邢燕平 任紅娟 王 欣

卵巢癌的發(fā)病呈現(xiàn)出了整體年輕化的趨勢(shì)，在合并有相關(guān)家族史的女性中，其發(fā)病率還將進(jìn)一步提高[1]。卵巢癌患者的遠(yuǎn)期臨床預(yù)后較差，其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)較高，卵巢癌患者的總體生存時(shí)間較短。而分析患者預(yù)后不良的影響因素，對(duì)疾病診治具有重要指導(dǎo)意義。已有研究顯示[2]，腫瘤相關(guān)蛋白的異常表達(dá)與卵巢癌疾病進(jìn)展即患者預(yù)后密切相關(guān)。誘騙受體3(DcR3)是腫瘤壞死因子家族受體，具有誘導(dǎo)下游促癌因子表達(dá)，并以此增強(qiáng)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和粘附功能，最終促進(jìn)卵巢惡性腫瘤的發(fā)生[3,4]。部分研究發(fā)現(xiàn)[5]，DcR3高表達(dá)是消化系統(tǒng)惡性腫瘤的危險(xiǎn)因素之一，同時(shí)該指標(biāo)還與患者預(yù)后相關(guān)，但DcR3在卵巢癌中表達(dá)及意義如何，臨床尚無(wú)確切結(jié)論。本研究主要觀察DcR3在卵巢癌組織中的表達(dá)狀況，并分析其與患者預(yù)后間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年5月至2017年9月經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)的88例人上皮卵巢癌組織標(biāo)本、88例良性卵巢腫瘤組織標(biāo)本。

卵巢癌組，年齡36～72歲，平均(53.2±11.8)歲；FIGO分期：Ⅰ期26例、Ⅱ期35例、Ⅲ期24例、Ⅳ期3例；腫瘤組織學(xué)分級(jí)：G1級(jí)25例、G2級(jí)35例、G3級(jí)28例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例；病理學(xué)類型：漿液性囊腺癌56例、黏液性囊腺癌22例、子宮內(nèi)膜樣腺癌10例；病灶最大徑≥5 cm 57例、<5 cm 31例。良性組，年齡35～68歲，平均(51.8±10.4)歲，其中漿液性囊腺瘤60例、黏液性囊腺瘤28例。2組患者的年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

診斷及入選標(biāo)準(zhǔn)：①卵巢癌的診斷參考《卵巢惡性腫瘤診斷與治療指南(第四版)》[6]；②經(jīng)病理學(xué)檢查的標(biāo)本為術(shù)后標(biāo)本；③患者無(wú)放療或化療史；④本研究涉及患者隱私資料注意保密，方案經(jīng)倫理學(xué)會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有其他類型或部位惡性腫瘤；②臨床及病理學(xué)檢查資料不完整；③伴有其他系統(tǒng)的重大疾病。

1.2 免疫組化染色技術(shù)

免疫組化檢查評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：DcR3蛋白主要定位于上皮卵巢癌細(xì)胞質(zhì)中，如果免疫檢測(cè)顯示黃色、棕黃色、褐色則可進(jìn)行相關(guān)評(píng)分，(1)根據(jù)染色的深度：未染色(0分)、僅僅淡黃色染色(1分)、棕黃色染色(2分)、染色呈褐色、黑色(3分)；(2)根據(jù)染色的上皮卵巢癌細(xì)胞在顯微鏡下視野中所占比例：占比≤10%(1分)、染色細(xì)胞占比范圍>10%～50%(2分)、染色細(xì)胞占比范圍>50%～75%(3分)、染色細(xì)胞占比>75%(4分)，染色深度評(píng)分與染色細(xì)胞占比評(píng)分二者乘積<3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性?？偡?3分為(-)，總分3～5分為(+)，總分6～9分為(++)，總分>9分為(+++)。

對(duì)樣本進(jìn)行切片后，通過(guò)二甲苯進(jìn)行脫臘操作，隨后置于5%雙氧水內(nèi)，反應(yīng)15 min后，轉(zhuǎn)入磷酸鹽緩沖液內(nèi)，反應(yīng)8 min，沖洗2次后，通過(guò)10 ml 5%的山羊血清抗體進(jìn)行封閉，反應(yīng)12 min，DcR3抗體一抗(購(gòu)自abcum公司，1∶500)，4℃冷藏至次日，取出并沖洗2次，IgG二抗(購(gòu)自北京康泰生物,1∶1000)，靜置反應(yīng)25 min，沖洗2次，顯色并脫水封片，于顯微鏡下進(jìn)行結(jié)果讀取。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌組織與卵巢良性腫瘤組織中的DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

卵巢癌組織中的DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為61.36%(54/88),高于良性組的28.41%(25/88)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.244，P<0.000)(表1)。

表1 卵巢癌組織與卵巢良性腫瘤組織中的DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)比較/例

2.2 卵巢癌DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

經(jīng)分析，不同F(xiàn)IGO分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同組織學(xué)分級(jí)的卵巢癌組織中的DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 卵巢癌DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系(例，%)

2.3 卵巢癌DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與患者預(yù)后的關(guān)系研究

經(jīng)過(guò)3年隨訪，生存17例患者，失訪7例，死亡64例，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析，DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)、FIGO分期增高、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)高分級(jí)是卵巢癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立性危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 卵巢癌DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與患者預(yù)后的關(guān)系研究

3 討論

卵巢癌是婦科較為常見(jiàn)的惡性腫瘤，其臨床預(yù)后惡化較為明顯，遠(yuǎn)期病死率占據(jù)了婦科惡性腫瘤的前三位。在絕經(jīng)遲、月經(jīng)來(lái)潮早或者長(zhǎng)期性激素紊亂的群體中，卵巢癌具有更高的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[7]。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌的5年生存率不足40%，其遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)可超過(guò)25%，且隨著隨訪時(shí)間的延長(zhǎng)，卵巢癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率可進(jìn)一步上升[8]?，F(xiàn)階段缺乏對(duì)于卵巢癌臨床預(yù)后評(píng)估的可靠性指標(biāo)，雖然影像學(xué)檢查能夠在卵巢癌的診斷過(guò)程中發(fā)揮作用，但影像學(xué)檢查預(yù)測(cè)卵巢癌的滯后性較為明顯，其對(duì)于卵巢癌臨床結(jié)局評(píng)估的參考性較低。血清CA125雖然能夠在卵巢癌的臨床預(yù)后的評(píng)估中發(fā)揮作用，但單獨(dú)依靠CA125評(píng)估卵巢癌臨床預(yù)后的假陽(yáng)性率仍然較高，其評(píng)估仍然存在一定的局限[9]。本次研究通過(guò)對(duì)DcR3蛋白與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系分析，能夠在揭示卵巢癌部分發(fā)病機(jī)理的同時(shí)，為臨床上卵巢癌的診療提供新的預(yù)后指標(biāo)。

DcR3蛋白是誘騙家族相關(guān)因子，其能夠作為腫瘤壞死因子受體的重要激活成分，參與到腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的激活過(guò)程。DcR3蛋白可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)增速度，抑制其凋亡，進(jìn)而加速卵巢癌惡化進(jìn)程。分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究還認(rèn)為，DcR3蛋白能夠通過(guò)提高癌細(xì)胞膜受體跨膜脂蛋白受體的激活程度，誘使MAPK信號(hào)路徑大量活化，進(jìn)而參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[10]。有部分研究者揭露了DcR3蛋白在卵巢癌患者中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)DcR3蛋白的表達(dá)與卵巢腫瘤的中晚期病情進(jìn)展有關(guān)[11]，但缺乏對(duì)DcR3蛋白與卵巢癌預(yù)后間的聯(lián)系的研究。

本次研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌病灶內(nèi)DcR3蛋白陽(yáng)性水平顯著較良性卵巢腫瘤組織高，表明DcR3蛋白在卵巢癌患者中存在明顯的高表達(dá)現(xiàn)象，這主要與DcR3蛋白的異常增高可誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞出現(xiàn)上皮細(xì)胞生物特征，并增強(qiáng)其基膜突破能力，最終提高癌細(xì)胞浸潤(rùn)、粘附水平。另外有研究也發(fā)現(xiàn)了與本次研究相似的結(jié)論，其認(rèn)為在卵巢漿液性囊腺癌或者透明細(xì)胞癌患者中，DcR3蛋白的表達(dá)水平與其分期具有正向相關(guān)，同時(shí)還與患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)正向相關(guān)[12]。在研究DcR3蛋白與卵巢癌病理特征間的聯(lián)系時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)臨床分期進(jìn)展、伴盆腔內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或組織學(xué)分級(jí)不佳的患者，其瘤體內(nèi)的DcR3陽(yáng)性率較高，表明DcR3蛋白的異常增高還與患者疾病特征相關(guān)，提示DcR3還可用于分析卵巢癌患者疾病嚴(yán)重程度。這主要考慮由于DcR3蛋白的高表達(dá)，能夠影響到卵巢癌的腫瘤微環(huán)境，提高癌細(xì)胞變形能力，導(dǎo)致癌細(xì)胞的浸潤(rùn)能力增強(qiáng)，其對(duì)周圍組織的侵蝕能力上升；同時(shí)DcR3蛋白的高表達(dá)，還將加速癌細(xì)胞的分化進(jìn)程，導(dǎo)致其排列紊亂，最終促進(jìn)了卵巢癌組織學(xué)分級(jí)的惡化[13-16]。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)DcR3蛋白在漿液性囊腺癌或者子宮內(nèi)膜樣腺癌等患者中的表達(dá)差異，表明DcR3蛋白并不會(huì)影響到卵巢癌的分化來(lái)源。危險(xiǎn)因素分析可見(jiàn)，DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)、FIGO分期增高、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)高分級(jí)是卵巢癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立性危險(xiǎn)因素，臨床上對(duì)于DcR3蛋白高表達(dá)或者合并其他高危因素的患者，應(yīng)采用綜合性治療措施，從而改善卵巢癌的臨床結(jié)局。

人上皮卵巢癌組織中DcR3蛋白表達(dá)上調(diào)，并且與腫瘤的惡性程度增加、不良預(yù)后相關(guān)。希望后續(xù)更多的研究可以關(guān)注到DcR3蛋白的具體診斷學(xué)AUC曲線問(wèn)題。