張 豪 祝 參 余 筱

卵巢漿液性腫瘤是常見的卵巢腫瘤，多為交界性，但其在進展過程中存在發(fā)生不良結(jié)局的風(fēng)險[1-2]。漿液性腫瘤的發(fā)生和體內(nèi)與細胞增殖、凋亡相關(guān)的基因及蛋白的表達失衡有關(guān)。沉默信息調(diào)節(jié)因子(SIRT1)能夠通過影響到腫瘤細胞的凋亡，加劇癌細胞的異常轉(zhuǎn)錄，最終促進卵巢腫瘤的發(fā)生[3]；RAS相關(guān)蛋白(Rap1)，能夠通過影響到腫瘤細胞的浸潤和粘附能力，促進癌細胞生物學(xué)特征的改變[4]；伏隔核因子1(NAC1)能夠通過影響到核因子的激活程度，加劇核基因誘導(dǎo)的癌細胞內(nèi)信號通路的上調(diào)，從而干預(yù)到腫瘤細胞的增殖[5]。為進一步探討卵巢漿液性腫瘤與上述細胞因子的關(guān)系，本文就卵巢漿液性腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的表達情況進行研究，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2019年2月至2020年8月在我院收治的卵巢漿液性腫瘤患者的腫瘤組織標(biāo)本100份為卵巢漿液性腫瘤組，選取同期在我院收治的卵巢良性腫瘤患者的腫瘤組織標(biāo)本100份為卵巢良性腫瘤組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡>18周歲；②卵巢漿液性腫瘤或良性腫瘤經(jīng)病理診斷明確；③無其他嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并生殖系統(tǒng)疾?。虎诮诮邮苁中g(shù)治療者。對照組年齡28～60歲，平均(40.27±5.23)歲；觀察組年齡30～62歲，平均(40.25±4.97)歲。2組的年齡無顯著差異(P>0.05)，具有可比性。研究經(jīng)倫理委員會評審?fù)ㄟ^，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。

1.2 研究方法

組織標(biāo)本蠟塊切片，脫水操作后采用3%H2O2室溫條件下孵育20 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，磷酸鹽緩沖液稀釋后的山羊血清封閉抗體5 min，倒去血清后不清洗，加入一抗(購自賽默飛世爾中國 濃度：1∶1000)5 ml，37℃孵育2 h，或者放置4℃冰箱過夜孵育，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，加入生物素?zé)晒鈽?biāo)記的二抗(購自賽默飛世爾中國 濃度：1∶2000)3 ml，37℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，37℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，增強型HRP-DAB底物顯色試劑盒 (PA110)顯色，自來水沖洗，復(fù)染，封片。陽性細胞判定：細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，黃色或棕色顆粒以及陽性細胞所占百分比<10%為表達弱陽性，≥10%～50%為表達中等陽性，>50%為強陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察2組患者腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達情況，比較不同臨床病理特征卵巢漿液性腫瘤患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達的差異，分析卵巢漿液性腫瘤患者腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達的影響因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 11.5統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)分析。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，2組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，Logistic逐步回歸分析卵巢漿液性腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達的影響因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達情況比較

表1顯示，卵巢漿液性腫瘤組患者的腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白陽性表達率分別為65.00%、60.00%、55.00%，高于卵巢良性腫瘤組的6.00%、20.00%、8.00%(P<0.05)。

表1 2組患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白水平的比較(例，%)

2.2 不同臨床病理特征卵巢漿液性腫瘤患者腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達情況比較

表2顯示，Ⅲ+Ⅳ期、中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白陽性表達率較高(P<0.05)，不同年齡患者腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白陽性表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表2 不同臨床病理特征卵巢漿液性腫瘤患者腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白陽性表達情況比較(例，%)

2.3 卵巢漿液性腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達的影響因素

將單因素分析有意義的因素作為自變量并進行賦值，臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期=0、Ⅲ+Ⅳ期=1，組織學(xué)分級：高分化=0、中、低分化=1，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無=0、有=1。分別將腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達情況作為因變量進行l(wèi)ogistic逐步回歸分析，結(jié)果顯示，臨床分期是卵巢漿液性腫瘤患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達的獨立影響因素。見表3。

表3 卵巢漿液性腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達的影響因素

3 討論

在不同類型的卵巢腫瘤患者中，卵巢漿液性腫瘤的發(fā)病率較高，同時卵巢漿液性腫瘤的發(fā)病呈現(xiàn)出了明顯的年輕化趨勢。多次流產(chǎn)病史、月經(jīng)推遲絕經(jīng)等群體中卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險會進一步上升[6]。流行病學(xué)隨訪發(fā)現(xiàn)，卵巢漿液性腫瘤患者的總體生存時間較短，患者的病情進展較快，卵巢漿液性腫瘤發(fā)生惡性或者腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險可隨著時間的延長而顯著上升[7-8]。對卵巢腫瘤的臨床病理特征的評估具有一定的意義，其能夠在卵巢腫瘤患者的臨床預(yù)后的隨訪或者整體性病情的評估中發(fā)揮作用。雖然已有的研究認(rèn)為CA125等腫瘤蛋白與卵巢腫瘤的病情進展密切相關(guān)，認(rèn)為CA125等指標(biāo)能夠評估卵巢腫瘤的臨床病理特征情況，但CA125等指標(biāo)評估卵巢漿液性腫瘤的局限性仍然存在，其對于卵巢漿液性腫瘤評估的特異程度仍然不足[9]。

SIRT1是沉默調(diào)控相關(guān)因子，其能夠通過結(jié)合癌細胞轉(zhuǎn)錄上游因子的激活程度，干預(yù)到腫瘤細胞轉(zhuǎn)錄啟動子的上調(diào)水平，從而影響到腫瘤細胞的增殖[10-11]。SIRT1還能夠影響到腫瘤細胞內(nèi)不同信號通路的激活程度，提高癌細胞內(nèi)P16/AKT的活躍程度，最終影響到腫瘤細胞的凋亡抑制過程[12]。AC1是核調(diào)控修飾基因，其對于卵巢癌細胞內(nèi)癌基因的調(diào)控修飾作用，能夠提高癌基因的翻譯水平，增加腫瘤細胞的擴增風(fēng)險；Rap1是RAS蛋白家族成員，其對于下游RAS蛋白的調(diào)控作用，能夠提高腫瘤細胞的浸潤深度[13]。

本次研究通過免疫組化法分析腫瘤組織中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達情況，發(fā)現(xiàn)在卵巢漿液性腫瘤患者病灶組織中，SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的陽性表達率明顯高于卵巢良性腫瘤組(P<0.05)，表明卵巢組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的高陽性表達會增加卵巢漿液性腫瘤發(fā)生風(fēng)險。不同腫瘤相關(guān)蛋白的改變，能夠在癌基因激活、腫瘤細胞形態(tài)學(xué)改變及癌細胞內(nèi)信號通路激活方面發(fā)揮作用，影響到卵巢腫瘤的早期發(fā)生和中晚期病情進展。有少部分研究者也發(fā)現(xiàn)，在卵巢癌患者中，SIRT蛋白的陽性表達率可隨著卵巢癌患者臨床預(yù)后的惡化而顯著上升，卵巢癌遠期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移或者病死患者，SIRT蛋白的陽性表達率顯著升高[14]。在臨床分期為Ⅲ+Ⅳ期、組織學(xué)分級不佳、卵巢癌細胞低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢漿液性腫瘤患者中，腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的陽性表達率較高，表明SIRT1、NAC1、Rap1的表達與卵巢腫瘤患者的不同臨床病理特征均具有一定的關(guān)系。SIRT1對于卵泡上皮細胞異常病變的影響，能夠提高卵泡上皮細胞的浸潤深度，促進癌細胞粘附盆腔內(nèi)淋巴結(jié)組織；NAC1對于卵巢腫瘤臨床病理特征的影響，主要在于其具有核基因的錯配修復(fù)能力，可以影響到腫瘤的生物學(xué)特征；Rap1對于卵巢漿液性腫瘤的影響，主要在于其對于MAPK信號通路的調(diào)控有關(guān)，最終加劇腫瘤細胞排列極性的紊亂和組織學(xué)分級的惡化[15-16]。危險因素分析也可見，臨床分期是卵巢漿液性腫瘤患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白陽性表達的獨立影響的因素。

綜上所述，卵巢漿液性腫瘤患者腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白陽性表達率較高，且與臨床分期密切相關(guān)。卵巢漿液性腫瘤組織SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表達與生存預(yù)后的關(guān)系仍有待進一步的研究加以證實。