金麗霞, 劉 丹, 張廣煒, 馮佳佳

急性腦梗死是最常見的腦血管疾病之一，約占腦卒中的60%～70%[1]，具有急性起病、進(jìn)展較塊等特點(diǎn)。急性腦梗死的發(fā)生是由一系列在時(shí)間和空間上演變而形成的復(fù)雜的病理生理過程。目前，我們對于急性腦梗死發(fā)生的分子機(jī)制認(rèn)識較少，臨床上主要依靠影像學(xué)和血流動(dòng)力學(xué)來評估病情的嚴(yán)重程度及預(yù)后[2～4]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)LncRNA可參與腦梗死后腦缺血再灌注損傷及神經(jīng)功能損傷等過程[5]。LncRNA RP11-147L13.8是LncRNA RP11的家族成員之一，但現(xiàn)階段仍未有研究報(bào)道LncRNA RP11與急性腦梗死的發(fā)生存在相關(guān)性?；诖?，本實(shí)驗(yàn)探索外周血LncRNA RP11-147L13.8與急性腦梗死的相關(guān)性，為預(yù)測急性腦梗死的發(fā)生提供潛在靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選擇2021年5月-2021年12月在我科住院的急性腦梗死患者50例(病例組)和非腦梗死患者50例(對照組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合1996年全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn);滿足CISS卒中分類標(biāo)準(zhǔn);CISS分型為動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死，年齡≥18歲，發(fā)病時(shí)間≤7 d，第一次發(fā)病，且治療過程中無再發(fā)腦梗死。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往曾有腦出血病史或CT顯示存在腦出血;有明顯的心、肝、腎功能不全及惡性腫瘤;存在心房顫動(dòng)等嚴(yán)重心律失常;心源性栓塞所致的卒中患者。該實(shí)驗(yàn)已經(jīng)通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 LncRNA RP11-147L13.8的測定 患者入院次日清晨空腹采集外周肘靜脈血4 ml，置入抗凝集管內(nèi)，放置-80 ℃冰箱待測。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平，采用2-△△CT法分析LncRNA RP11-147L13.8的相對表達(dá)量，對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 腦梗死組與對照組的一般臨床特征資料比較 兩組一般臨床特征比較，結(jié)果顯示TC、TG、LDL-C、HDL-C和高脂血癥病史，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史和糖尿病史，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

表1 腦梗死組與對照組一般臨床特征資料比較

2.2 外周血LncRNA RP11-147L13.8在腦梗死組和對照組中表達(dá)水平的比較 結(jié)果顯示，腦梗死組患者外周血LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平(8.733±7.355)明顯高于對照組(4.026±4.405)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見圖1)。

圖1 外周血LncRNA RP11-147L13.8在腦梗死組和對照組中表達(dá)水平的比較

2.3 腦梗死組與對照組的臨床特征資料及外周血LncRNA RP11-147L13.8的相關(guān)性分析 急性腦梗死的發(fā)生與性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史、糖尿病史和外周血LncRNA RP11-147L13.8表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.05);而與TC、TG、LDL-C、HDL-C和高脂血癥病史無關(guān)(P>0.05)(見表2)。

表2 腦梗死組與對照組臨床特征及外周血LncRNA RP11-147L13.8的相關(guān)性分析

2.4 急性腦梗死發(fā)病危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析 以急性腦梗死發(fā)病為因變量，以性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史、糖尿病史和LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平為自變量，采用二元Logistic回歸分析法進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：高血壓病史和LncRNA RP11-147L13.8是急性腦梗死發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表3)。

表3 急性腦梗死發(fā)病危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析

2.5 外周血LncRNA RP11-147L13.8診斷急性腦梗死的ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示，得到LncRNA RP11-147L13.8診斷急性腦梗死的曲線下面積為0.750(95%CI0.656～0.845，P<0.001),臨界值為0.4，敏感度為0.66，特異度為0.74。因此，LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)對急性腦梗死診斷具有一定的價(jià)值(見圖2)。

圖2 外周血LncRNA RP11-147L13.8的ROC曲線

3 討 論

急性腦梗死是指各種原因引起的腦供血?jiǎng)用}血流障礙造成的腦組織缺血缺氧性壞死。若血流障礙得不到及時(shí)的糾正，則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺損以及一系列并發(fā)癥的發(fā)生。目前，臨床上缺乏可靠的生物標(biāo)記物用于急性腦梗死的早期診斷。故尋找與急性腦梗死發(fā)生相關(guān)的外周血標(biāo)記物尤為重要。

長鏈非編碼RNA是一組長度大于200 nt的RNA分子，缺乏編碼功能。大多數(shù)LncRNA被RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄[6]。LncRNA可以調(diào)控基因的表達(dá)，與缺血性腦卒中等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)[7]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA以穩(wěn)定性二級結(jié)構(gòu)作為游離核酸在人體外周血液中出現(xiàn)，其含量相對穩(wěn)定。然而LncRNA在疾病狀態(tài)下血液中的表達(dá)異常，有助于疾病的早期診斷和預(yù)后評估[8,9]。田春歐等[10]發(fā)現(xiàn)，患者外周血液中差異表達(dá)的LncRNA與急性腦梗死的發(fā)生具有一定的相關(guān)性。

本課題檢測了腦梗死組與對照組患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)情況，同時(shí)探討LncRNA RP11-147L13.8與腦梗死的相關(guān)性。結(jié)果顯示：腦梗死患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平明顯高于對照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P<0.01)。急性腦梗死的發(fā)生與外周血LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)水平呈正相關(guān)。Logistic回歸分析顯示，LncRNA RP11-147L13.8是急性腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。ROC曲線分析顯示，LncRNA RP11-147L13.8診斷腦梗死的曲線下面積是0.750，由此LncRNA RP11-147L13.8對急性腦梗死的診斷具有一定的診斷價(jià)值。

性別、年齡、高血壓和糖尿病是急性腦梗死發(fā)生的危險(xiǎn)因素[11]。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與大量回顧性研究結(jié)果一致[12]。本次研究首次提出了急性腦梗死患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達(dá)上調(diào)，可以對腦梗死患者的診斷提供一定的價(jià)值。因此，LncRNA RP11-147L13.8有望成為急性腦梗死患者外周血中的診斷指標(biāo)。

目前，缺乏LncRNA RP11-147L13.8與心腦血管疾病相關(guān)性的文獻(xiàn)。研究表明，LncRNA N_R 120420在腦梗死患者外周血中的表達(dá)水平明顯高于健康組,同時(shí)外周血中的LncRNA N_R 120420可以作為急性腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[10]。Zhu等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在腦梗死患者外周血白細(xì)胞中LncRNA MIAT的表達(dá)會(huì)上調(diào)，并與NIHSS評分，嚴(yán)重程度和梗死面積等相關(guān)。他們還發(fā)現(xiàn)LncRNA MIAT是腦梗死患者的獨(dú)立預(yù)后因素，與高表達(dá)LncRNA MIAT組相比，低表達(dá)LncRNA MIAT組預(yù)后更好，生存時(shí)間更長。因此，外周血白細(xì)胞中的LncRNA MIAT可作為急性腦梗死的一種新的診斷和預(yù)后標(biāo)志物。研究表明，腦梗死患者血漿中的LncRNA PITPNA-AS1通過微滴式數(shù)字PCR檢測，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平高于對照組，LncRNA PITPNA-AS1有可能成為急性腦梗死的生物標(biāo)記物[14]。同時(shí)也在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證了這種現(xiàn)象，Zhang等[15]人研究發(fā)現(xiàn)，建立小鼠腦梗死模型，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測小鼠模型中LncRNA SNHG14的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)LncRNA SNHG14的表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)敲除LncRNA SNHG14可通過miR-199b/AQP4軸抑制炎癥和氧化應(yīng)激，進(jìn)而減輕缺血性腦損傷。因此，我們認(rèn)為LncRNA RP11-147L13.8可能參與急性腦梗死的發(fā)生和發(fā)展，但值得注意的是LncRNA RP11-147L13.8在急性腦梗死中的確切機(jī)制仍未明確。

研究表示，腦梗死患者全血中LncRNA的表達(dá)會(huì)隨時(shí)間的變化而發(fā)生顯著改變[16]。本研究中腦梗死患者納入標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)病時(shí)間要小于7 d，因此未進(jìn)行與腦梗死發(fā)病時(shí)間相關(guān)性探討。本課題的局限性在于納入樣本量較少，有關(guān)LncRNA RP11-147L13.8與心腦血管疾病相關(guān)的文獻(xiàn)較少，結(jié)果可能存在偶然性或錯(cuò)誤性。因此，在今后的研究中需要加大樣本量來進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。綜上所述，LncRNA RP11-147L13.8與急性腦梗死具有一定的相關(guān)性，并有望成為診斷急性腦梗死的新靶點(diǎn)。但其具體的靶向機(jī)制和真正的臨床應(yīng)用還需進(jìn)一步探索和研究。