畢方方，唐陽國，方治山，何寶祥，杜玉蘭

（1.廣西大學(xué)行健文理學(xué)院，廣西南寧 530005；2.廣西大學(xué)動物科技學(xué)院，廣西南寧 530005；3.廣西畜牧研究所，廣西南寧 530001）

奶水牛分娩是一個非常重要的生理活動，從此開始泌乳，奶水牛在此后數(shù)周內(nèi)經(jīng)歷物質(zhì)代謝的巨大挑戰(zhàn)。雖然奶水牛分娩前后的血液生化指標(biāo)動態(tài)變化研究已有少量報道（劉明江等，2011；杜玉蘭等，2010；韋志堅等，2010），而瘦素（LEP）和氧化/抗氧化指標(biāo)動態(tài)變化的報道較少（BAN-TOKUDA等，2006），因此，為了積累奶水牛分娩前后健康檢查或疾病診斷資料開展以下試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 試驗選擇南寧市某規(guī)?；趟ｐB(yǎng)殖場預(yù)產(chǎn)期前1～2周的11頭摩拉水牛，3～11歲，2～6胎次，由相同飼養(yǎng)員在半開放式牛舍和圍欄運動場內(nèi)飼養(yǎng)，每天喂飼料2次、擠奶2次，自由飲水，保持牛舍干凈、衛(wèi)生環(huán)境良好。飼料使用干奶期過渡料和產(chǎn)后全價料。

血樣采集：采血從分娩前1周開始[（產(chǎn)前7±3）d]到產(chǎn)后6周，每周1次，共采8次。清晨采食前保定，尾靜脈采血，血樣置于盛有肝素鋰抗凝劑的10 mL試管內(nèi)，分離血漿，分裝EP管密封，-80℃低溫冰箱保存，試驗結(jié)束后立即檢測。

1.2 檢測試劑盒與方法 牛LEP檢測試劑盒購自武漢默沙克生物科技有限公司，檢測方法為ELISA法。總抗氧化能力（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）、超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（TAC）和丙二醛（MDA）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。各指標(biāo)檢測方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS軟件19.0進(jìn)行方差分析，用一般線性模型重復(fù)測量法分析各周間的差異顯著性，用Excel作圖顯示動態(tài)變化曲線；采用Pearson法分析被檢指標(biāo)間的相關(guān)性。P＜0.05表示組間差異顯著，P＜0.01表示組間差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 平均值檢測 LEP、CAT、GPX、SOD、TAC和MDA的檢測結(jié)果見表1，包括極小值、極大值、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

表1 奶水牛產(chǎn)前1周至產(chǎn)后6周LEP等指標(biāo)的血漿含量（n=88）

2.2 動態(tài)變化 由圖1可知，LEP從產(chǎn)前1周到產(chǎn)后2周內(nèi)出現(xiàn)1次波峰，然后出現(xiàn)次波峰；TAC從產(chǎn)前1周到產(chǎn)后3周出現(xiàn)1次波峰，然后出現(xiàn)次波峰（圖1A）。MDA與CAT先降后升，低谷分別出現(xiàn)在產(chǎn)后1周和產(chǎn)后3周；產(chǎn)后5周分別接近或達(dá)到峰值（圖1B）。GPX的變化似“U”型，低谷在產(chǎn)后3周，而SOD的變化與TAC的相似（圖1C）。日產(chǎn)奶量在產(chǎn)后2周內(nèi)迅速上升，此后上升幅度很小，漸趨于穩(wěn)定，見圖1D。各指標(biāo)的血漿水平在時間點之間均有顯著差異。

圖1 奶水牛分娩前后各指標(biāo)血漿水平（11頭）

2.3 相關(guān)性 本試驗88份血樣中未發(fā)現(xiàn)LEP與其他指標(biāo)間有顯著相關(guān)性。在其余指標(biāo)中，SODTAC（r=0.332，P ＜ 0.002）、CAT-GPX（r=0.370，P ＜ 0.000）間存在正相關(guān)，MDA-SOD（r=-0.363，P＜0.001）間存在負(fù)相關(guān)。

3 討論

LEP是一種主要由脂肪細(xì)胞分泌的多肽類激素，具有調(diào)節(jié)能量分配、采食，影響繁殖、免疫等多種功能，檢測血漿LEP水平具有諸多臨床意義。本試驗檢測了11頭奶水牛分娩前后的血漿LEP水平，發(fā)現(xiàn)其平均值（1.26 ng/mL）接近以前水牛的報道值（2.14 ng/mL）（杜玉蘭等，2012），但遠(yuǎn)低于另一報道的血清水平（5.14～25.24 ng/mL）（李恭賀等，2011）。國外對水牛的報道較少，Ban-Tokuda（2007）報道，血漿水平在2～ 25 ng/mL之間（BAN-TOKUDA 等，2006）。

試驗發(fā)現(xiàn)，體況較差的奶牛產(chǎn)后早期LEP水平也會出現(xiàn)與體況不一致的升高（“虛高”），它并不代表此時奶牛的脂肪量突然增加，而可能是一種促進(jìn)脂肪動員的緊急信號，此期LEP水平異常升高，將促進(jìn)體脂動員，導(dǎo)致采食量下降，發(fā)生酮病（HEB等，2018）。但水牛分娩前后血漿LEP水平的動態(tài)檢測尚未見到報道。本試驗報道了奶水牛分娩前后血漿LEP的變化特點，發(fā)現(xiàn)其在分娩前1周至產(chǎn)后6周內(nèi)略呈下降趨勢，期間出現(xiàn)2次較大波動（“虛高”）。根據(jù)研究經(jīng)驗看，這些波峰可能是體內(nèi)能量急缺的信號，要求此時體脂急速動員，以保持體內(nèi)能量平衡。我們曾做過水牛分娩前后血脂（韋志堅等，2010）、血糖與酮體等指標(biāo)的動態(tài)檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，奶水牛產(chǎn)后1周時血糖水平最低（杜玉蘭等，2010），結(jié)合本試驗產(chǎn)奶量變化認(rèn)為水牛產(chǎn)后2周內(nèi)能量急缺。

在本試驗檢測的氧化與抗氧化指標(biāo)中，MDA作為脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，其水平在產(chǎn)后1周最低（圖1B），此后開始升高，這可能與奶水牛啟動泌乳、促進(jìn)體脂動員、非酯化脂肪酸（NEFA）氧化、過氧化產(chǎn)物積累有關(guān)。在廣西奶水牛產(chǎn)后主要脂類指標(biāo)的動態(tài)監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，血漿NEFA水平分娩當(dāng)天開始下降，產(chǎn)后1周時最低，然后波浪式上升至產(chǎn)后第7周達(dá)頂峰，之后下降（杜玉蘭等，2012），此時的血脂低水平可能與MDA低有關(guān)。此外，是否是奶水牛啟動泌乳時首先消耗血液中的NEFA，待其降低后再進(jìn)行體脂動員，這種情況有待繼續(xù)研究。試驗期間，TAC、GPX、SOD和CAT血漿水平均在產(chǎn)后3周達(dá)最低值，之后逐漸升高，說明產(chǎn)后3周內(nèi)機體儲存的抗氧化酶等被急劇消耗，然后經(jīng)過機體適應(yīng)性調(diào)節(jié)、產(chǎn)后采食量增加，此后抗氧化水平逐漸升高。本試驗表明，奶水牛產(chǎn)后3周時抗氧化水平最低，提示此時的抗病力最弱，我們推測此時間點在不同水牛群也許有遲有早，也應(yīng)該是水牛產(chǎn)后的共同特征，有待以后繼續(xù)研究。

本試驗未發(fā)現(xiàn)LEP與其他指標(biāo)間有顯著相關(guān)性，Pradeep（2016）發(fā)現(xiàn)，水牛精漿中LEP與MDA水平呈正相關(guān)，也未發(fā)現(xiàn)LEP與抗氧化指標(biāo)的相關(guān)性。本試驗發(fā)現(xiàn)，奶水牛血漿SOD與MDA負(fù)相關(guān)，與TAC正相關(guān)，也在我們預(yù)想之中。CAT與GPX間存在顯著正相關(guān)，因為它們均屬抗氧化酶，以不同機理擔(dān)負(fù)著抗氧化功能，反應(yīng)出它們之間的聯(lián)系比較緊密；SOD與TAC聯(lián)系的更緊密也說明抗氧化酶SOD活性越高，機體總抗氧化能力就越強，這也符合一般共識。該試驗提示，奶水牛分娩后隨著泌乳、代謝改變，氧化與抗氧化物質(zhì)處在動態(tài)博弈中，增加抗氧化能力，提供合成這些抗氧化酶的營養(yǎng)物質(zhì)十分必要。

本試驗動態(tài)檢測了奶水牛分娩前后血漿LEP和部分氧化、抗氧化指標(biāo)水平，發(fā)現(xiàn)其動態(tài)變化特征和部分指標(biāo)間的相關(guān)性，這些檢測數(shù)據(jù)對判斷奶水牛產(chǎn)后健康狀況有一定的參考意義，也為奶水牛分娩和產(chǎn)后能量代謝研究、產(chǎn)后飼養(yǎng)管理提供參考依據(jù)。