陳麗燕, 顧春燕, 陳 莉

(1. 江蘇省南通市第三人民醫(yī)院 病理科, 江蘇 南通, 226000;2. 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 病理教研室, 江蘇 南通, 226000)

基于肝癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)機(jī)制的研究成果以及分子靶向藥物的臨床推廣，中國(guó)2000—2015年肝細(xì)胞癌(HCC)的發(fā)病率顯著下降[1], 但同時(shí)也存在著HCC患者對(duì)放療及化療不敏感、副作用大等問(wèn)題。Eag1作為鉀離子通道之一，具有腫瘤標(biāo)志物的特點(diǎn)。Eag1已在許多不同的癌細(xì)胞系中呈現(xiàn)表達(dá)，包括腸癌[2]、肝癌[3]和肺癌[4]等，但在正常組織中的表達(dá)卻受到限制[5]。離子通道與細(xì)胞的免疫炎癥反應(yīng)間存在一定的相關(guān)性[6]。自RUDOLF VICHOW首次在腫瘤中發(fā)現(xiàn)了白細(xì)胞并提出腫瘤可能發(fā)生在炎癥部位這一假說(shuō)以來(lái)，腫瘤與炎癥之間的聯(lián)系就得到了證實(shí)[7]。外周血中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值(NLR)、血小板與淋巴細(xì)胞比值(PLR)均是反映機(jī)體免疫狀態(tài)的重要標(biāo)志物，其還可以綜合反映患者的炎癥狀況[8]。相關(guān)研究[9]顯示，NLR、PLR在評(píng)估癌癥患者的治療效果及預(yù)后方面有重要的價(jià)值。本研究探討HCC患者中Eag1的表達(dá)及其與臨床病理因素、NLR、PLR的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究經(jīng)南通市第三人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選取2011年12月—2016年12月首次接受肝癌手術(shù)并經(jīng)病理學(xué)確診為HCC的患者186例，術(shù)前均未接受抗腫瘤治療，且具有完整的臨床病理信息及隨訪資料，患者對(duì)本研究知情同意。

1.2 免疫組織化學(xué)(IHC)實(shí)驗(yàn)及結(jié)果判定

制備組織芯片，采用EnVision二步法行IHC實(shí)驗(yàn), Eag1陽(yáng)性定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)。每個(gè)病例隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(40×10放大倍數(shù))，每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞(每個(gè)高倍視野的陽(yáng)性表達(dá)率>70%為高表達(dá), 30%～70%為中等強(qiáng)度表達(dá), <30%為低表達(dá))。選取同等數(shù)量的癌旁組織作為對(duì)比。收集186例HCC患者治療前的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)水平，計(jì)算NLR、PLR。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用[n(%)]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，指標(biāo)間相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn);P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Eag1在HCC組織與癌旁組織中的表達(dá)

Eag1在HCC組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為82.3%(153/186), 陰性表達(dá)率為17.7%(33/186); Eag1在癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為56.5%(105/186), 陰性表達(dá)率為43.5%(81/186); Eag1在HCC組織與癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率及陰性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖1。

2.2 HCC患者Eag1表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

根據(jù)HCC Edmondson's分級(jí)法，將本研究HCC患者分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)，其中Eagl在不同級(jí)別HCC中的表達(dá)見(jiàn)圖2。HCC中Eag1陽(yáng)性表達(dá)與乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、血清甲胎蛋白(AFP)、肝硬化、腫瘤分級(jí)、脈管內(nèi)癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)因素相關(guān)，具體表現(xiàn)為有HBsAg陽(yáng)性、血清AFP≥400 ng/mL、有肝硬化、腫瘤分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)、有脈管內(nèi)癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)病理特征患者的Eag1陽(yáng)性表達(dá)率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表1。

A、B: HCCⅠ級(jí)患者Eagl呈低表達(dá)(放大倍數(shù)為100、400倍); C、D: HCC Ⅱ級(jí)患者Eagl呈中等強(qiáng)度表達(dá)(放大倍數(shù)為100、400倍); E、F: HCC Ⅲ級(jí)患者Eagl呈高表達(dá)(放大倍數(shù)為100、400倍)。 圖2 Eagl在不同分級(jí)HCC中的表達(dá)

表1 Eag1表達(dá)與HCC患者臨床病理特征的相關(guān)性[n(%)]

2.3 HCC患者治療前外周血NLR、PLR與臨床病理特征的相關(guān)性

本研究患者NLR中位數(shù)為2.26, PLR中位數(shù)為102.36。以中位數(shù)為截點(diǎn)，將患者分為高NLR組(NLR>2.26)與低NLR組(NLR≤2.26), 高PLR組(PLR>102.36)與低PLR組(PLR≤102.36), 每組93例。結(jié)果顯示，患者治療前外周血NLR、PLR與HBsAg、AFP、肝硬化、腫瘤分級(jí)、脈管內(nèi)癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)因素相關(guān)，具體表現(xiàn)為有HBsAg陽(yáng)性、血清AFP≥400 ng/mL、有肝硬化、腫瘤分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)、有脈管內(nèi)癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)病理特征的患者NLR、PLR較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表2、表3。

表2 NLR與HCC患者臨床病理特征的相關(guān)性[n(%)]

2.4 HCC組織中Eag1表達(dá)與患者治療前外周血NLR、PLR的相關(guān)性

結(jié)果顯示, HCC組織中Eag1陽(yáng)性表達(dá)與NLR、PLR呈顯著正相關(guān)(P=0.001), 見(jiàn)表4。

3 討 論

作為一種較為重要的癌癥誘發(fā)因子, Eag1主要在中樞神經(jīng)組織中表達(dá)，也可在胃腺主細(xì)胞、

表4 HCC組織中Eagl表達(dá)與外周血NLR、PLR的相關(guān)性

胰腺腺泡細(xì)胞、子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞、胎盤(pán)、肥大細(xì)胞、精原細(xì)胞、組織巨噬細(xì)胞、腎上腺、淋巴濾泡的生發(fā)中心中表達(dá)[10]。Eag1在神經(jīng)母細(xì)胞瘤的SHSY-5Y細(xì)胞、乳腺癌的EFM-19細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞中高表達(dá)，在黑色素瘤細(xì)胞的IPC298細(xì)胞和IGRl細(xì)胞中, Eag1也呈陽(yáng)性表達(dá)[11]。PCR、Southern印跡方法證實(shí)了Eag1在宮頸癌中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)[12]。HEMMERLEIN B等[13]通過(guò)IHC實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Eag1在肝癌、胰腺癌、膽囊癌、腎細(xì)胞癌、前列腺癌、卵巢癌、甲狀腺癌等多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)。Eag1也被證實(shí)是一個(gè)具有高潛力活性的惡性腫瘤標(biāo)志物[14]。本研究結(jié)果證實(shí)了Eag1在惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)，即Eag1在HCC中的陽(yáng)性表達(dá)率為82.3%, 顯著高于癌旁組織的56.5%。有研究[15]顯示, Eag1的表達(dá)也受癌組織大小、病理分級(jí)、浸潤(rùn)深度、轉(zhuǎn)移情況、分期等多因素的影響。此外，離子通道與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵犯及脈管的形成也密切相關(guān)[16]。本研究結(jié)果證實(shí)了Eag1在HCC中的表達(dá)與血清HBsAg、血清AFP、肝硬化、腫瘤分級(jí)、脈管內(nèi)癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)均相關(guān)(P<0.05)。

研究[17]證實(shí)，炎癥的長(zhǎng)期存在與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有一定的相關(guān)性。長(zhǎng)期的炎癥刺激可以增強(qiáng)惡性腫瘤的侵犯和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力[18]。目前研究[19]證實(shí)，炎癥反應(yīng)可以誘導(dǎo)破壞細(xì)胞DNA, 抑制正常細(xì)胞的凋亡和誘導(dǎo)血管的生成，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。相反，當(dāng)炎癥被抑制時(shí)，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展就會(huì)被阻止。NLR可在一定程度上反映機(jī)體抑制免疫監(jiān)視功能及促進(jìn)腫瘤最終發(fā)生發(fā)展的能力，是評(píng)估惡性腫瘤復(fù)發(fā)概率的重要因素[20]。PLR已被證實(shí)是胰腺癌[21]、腸癌[22]和胃癌[23]等惡性腫瘤中有價(jià)值的預(yù)后相關(guān)因素。研究[24]證實(shí), NLR、PLR等一系列炎癥因子與肝癌、胰腺腫瘤等多種腫瘤的組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移、發(fā)生及進(jìn)展有一定的相關(guān)性。本研究結(jié)果證實(shí)了患者治療前NLR、PLR與HBsAg、AFP、肝硬化、腫瘤分級(jí)、脈管內(nèi)癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)均相關(guān)(P<0.05)。研究[8]證實(shí)離子通道與細(xì)胞內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)也存在相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示, Eag1在HCC中的表達(dá)與外周血NLR、PLR呈顯著正相關(guān)(r=0.413,P=0.001;r=0.329,P=0.001)。

綜上所述, HCC組織中Eag1表達(dá)水平顯著增高，與HBsAg、血清AFP、肝硬化、腫瘤分級(jí)、脈管內(nèi)癌栓、術(shù)后復(fù)發(fā)均相關(guān)，是判斷癌癥預(yù)后較差的有效指標(biāo)，提示在HCC惡性進(jìn)展中Eag1表達(dá)是關(guān)鍵的分子事件之一。HCC中Eag1高表達(dá)顯著影響外周血中NLR、PLR, 提示其參與乙型肝炎病毒感染導(dǎo)致的慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌的發(fā)生過(guò)程，表明其與機(jī)體的免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)存在一定的相關(guān)性。因此, HCC中Eag1表達(dá)水平既能反映患者炎癥狀態(tài)，又能作為判斷其預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。