CHF發(fā)病率逐年增加，雖然臨床對CHF的診斷和治療已有較大進展，但死亡率仍很高，患者5年病死率達40%～50%[2]。因此，及早評估CHF患者的預(yù)后及轉(zhuǎn)歸情況，及時采取相應(yīng)治療措施，對改善CHF患者預(yù)后有重要意義。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是長度超過200個核苷酸、無蛋白質(zhì)編碼功能的RNA，可多水平調(diào)控基因表達[3]。研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA肺腺癌轉(zhuǎn)錄子1(MALAT1)與多種心血管疾病如冠心病、先天性心臟病、心肌缺血/再灌注(I/R)損傷等有關(guān)，可能成為心血管疾病的生物標(biāo)志物[4]。lncRNA同時還可調(diào)節(jié)微小RNA(miRNA)表達。相關(guān)研究顯示，lncRNA MALAT1在I/R損傷中表達水平上升，敲低lncRNA MALAT1水平可提高微小RNA-203(miR-203)水平，lncRNA MALAT1可能通過負(fù)調(diào)節(jié)miR-203表達在I/R過程中參與心肌細(xì)胞炎癥和心肌損傷。目前，有關(guān)lncRNA MALAT1、miR-203與CHF關(guān)系的報道較少，本研究旨在探討lncRNA MALAT1、miR-203在CHF患者中的表達及臨床意義，以期為改善CHF患者預(yù)后提供新的研究方向。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取湖北省宜昌市第二人民醫(yī)院/三峽大學(xué)第二人民醫(yī)院(下稱本院)2018年5月至2020年2月收治的68例CHF患者作為CHF組。CHF組中男36例，女32例；年齡45～70歲，平均(57.62±8.73)歲；缺血性心臟病22例，擴張型心肌病13例，瓣膜性心肌病19例，原發(fā)性高血壓14例；根據(jù)紐約心臟病協(xié)會(NYHA)心功能分級：Ⅱ級26例，Ⅲ級23例，Ⅳ級19例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《中國心力衰竭診斷和治療指南2018》的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；(2)病程>6個月，且經(jīng)治療后病情穩(wěn)定；(3)超聲心動圖顯示，左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)<50%。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并血液疾病者；(2)合并免疫系統(tǒng)疾病者；(3)合并惡性腫瘤者；(4)急性心肌梗死患者。另選取本院同期體檢健康者70例作為對照組，其中，男35例，女35例；年齡47～71歲，平均(58.47±9.51)歲；心臟結(jié)構(gòu)、心電圖及心功能指標(biāo)均無異常。兩組年齡、性別等比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有研究對象及家屬知情同意并簽訂知情同意書。本研究符合《赫爾辛基宣言》。

1.2方法

1.2.1樣品采集及保存 CHF患者于入院次日清晨采集空腹肘靜脈血5 mL，對照組于體檢當(dāng)天采集肘靜脈血5 mL，均經(jīng)3 500 r/min離心10 min，收集上層血清，于-20 ℃保存。

1.2.2實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測兩組血清lncRNA MALAT1、miR-203水平 采用TRIzol試劑[賽默飛世爾科技(中國)有限公司]提取兩組血清樣本中的總RNA，檢測其純度、完整度均滿足要求后，使用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)將血清總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，并以所得cDNA為模板，進行RT-qPCR反應(yīng)。采用2-ΔΔCt法計算血清lncRNA MALAT1、miR-203水平。lncRNA MALAT1、miR-203及相應(yīng)內(nèi)參GAPDH、U6的引物序列見表1。

1.3隨訪觀察 對所有CHF患者進行1年隨訪，記錄CHF患者預(yù)后情況，將因心力衰竭死亡或再次入院定義為不良預(yù)后，患者發(fā)生不良預(yù)后或隨訪結(jié)束為隨訪終點，隨訪截至2021年3月。68例CHF患者隨訪1年，共26例發(fā)生不良預(yù)后。根據(jù)CHF患者血清lncRNA MALAT1、miR-203均值將患者分為lncRNA MALAT1高表達組(≥均值)、lncRNA MALAT1低表達組(<均值)及miR-203高表達組(≥均值)、miR-203低表達組(<均值)。

表1 lncRNA MALAT1、miR-203及內(nèi)參GAPDH、U6的引物序列

2 結(jié) 果

2.1兩組基線資料比較 兩組體質(zhì)量指數(shù)、飲酒史及吸煙史比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；CHF組LVEDD高于對照組，LVEF低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組基線資料比較

2.2兩組血清lncRNA MALAT1、miR-203水平比較 CHF組血清lncRNA MALAT1水平高于對照組，miR-203水平低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組血清lncRNA MALAT1、miR-203水平比較

2.3不同心功能分級CHF患者血清lncRNA MALAT1、miR-203水平比較 心功能分級Ⅲ級、Ⅳ級CHF患者血清lncRNA MALAT1水平高于Ⅱ級患者(P<0.05)，miR-203水平低于Ⅱ級患者(P<0.05)；心功能分級Ⅳ級CHF患者血清lncRNA MALAT1水平高于Ⅲ級患者(P<0.05)，miR-203水平低于Ⅲ級患者(P<0.05)。見表4。

表4 不同心功能分級CHF患者血清lncRNA MALAT1、miR-203水平比較

2.4CHF患者血清lncRNA MALAT1、miR-203水平與LVEF、LVEDD的相關(guān)性 CHF患者血清lncRNA MALAT1水平與LVEF呈負(fù)相關(guān)(P<0.001)，與LVEDD正相關(guān)(P<0.001)；血清miR-203水平與LVEF呈正相關(guān)(P<0.001)，與LVEDD負(fù)相關(guān)(P<0.001)。見表5。

表5 CHF患者血清lncRNA MALAT1、miR-203水平與LVEF、LVEDD相關(guān)性分析

2.5血清lncRNA MALAT1、miR-203水平與CHF患者預(yù)后的關(guān)系 lncRNA MALAT1高表達組(lncRNA MALAT1水平≥1.84,34例)不良預(yù)后發(fā)生率高于lncRNA MALAT1低表達組(lncRNA MALAT1水平<1.84,34例)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，miR-203低表達組(miR-203水平<0.65,34例)不良預(yù)后發(fā)生率高于miR-203高表達組(miR-203水平≥0.65,34例)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表6。

表6 血清lncRNA MALAT1、miR-203水平與CHF患者預(yù)后的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

CHF在全球范圍內(nèi)發(fā)病率和病死率均較高，且隨著人口老齡化，CHF發(fā)病率不斷上升。多數(shù)進行性心臟病患者如心肌病、高血壓心臟病、冠心病等，均可能會發(fā)展成CHF，并最終因CHF死亡[6]。CHF發(fā)病機制較為復(fù)雜，早期臨床癥狀不明顯，該疾病在治療過程中需采取簡單、有效的措施，防止病情惡化，進而減少患者的住院率和病死率[1]，但針對CHF仍缺乏有效的診斷及預(yù)后評估標(biāo)志物。

有研究顯示，lncRNA異常表達與心血管疾病有關(guān)，lncRNA已成為治療心血管疾病的潛在靶點[7]。韓虎魁等[8]研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA miR155HG在CHF患者中呈高表達，其水平可反映患者心力衰竭程度。lncRNA MALAT1可調(diào)節(jié)基因表達的剪接，控制表觀遺傳，其在腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA MALAT1在糖尿病大鼠心肌細(xì)胞中表達升高，敲低lncRNA MALAT1有助于減少糖尿病大鼠的心肌細(xì)胞死亡，改善其心臟功能[9]。在心肌細(xì)胞損傷過程中，lncRNA MALAT1表達水平上調(diào)，抑制其表達能減少脂多糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡及細(xì)胞損傷[10]。陸強等[11]研究發(fā)現(xiàn)，冠心病患者血清lncRNA MALAT1呈高表達，其水平升高是冠心病的獨立危險因素，可作為預(yù)測冠心病預(yù)后的標(biāo)志物。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CHF組血清lncRNA MALAT1水平高于對照組，其水平隨著心功能分級的增加而不斷上升，并與LVEF呈負(fù)相關(guān)，與LVEDD呈正相關(guān)，提示lncRNA MALAT1水平與CHF患者疾病嚴(yán)重程度有關(guān)，其可能通過影響心肌細(xì)胞損傷參與CHF進展。

miR-203位于人染色體14q32-33處，與多種疾病有關(guān)，其在不同疾病中發(fā)揮不同作用。有研究發(fā)現(xiàn)，過表達miR-203可增加Bcl-2表達，減少Bax表達，降低caspase-3、caspase-9的裂解，改善心肌梗死后大鼠的心臟功能，減少梗死面積，并減弱梗死誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[12]。另有研究表明，miR-203上調(diào)可減輕糖尿病性心肌病(DCM)小鼠的心肌肥大、心肌纖維化及心肌細(xì)胞凋亡的程度，降低心肌組織的氧化應(yīng)激水平，改善小鼠的心臟功能障礙，發(fā)揮心臟保護性調(diào)節(jié)劑的作用[13]。miR-203還可通過影響細(xì)胞凋亡阻止脂多糖引起的心臟損傷，可能成為治療心臟病的潛在靶點[14]。本研究結(jié)果顯示，CHF組血清miR-203水平低于對照組，隨著心功能分級的增加miR-203水平下降，其與LVEF呈正相關(guān)，與LVEDD呈負(fù)相關(guān)，提示miR-203水平能夠間接反映CHF患者疾病嚴(yán)重程度，miR-203可能通過參與心肌細(xì)胞損傷過程在CHF疾病進展中發(fā)揮作用。

lncRNA MALAT1可負(fù)調(diào)控miR-203表達，從而影響I/R過程中的心肌細(xì)胞炎癥和心肌損傷[5]。ZHU等[15]研究顯示，冠心病患者血清lncRA MALAT1與miR-203呈負(fù)相關(guān)，患者經(jīng)藥物洗脫支架-經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(DES-PCI)后，2年內(nèi)再狹窄患者lncRNA MALAT1水平高于未再狹窄患者，lncRNA MALAT1及其靶標(biāo)miRNA可能有助于控制DES-PCI后冠心病患者的再狹窄風(fēng)險。本研究結(jié)果顯示，lncRNA MALAT1高表達組不良預(yù)后發(fā)生率高于lncRNA MALAT1低表達組，miR-203低表達組不良預(yù)后發(fā)生率高于miR-203高表達組，提示lncRNA MALAT1及miR-203水平與CHF患者預(yù)后有關(guān)，可能成為預(yù)測CHF患者再住院、死亡情況的標(biāo)志物。

綜上所述，CHF患者血清lncRNA MALAT1呈高表達，miR-203呈低表達，二者均與患者心功能及不良預(yù)后有關(guān)，可能成為CHF患者預(yù)后評估的潛在標(biāo)志物。但本研究未對lncRNA MALAT1與miR-203的關(guān)系進行研究，今后將進行動物實驗或細(xì)胞實驗深入探討二者的關(guān)系及相關(guān)機制。