■王 曼 何元慶 李 敏 熊兆龍 何 健*

（1.西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 綿陽 621010；2.四川鐵騎力士集團(tuán)馮光德實(shí)驗(yàn)室，四川 綿陽 621006）

飼料禁抗給畜牧行業(yè)造成很大壓力，同時(shí)非洲豬瘟疫情的原因造成了豬肉產(chǎn)出較低，但消費(fèi)者對(duì)蛋白需求卻逐步增加[1]。如何提高動(dòng)物的存活率成為了一個(gè)熱門話題。中草藥具有營養(yǎng)和保健的雙重功效，許多中草藥，如補(bǔ)益藥、清熱解毒藥、活血祛瘀藥等，不僅能夠提高機(jī)體的免疫能力，還對(duì)病原微生物有抑制和殺滅作用[2]。近年來，大量的研究發(fā)現(xiàn)中草藥具有治療、預(yù)防畜禽疾病的作用[3]。但在畜禽上，現(xiàn)有的研究大多是集中在單種中草藥的使用上，研究結(jié)果依然存在爭議[4-5]。傳統(tǒng)中藥應(yīng)用均是以復(fù)方形式進(jìn)行治療，很少采用單一藥材治療疾病[6]。中藥中一些經(jīng)典的扶正、補(bǔ)虛益氣的中藥配方如復(fù)方柴術(shù)散，蒼茂散，玉屏風(fēng)散等，已廣泛運(yùn)用。其中，玉屏風(fēng)復(fù)方（黃芪、白術(shù)和防風(fēng)組成）被大量運(yùn)用到養(yǎng)殖過程中。中醫(yī)認(rèn)為黃芪味甘，性微溫，入脾，肺經(jīng)，能夠補(bǔ)中益氣，固表利水，托膿毒和生肌的功效[7]。白術(shù)味苦、甘，性溫，歸脾、胃經(jīng)具有健脾益氣，燥濕利水，止汗安胎的功效[8]。防風(fēng)味辛、微甘，性溫，歸肝、膀胱、脾經(jīng)，具有祛風(fēng)、解表、勝濕、止痙之功效[9]。玉屏風(fēng)散固表，止汗，益氣，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力，提高免疫系統(tǒng)組織細(xì)胞活性，增加機(jī)體免疫細(xì)胞生長及抗體合成，維持機(jī)體內(nèi)外環(huán)境平衡[10]。甘草性平，味甘，歸心、肺、脾、胃經(jīng)，具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥等功效[11]。張才等研究發(fā)現(xiàn)，甘草提取物能提高肉雞的生長性能和免疫功能[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，玉屏風(fēng)有益于畜禽生長性能、免疫功能和呼吸道疾病[13-14]。但目前的報(bào)道并沒有研究玉屏風(fēng)與甘草聯(lián)合進(jìn)行動(dòng)物生長性能和免疫功能研究。因此，本文旨在研究玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞生長性能、臟器指數(shù)和抗體水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃芪提取物、白術(shù)提取物、防風(fēng)提取物和甘草提取物均是由湖南某生物資源股份有限公司提供，所有提取物均10∶1濃縮比例，可溶于水。其中常規(guī)玉屏風(fēng)主要是黃芪提取物、白術(shù)提取物和防風(fēng)提取物按照4∶3∶3的比例制成。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼糧

試驗(yàn)動(dòng)物選用1日齡的科寶白羽肉雞600只，單層籠養(yǎng)飼喂，自由采食和飲水。分組前將每只雞按照體重進(jìn)行分類，選取體重38～43 g區(qū)間的雞隨機(jī)分為3組，每組10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只雞。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，處理組1飼喂添加玉屏風(fēng)提取物500 mg/kg；處理組2飼喂添加玉屏風(fēng)提取物500 mg/kg+甘草提取物200 mg/kg?；A(chǔ)飼糧配方參照科寶肉雞營養(yǎng)需要配制，采用玉米-豆粕型飼糧，基礎(chǔ)飼糧配方及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在鐵騎力士集團(tuán)花荄實(shí)驗(yàn)基地肉雞試驗(yàn)舍進(jìn)行，試驗(yàn)前打掃雞舍，清洗、消毒雞籠和飲水器，前7 d 室溫控制在（33±2）℃，相對(duì)濕度控制在60%～70%，自由采食，每日飼喂兩次（08：00和18：00），自由飲水。7 d后溫度逐漸下降，直到與室溫一致，相對(duì)濕度控制在40%～60%，光照采取自然光照。試驗(yàn)期間每天觀察雞的飲水、采食量和精神狀態(tài)，保持雞舍清潔、干燥、衛(wèi)生、空氣新鮮。肉雞的免疫程序?yàn)榈?天進(jìn)行噴霧免疫新城疫苗C45和傳支疫苗H120二聯(lián)合疫苗，第7天進(jìn)行新支二聯(lián)活苗點(diǎn)眼和新支流三聯(lián)油苗頸部皮下注射，第14 天進(jìn)行禽流感胸部淺層肌肉注射和雞痘翼膜刺種，第25 天進(jìn)行新支妥單苗點(diǎn)眼和新支流三聯(lián)油苗腋下淺層肌肉注射。

1.4 試驗(yàn)樣本采集與指標(biāo)測定

1.4.1 生長性能指標(biāo)

試驗(yàn)開始前、第21天和第42天08：00 點(diǎn)開始，試驗(yàn)肉雞進(jìn)行空腹稱重（稱重前一晚上結(jié)料，空腹12 h），計(jì)算各階段每只雞的平均日增重。

記錄每天的采食量，然后算出各階段的平均日采食。

根據(jù)平均日增重和平均日采食量計(jì)算料重比。

1.4.2 血樣采集

第0、21天和第42天08：00每個(gè)重復(fù)選取2只接近平均體重的雞進(jìn)行采血，采血后將血液放置在37 ℃水浴鍋水浴30 min，待血液析出上清液后，3 500 r/min離心10 min，分離血清，最后分別測定血清新城疫病毒（NDV）和禽流感病毒（H5-11、H5-12、H9 和H7）病原的抗體效價(jià)。

1.4.3 免疫器官指數(shù)

第21、42 天時(shí)，每個(gè)重復(fù)選取接近平均體重的2 只雞進(jìn)行屠宰，稱量每只雞的體重，取出心臟、肝臟、脾臟、法氏囊、胰腺稱重。

免疫器官指數(shù)（g/kg）=免疫器官重（g）/體重（kg）

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)先采用Excel 2016進(jìn)行整理，通過SAS 8.1軟件GLM模型對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，每個(gè)指標(biāo)以每個(gè)重復(fù)為統(tǒng)計(jì)單位，差異顯著再進(jìn)行Duncan’s多重比較，以P＜0.05為差異顯著，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞生長性能的影響（見表2）

表2 玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞生長性能的影響（n=10）

由表2可知，與對(duì)照組相比，處理組1可以顯著提高22-42 d 的平均日增重和全期的平均日增重（P＜0.05）。與對(duì)照組比較，處理組2可以顯著提高第21天和第42 天的末重（P＜0.05），可以顯著提高0-21、22-42 d和全期的平均日增重和平均日采食量（P＜0.05）。

2.2 玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞抗體水平的影響（見表3）

由表3可知，與對(duì)照組相比，處理組1可以顯著提高第42天白羽肉雞中血清的H5-11、H7和NDV 的抗體水平（P＜0.05）。與對(duì)照組比較，處理組2 可以顯著提高白羽肉雞第21 天血清中的H7 和NDV 抗體水平（P＜0.05）和第42 天血清中的H5-11、H9、H7 和NDV抗體水平（P＜0.05）。

表3 玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞抗體水平的影響（log2，n=20）

2.3 玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞器官指數(shù)的影響（見表4）

表4 玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞器官指數(shù)的影響（g/kg，n=20）

由表4可知，與對(duì)照組相比，處理組2 可以顯著提高白羽肉雞第42 天肝臟和脾臟器官指數(shù)（P＜0.05）。而處理組1對(duì)免疫器官指數(shù)無顯著影響（P>0.05）。

3 討論

3.1 玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞生長性能的影響

中草藥中的活性成分中的多糖、黃酮等，能夠提高機(jī)體的免疫力，促進(jìn)動(dòng)物的生長性能。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，飼喂玉屏風(fēng)提取物對(duì)0-21日齡肉雞的生長性能無顯著影響，但是飼喂玉屏風(fēng)提取物和甘草提取物有顯著影響，有可能是甘草提取物增加玉屏風(fēng)提取物的效用。吳華等[15]研究發(fā)現(xiàn)飼糧中添加甘草藥渣可以顯著提高肉雞的日增重。本試驗(yàn)開展日期正值四川高溫，而甘草具有清熱解毒和潤肺止咳的功效[16]。因此，在飼糧中加入甘草能有效減少因天氣炎熱動(dòng)物食欲下降的影響。馮淇元等[17]研究發(fā)現(xiàn)在飼糧中加入甘草和茯苓可以顯著提高施氏鱘熱應(yīng)激耐受能力，這與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。在本試驗(yàn)后期，僅飼喂玉屏風(fēng)提取物也可以顯著提高肉雞的生長性能，這與鄧緣等[18]、龔澤修等[19]和周巍[20]的研究結(jié)果相一致。Bai等[21]研究發(fā)現(xiàn)給肉雞飼喂黃芪提取物在試驗(yàn)前期雞群無明顯增重，但是試驗(yàn)全期的日增重和肉雞末重是有顯著提高的，這與本試驗(yàn)的結(jié)果相一致。但近年來也有研究發(fā)現(xiàn)中藥提取物對(duì)動(dòng)物的生長性能無影響[22]。Chen等[23]也發(fā)現(xiàn)飼糧中添加黃芪提取物對(duì)肉雞的日增重、日采食和耗料增重比無影響。這些結(jié)果的不一致有可能是中藥成分和添加量不一致，還有部分原因是中草藥單一使用效果沒有組合使用效果佳。Yin等[13]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)飼糧中添加500 mg/kg玉屏風(fēng)多糖可以顯著提高肉雞的生長性能。Bai等[21]將黃芪提取物和柴胡提取物混合飼喂肉雞的效果明顯優(yōu)于單獨(dú)飼喂的效果。本試驗(yàn)中，在玉屏風(fēng)的基礎(chǔ)上添加了甘草提取物的效果也明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的玉屏風(fēng)。

3.2 玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)白羽肉雞血清抗體和臟器指數(shù)的影響

免疫增強(qiáng)劑是一種非特異性方式單獨(dú)使用或者其他抗原聯(lián)合使用來增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的藥物，可以減輕環(huán)境壓力引起的免疫紊亂，幫助預(yù)防和治療傳染性和免疫性疾病。體液免疫是一種通過B 細(xì)胞產(chǎn)生抗體來保護(hù)自身的免疫機(jī)制。因此，血清抗體水平是評(píng)價(jià)免疫狀態(tài)的主要指標(biāo)之一。近年來，大量的研究發(fā)現(xiàn)中草藥能夠提高動(dòng)物機(jī)體的免疫功能[24-26]，其中黃芪或以黃芪作為核心的組方研究較多且效果較佳[27]。Chen等[28]研究發(fā)現(xiàn)黃芪可以增強(qiáng)接種新城疫疫苗的雞T淋巴細(xì)胞和B細(xì)胞增殖從而提高疫苗的活性，提高機(jī)體抗體水平，這與本試驗(yàn)的研究結(jié)果相一致。黃芪提取物還被用作免疫佐劑用于制備針對(duì)法氏囊病毒（IB?DV）、新城疫病毒（NDV）和感染性滑囊炎的疫苗[29]。早有研究表明玉屏風(fēng)散配方中的黃芪作用最為全面，對(duì)免疫功能、腸道菌群和呼吸道均有顯著的改善作用，配方中防風(fēng)對(duì)腸道和呼吸道有顯著改善，但對(duì)細(xì)胞免疫無影響，配方中白術(shù)對(duì)于各項(xiàng)指標(biāo)不明顯，但是三種中草藥的組合效果最佳[13]。最近的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)將甘草和黃芪按照1∶1 的比例混合使用比單獨(dú)添加其中一個(gè)效果更佳，可以顯著的提高黃鱸魚的免疫調(diào)節(jié)功能[30]。該研究證實(shí)了甘草和黃芪具有復(fù)配效果。

肝臟、脾臟和法氏囊是家禽重要的免疫器官，免疫器官的發(fā)育狀態(tài)能很好地反映家禽免疫能力和抵御疾病能力[31]。免疫器官指數(shù)在一定程度上反映其相應(yīng)機(jī)能狀態(tài)，是一項(xiàng)重要的生物學(xué)指標(biāo)，可用來判斷機(jī)體的營養(yǎng)、生長和病變的狀態(tài)[32]。在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)添加玉屏風(fēng)和甘草提取物可以顯著提高肝臟和脾臟的臟器指數(shù)。僅添加玉屏風(fēng)提取物能提高肝臟和脾臟的臟器指數(shù)但并不顯著。免疫器官指數(shù)的改善能很好地反映出添加玉屏風(fēng)和甘草提取物對(duì)雞群免疫功能的影響，這與玉屏風(fēng)+甘草提取物組抗體水平提高結(jié)果相對(duì)應(yīng)。同時(shí)大量的研究也證明了在家禽飼糧中添加中草藥可以顯著提高家禽免疫器官指數(shù)[33-35]，與本研究的結(jié)果相一致。

4 結(jié)論

①飼料中添加玉屏風(fēng)提取物可顯著提高白羽肉雞后期的平均日增重和抗體水平。

②飼料中添加玉屏風(fēng)和甘草提取物可顯著提高白羽肉雞全期的平均日增重、平均日采食量、免疫器官指數(shù)和抗體水平。