余祖玲， 余祖華， 賈艷艷， 廖成水， 李 旺， 李元曉， 何萬領(lǐng)， 丁 軻,

(1.河南科技大學 功能微生物與精準營養(yǎng)實驗室，河南 洛陽 471023; 2. 洛陽市活載體生物材料與動物疫病防控重點實驗室， 河南 洛陽 471023)

0 引言

纖維素酶是一類可以使纖維素分解成纖維二糖和葡萄糖的酶系的總稱，包括羧甲基纖維素酶、微晶纖維素酶和β-葡萄糖苷酶。動物飼料中含有大量的纖維素，但除反芻動物外，其他動物很少分泌纖維素酶消化分解纖維素[1]。因此，篩選具有纖維素酶活的菌株，并將其用于單胃動物生產(chǎn)，能夠促進單胃動物對飼料中纖維素的利用率，也能夠提高飼料中纖維素的添加量，從而提高經(jīng)濟效益[2]。自1912 年首次從土壤中分離出可降解纖維素的微生物[3]以來，陸續(xù)有學者分離鑒定出能降解纖維素的微生物，包括真菌、細菌以及原生動物[4-5]等。文獻[6]分離的暹羅芽孢桿菌(Bacillussiamensis)H-7 羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose, CMC)酶活和濾紙酶活(filter paper activity, FPA)最高分別可達0.18 U/mL 和0.44 U/mL。文獻[7]篩選的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilies)Lu14的CMC酶活為1.106 U/mL， FPA酶活為0.76 U/mL。但由于產(chǎn)酶量較低等原因，無法滿足工業(yè)生產(chǎn)的需求。因此，在自然界中篩選纖維素降解能力強的菌株仍然是一件必要且有意義的工作。文獻[8]報道過產(chǎn)酶菌株,凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)便是其中之一。凝結(jié)芽孢桿菌進入腸道可以分泌多種有益物質(zhì),如α-半乳糖苷酶、蛋白酶、木聚糖酶等[9],還可以通過發(fā)酵產(chǎn)乳酸，具有耗能少、產(chǎn)率高、經(jīng)濟效益高等優(yōu)點[10],可以替代抗生素調(diào)控機體腸道菌群生態(tài)平衡，抑制腸道有害菌群，提高消化吸收能力,從而提高動物機體免疫力和生產(chǎn)性能[11]。凝結(jié)芽孢桿菌屬嗜熱菌,生存彈性優(yōu)良，可在較高溫度環(huán)境下發(fā)酵[12]，較適合生產(chǎn)需要，因此受到廣泛關(guān)注。美國飼料管理協(xié)會與中國農(nóng)業(yè)部相繼將凝結(jié)芽孢桿菌列為養(yǎng)殖生產(chǎn)中可直接飼喂的微生物制劑[13]，同時也將凝結(jié)芽孢桿菌作為新資源食品公示[14]。早在2005 年，中國食品和藥品監(jiān)督管理局授予了青島東海藥業(yè)有限公司凝結(jié)芽孢桿菌活菌片的新藥證書[15]。本文主要根據(jù)益生菌的生物學特性，以從土壤中分離出來的芽孢桿菌為研究對象，將其降解纖維素能力及耐酸耐高溫能力作為主要評價指標，輔以對人工胃液、膽鹽脅迫的耐受性以及耐藥能力進行綜合評價，以期為芽孢桿菌的新型飼料微生態(tài)制劑產(chǎn)品的開發(fā)提供研發(fā)素材。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品：采集于河南科技大學玉米試驗田及紅葉李樹林根際的深度2～5 cm的不同位置土壤樣品。

分離培養(yǎng)基(1 L)：硫酸亞鐵0.01 g，磷酸氫二鉀0.4 g，氯化鉀0.5 g，硝酸鈉3 g，羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)10 g，七水硫酸鎂0.5 g，121 ℃高壓滅菌25 min。

增菌培養(yǎng)基(1 L)：氯化鈉5 g，牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，馬鈴薯浸出粉5 g，葡萄糖15 g，氯化鈉5 g，115 ℃高壓滅菌20 min，加入用無水乙醇溶解的0.02%(質(zhì)量分數(shù))的硫酸鏈霉素。

發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基(1 L)：硫酸銨2 g，磷酸二氫鉀4 g，羧甲基纖維素鈉10 g，蛋白胨3 g，七水硫酸鎂0.3 g，酵母膏0.2 g，121 ℃高壓滅菌25 min。

濾紙培養(yǎng)基(1 L)：定性濾紙(長6 cm、寬1 cm)3條/錐形瓶，硫酸銨1 g，七水硫酸鎂0.5 g，磷酸氫二鉀1 g，酵母浸粉0.1 g，121 ℃高壓滅菌25 min。

MRS(de Man,Rogosa,Sharpe)培養(yǎng)基(1 L)：葡萄糖20 g，胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，牛肉膏10 g，四水硫酸錳0.25 g，七水硫酸鎂0.58 g，Tween-80 1 mL，磷酸氫二鉀2.6 g，乙酸鈉5 g，檸檬酸銨2 g。

固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基的基礎上添加質(zhì)量分數(shù)為1.2%～1.5%的瓊脂粉。

主要試劑為模擬胃液(1 L)：胰蛋白胨8.3 g，葡萄糖3.5 g，氯化鈉2.05 g，氯化鈣20.11 g，氯化鉀0.37 g，磷酸二氫鉀0.6 g，豬膽鹽 0.05 g，溶菌酶 0.1 g，胃蛋白酶13.3 g，用鹽酸分別調(diào)pH值至1.5和2.5。

其他試劑：0.5%(質(zhì)量分數(shù))剛果紅染液、 1 mol/L NaCl洗脫液、 0.1 mol/L-pH4.5乙酸-乙酸鈉緩沖溶液、3，5-二硝基水楊酸、 1.0 mg/mL葡萄糖標準溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

微量生化發(fā)酵管：葡萄糖、蔗糖等36種發(fā)酵管購自杭州天和微生物試劑有限公司。

聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)試劑：Taq酶(5 U/μL)、DL2000、Goodview核酸染料、瓊脂糖凝膠，購自北京方寶生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株的分離篩選

將采集的土壤樣品進行編號，分別稱取5 g樣品與100 mL生理鹽水混勻，37 ℃、200 r/min振搖1 h。然后，各取 1 mL上述處理組，用生理鹽水進行10倍稀釋，每個稀釋梯度取 100 μL菌液涂布于分離培養(yǎng)基中，挑選生長良好的菌株轉(zhuǎn)接至增菌液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，37 ℃培養(yǎng)24 h，離心取沉淀與100 μL生理鹽水于1.5 mL試管中吹吸混勻，然后吸取10 μL轉(zhuǎn)接于分離培養(yǎng)基中， 37 ℃培養(yǎng)2～3 d。取出后，滴加5 mL、0.5%(質(zhì)量分數(shù))的剛果紅染液染色，用1 mol/L的氯化鈉溶液脫色，最后根據(jù)有無水解圈，初步得到纖維素降解菌，通過油鏡觀察菌株的顯微形態(tài)，將符合芽孢桿菌的菌株進行傳代純化并保存。

1.2.2 濾紙降解測定

觀察并記錄菌落周圍的透明圈直徑(H)與菌落直徑(C)比值的大小。將H/C值較大的菌株接種到增菌液體培養(yǎng)基中，于37 ℃搖床培養(yǎng)制備菌懸液。將菌懸液分別以2%(體積分數(shù))的接種量接種到100 mL濾紙條培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)，并觀察濾紙條崩解情況，每個菌株設3個技術(shù)重復。根據(jù)濾紙崩解情況對菌株纖維素降解能力進行判斷。“++++”表示濾紙呈半清狀；“+++”表示濾紙呈糊狀；“++”表示濾紙呈不定狀；“+”表示濾紙邊緣已膨脹[12]。

1.2.3 纖維酶活力測定

采用3，5-二硝基水楊酸法測定纖維素酶活(CMC)和濾紙酶活(FPA)，調(diào)整菌株濃度的OD540為0.5，然后以1∶100的比例接種到產(chǎn)酶培養(yǎng)基上制備粗酶液，在50 ℃水浴反應條件下，室溫測量計算產(chǎn)糖量。1 min水解底物產(chǎn)生1 mg葡萄糖所需酶量，單位為U/mL。

計算公式：酶活(U/mL)=(P×V1)/(V2×T)，

其中：P為葡萄糖質(zhì)量濃度，mg/mL；V1為測定總體積，mL；V2為樣品酶液體積，mL；T為反應時間，min。

1.2.4 菌株鑒定

生理生化鑒定。參照《伯杰細菌鑒定手冊》[16]和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》進行，包括運動性、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等，以及甘露醇、明膠液化、甲基紅試驗、V-P試驗、吲哚試驗、淀粉分解、5% NaCl試驗等。

16S 核糖體脫氧核糖核酸(ribosomal deoxyribonucleis acid,rDNA)的測定及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建。取1.5 mL滅過菌的離心管加入500 μL生理鹽水，挑取單菌落于離心管中混勻，100 ℃以上沸水浴15 min，隨即置于冰盒5 min降溫，使細胞壁破裂釋放全部基因組。12 000 r/min離心2 min，吸取上清液，即目的DNA。擴增16S rDNA，所用引物為細菌通用引物。16S rDNA反應條件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 45 s；54 ℃ 45 s；72 ℃ 2 min；30個循環(huán)，72 ℃ 10 min延伸，4 ℃保溫。擴增完成后，用1%(質(zhì)量分數(shù))瓊脂糖凝膠電泳對 PCR產(chǎn)物進行檢測，電泳結(jié)束后，在凝膠成像系統(tǒng)中觀察到約1 450 bp處出現(xiàn)明亮條帶，與預期結(jié)果一致。將 PCR 產(chǎn)物送至上海生物工程有限公司進行測序。將所測得的序列在Genbank數(shù)據(jù)庫進行 BLAST分析，獲得相似性≥98%的16S序列，利用BLAST軟件進行比對，通過Mega7.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)樹，以16S rDNA基因序列同源性A>98%為鑒定標準。

1.2.5 耐膽鹽試驗

將過夜培養(yǎng)的菌液按6%的接種量分別接種于膽鹽質(zhì)量分數(shù)為0%、1%、2%、3%、4%的MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫培養(yǎng)12 h。取樣0.2 mL，在裝有1.8 mL 0.1%的瓊脂生理鹽水的試管中倍比稀釋，選擇適宜稀釋濃度的稀釋液20 μL點樣于MRS培養(yǎng)基，每個濃度設3個重復。37 ℃培養(yǎng)10 h，培養(yǎng)結(jié)束后對平板上的菌落進行計數(shù)，取3組重復組的菌落數(shù)平均值進行分析，計算存活率。

1.2.6 耐酸試驗

將過夜培養(yǎng)的菌液吸取1 mL于1.5 mL滅過菌的離心管中，5 000 r/min 條件下離心 10 min，所得菌體沉淀用無菌生理鹽水洗滌2次，再重新接種于無菌生理鹽水(調(diào)pH 值分別為 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0)中，于 37 ℃搖床培養(yǎng) 4 h。然后，取 0.2 mL 培養(yǎng)液稀釋于 1.8 mL 0.1%的瓊脂生理鹽水中，進行梯度稀釋，取適宜濃度的稀釋液20 μL點樣于MRS培養(yǎng)基上，每個稀釋度做3個重復，在 37 ℃靜置培養(yǎng) 12 h，取3組重復組的菌落數(shù)平均值進行分析，計算存活率。

1.2.7 耐胃液試驗

取稀鹽酸1 moL/mL，加水稀釋，調(diào)節(jié)pH至1.5，每100 mL加入1 g胃蛋白酶，將溶液混勻后過濾備用。將過夜培養(yǎng)的菌液按6%的接種量置于離心管中離心去上清后轉(zhuǎn)接到模擬胃液中，分別在0 min、60 min、180 min后取0.2 mL，與1.8 mL 0.1%的瓊脂生理鹽水倍比稀釋，取適宜濃度20 μL在MRS培養(yǎng)基上點樣培養(yǎng)，每個稀釋度設3個重復，37 ℃靜置培養(yǎng)12 h后取出，取3組重復組的菌落數(shù)平均值進行分析，計算存活率。

1.2.8 耐高溫試驗

準備滅過菌的試管分別進行編號，將過夜培養(yǎng)菌液按6%的接種量接種到試管中，設置水浴鍋溫度為100 ℃，設時間梯度為0 min、3 min、6 min、9 min、12 min、15 min，每個時間梯度都設3個重復，在不同的時間梯度，將相對應的試管取出，取0.2 mL與1.8 mL 0.1%的瓊脂生理鹽水混勻，取20 μL點樣在MRS培養(yǎng)基上，設3個重復試驗，37 ℃靜置培養(yǎng)12 h后，取3組重復組的菌落數(shù)平均值進行分析，計算存活率。

1.2.9 藥敏試驗

菌種活化后，用滅菌的生理鹽水將菌液稀釋為 1.0× 108cfu/mL的菌懸液，然后吸取 100 μL涂布于MRS平板上，待表面稍干后，放入抗生素藥敏片，每種抗生素藥敏片都做 3 個重復。37 ℃培養(yǎng) 24 h，觀察平板上藥物的抗菌活性，記錄各抗生素的抑菌圈直徑大小。試驗重復3次，取平均值，按照抑菌圈直徑標準進行菌株的藥敏性評定。

1.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

存活率=(試驗組活菌數(shù)/對照組活菌數(shù))×100%。

數(shù)據(jù)采用SPSS22.0進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以“均數(shù)±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株初篩結(jié)果

將處理后的樣品稀釋適當濃度后涂布于分離培養(yǎng)基，分離出生長良好的菌株共32株，用剛果紅染色觀察發(fā)現(xiàn)共有7株菌產(chǎn)生酶解圈，通過計算水解圈直徑和菌落直徑的比值(H/C)來初步判定降解纖維素能力較強的菌株，結(jié)果如表1所示。

表1 分離菌株的H/C結(jié)果

2.2 菌株濾紙酶活結(jié)果

纖維素降解菌株的濾紙條崩解試驗結(jié)果見表2。由表2可知：菌株MRS-913將濾紙條崩解為不完全的糊狀，培養(yǎng)至第5天時，已經(jīng)完全崩解為糊狀，菌株MRS-19和MRS-04在培養(yǎng)至第6天時，濾紙條崩解為不完全的糊狀，其余菌株崩解效果較差，只能崩解濾紙邊緣。將7株菌株與對照組相比，菌株MRS-913崩解效果較為突出。

2.3 菌株纖維素酶活測定結(jié)果

將濾紙崩解試驗得到的7株菌株接種到產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)3～4 d，制備粗酶液并測定其纖維素酶的活性，篩選出3株產(chǎn)酶活性較強的菌株，測定結(jié)果見表3。由表3可知：MRS-913的CMC和FPA均最好，挑選其做進一步的鑒定。

表2 菌株濾紙條崩解情況

表3 纖維素酶活測定結(jié)果 U/mL

圖1 菌株MRS-913顯微形態(tài)圖(1 000×)

2.4 菌株MRS-913鑒定結(jié)果

2.4.1 形態(tài)學鑒定結(jié)果

菌株MRS-913在分離培養(yǎng)基上生長良好，菌落為灰偏白色、圓形，表面濕潤有光澤，邊緣整齊，中心突起。顯微鏡下觀察可見菌體呈紫色鏈長桿狀，端生芽孢，無鞭毛且芽孢囊沒有明顯膨大(見圖1)。

2.4.2 生理生化鑒定結(jié)果

菌株MRS-913生理生化試驗結(jié)果如表4所示，菌株MRS-913接觸酶、過氧化氫酶、淀粉酶陽性；V-P試驗反應陰性為兼性厭氧菌；吲哚試驗呈陰性；7%氯化鈉生長陽性；明膠液化陰性。將上述鑒定結(jié)果與《伯杰細菌鑒定手冊》和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》進行對照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌株屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)。

表4 菌株MRS-913生理生化鑒定結(jié)果

2.4.3 16S rDNA鑒定結(jié)果

菌株MRS-913經(jīng)16S rDNA測序后，登錄Genbank，登錄號為MZ642313。利用MEGA7.0軟件與芽孢桿菌屬內(nèi)相關(guān)種進行同源性比對，16S rDNA序列同源性在95%以下可以認為屬于不同屬；同源性為95%～98%可以認為是同屬不同種；同源性大于99%則認為屬于同一種。如圖2所示，經(jīng)BLSAT同源性比較，MRS-913菌與凝結(jié)芽孢桿菌的親緣關(guān)系最近，同源性為99.93%，所以此菌株應歸屬于凝結(jié)芽孢桿菌。

2.4.4 耐膽鹽試驗結(jié)果

凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913耐膽鹽試驗結(jié)果如圖3所示，由圖3可知：凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913在膽鹽質(zhì)量分數(shù)為0%～4%時，隨著膽鹽質(zhì)量分數(shù)的增加，菌株的存活率降低。培養(yǎng)了10 h后，在膽鹽質(zhì)量分數(shù)高達4%的培養(yǎng)基中菌株存活率依然有32.8%，可見凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913對膽鹽有著較強的耐受力。

2.4.5 耐酸試驗結(jié)果

凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913耐酸試驗結(jié)果如圖4所示。由圖4可知：隨著pH值的降低，菌株的存活率降低。在培養(yǎng)4 h后，當pH值為1時，菌株的存活率為55.9%。與pH值為7時菌株的存活率對照，發(fā)現(xiàn)當pH值為5時，菌株存活率高達93.4%。由此可見，凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913對酸有較強的耐受力。

圖2 菌株MRS-913基于16S rDNA序列系統(tǒng)進化樹

圖3 凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913耐膽鹽試驗結(jié)果

2.4.6 耐胃液試驗結(jié)果

通常動物體胃酸pH為1.5～3.0，食物在胃中停留時間為1～2 h。本試驗設計了兩組pH，每組設置了3個時間點，探究凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913的胃液耐受力，結(jié)果如圖5所示。由圖5可以看出：凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913在pH為1.5的模擬胃液中能夠存活180 min，存活率為62.7%。在pH為2.5的模擬胃液環(huán)境中能夠存活180 min，存活率達74.8%。由此可見，凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913的芽孢耐受胃酸的能力很強。

2.4.7 耐高溫試驗結(jié)果

耐高溫屬性賦予了凝結(jié)芽孢桿菌食品加工全新定義的功能，結(jié)合現(xiàn)有文獻，設計本試驗。凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913的高溫耐受結(jié)果如圖6所示，將溫度設置為100 ℃，同時在0～15 min設置了6個時間點。在100 ℃水浴15 min后，凝結(jié)芽胞桿菌MRS-913的存活率為54.0%，說明其對高溫有著較強的耐受力。

2.4.8 耐藥試驗結(jié)果

判斷菌株的益生特性，還需要測試其對抗生素的敏感性。凝結(jié)芽胞桿菌MRS-913的藥物敏感性試驗結(jié)果如表5所示。由表5可知：除對桿菌肽、奧普托欣、林可霉素不敏感；對阿奇霉素低敏；對多黏菌素B、鏈霉素中度敏感；對紅霉素、卡那霉素高敏外，對其他7種抗生素都極高敏。

3 討論

本研究通過采集土壤樣品進行篩選，最終篩選出了一株纖維素酶活性較高的菌株MRS-913，其酶活力可達(59.68±1.43) U/mL，降解纖維素能力較強。探究了凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913的耐人工胃液、耐膽鹽、耐高溫、耐酸以及抗生素的敏感性能。發(fā)現(xiàn)凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913對于胃液的耐受能力較強，在pH2.5的胃液環(huán)境中能夠存活180 min，存活率高達74.8%，高于文獻[17]分離的凝結(jié)芽孢桿菌N1在模擬胃液處理120 min后的存活率。文獻[18]研究發(fā)現(xiàn)，凝結(jié)芽孢桿菌13002在0.3%(質(zhì)量分數(shù))的膽鹽試驗中，作用24 h的活菌總數(shù)出現(xiàn)反彈，存活率不降反升，達到81.4%，該試驗結(jié)果可推測出凝結(jié)芽孢桿菌可以在腸道存活并且有極大可能增殖。文獻[19]研究證實凝結(jié)芽孢桿菌最高可耐受3.0%(質(zhì)量分數(shù))膽鹽，本研究發(fā)現(xiàn)凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913最高可耐受4%(質(zhì)量分數(shù))的膽鹽，在培養(yǎng)了10 h之后存活率依然有32.8%。由此可見，小腸的膽鹽環(huán)境對此菌株沒有抑制作用。高溫在實際生產(chǎn)中嚴重影響益生菌活性，文獻[17]在凝結(jié)芽孢桿菌13002耐高溫試驗中，僅探究了最高溫度80 ℃下的耐受性能，且認為在60 ℃時的耐受性能最高。與文獻[20]發(fā)現(xiàn)凝結(jié)芽孢桿菌NJh032在100 ℃處理10 min后存活率65.35%的結(jié)果相較，MRS-913在100 ℃的水浴高溫環(huán)境下可存活15 min,存活率為54.0%，存活率相近但耐受時間更長，體現(xiàn)出了優(yōu)秀的高溫耐受性，可以抵御生產(chǎn)過程中高溫處理的影響。文獻[21]從奶粉中分離出數(shù)株凝結(jié)芽孢桿菌,在pH2.0的酸性環(huán)境下存活率最高，高于本試驗結(jié)果，但對高溫的耐受能力低于本試驗結(jié)果。由此分析,在不同環(huán)境下分離出的菌株對于酸或高溫環(huán)境的耐受能力差異明顯。MRS-913在pH為1.0的酸環(huán)境中可存活4 h，存活率為55.9%，較適應工業(yè)食品的發(fā)酵。

凝結(jié)芽孢桿菌是一種在腸道發(fā)揮益生作用的革蘭氏陽性菌，文獻[22]發(fā)現(xiàn)畜禽飼料中的抑菌藥可能會影響飼用凝結(jié)芽孢桿菌的益生效果。人類食用性的凝結(jié)芽孢桿菌的使用更要科學用藥，規(guī)避“配伍禁忌”。在凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913對抗生素的敏感性試驗中，選用的抗生素對凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913都有較高的抑制能力，凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913除對桿菌肽、奧普托欣、林可霉素不敏感，對其他常見抗生素均表現(xiàn)敏感性，表明凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913不能和這些抗生素共用，否則會影響凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913發(fā)揮益生作用。

分離出的凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913可作為活菌添加劑添加到動物飼料中，在克服消化道的苛刻條件后，通過胃液環(huán)境在小腸定植，在腸道內(nèi)定植后會分泌纖維素酶，促進飼料消化吸收，降低料肉比。凝結(jié)芽孢桿菌通過調(diào)節(jié)微生物群組成、宿主免疫和代謝，對腸道疾病具有治療作用，如急性腹瀉、腸應激綜合征等，此外，毒理學實驗和大量臨床觀察表明，凝結(jié)芽孢桿菌是安全的，沒有致突變性致畸性活遺傳毒性[23]。在生產(chǎn)、儲存、運輸和管理方面都具高穩(wěn)定性，其孢子形成能力較強，必然將在未來對人類腸道疾病的治療中發(fā)揮更重要的作用。

4 結(jié)論

從土壤中分離出一株產(chǎn)纖維素酶的凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913，該菌株在100 ℃水浴15 min，其存活率為54.0%，可耐受質(zhì)量分數(shù)為4%的膽鹽，在pH為1.0的酸性環(huán)境中可存活4 h，存活率為55.9%；在pH分別為1.5、2.5的模擬胃液中能夠存活180 min，存活率分別為62.7%和74.8%。且對桿菌肽、奧普托欣、林可霉素不敏感；對阿奇霉素低度敏感；對多黏菌素B、鏈霉素中度敏感，對四環(huán)素等極高度敏感。以上結(jié)果可以初步判定，分離出的凝結(jié)芽孢桿菌MRS-913具有優(yōu)良的益生特性，表現(xiàn)出較強的耐高溫、耐酸、耐胃液、耐膽鹽性能，可作為微生態(tài)制劑進一步開發(fā)利用。