趙婷婷，徐 艷，胡成剛，唐 娟，陳桃香，胡家震

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025)

粉背南蛇藤(Celastrushypoleucus(Oliv.)Warb.ex Loes.)為衛(wèi)矛科南蛇藤屬多年生藤狀灌木植物，又名博根藤、落霜紅、綿藤、麻妹條、來阿片等。據(jù)記載，其在貴州分布于梵凈山、松桃、印江、石阡、施秉、遵義、雷公山等地，以根入藥，有化瘀消腫、止血生肌之功效，民間常用來治療跌打腫痛、刀傷等[1～5]。研究報道[6～8]，粉背南蛇藤主要含萜類、黃酮類等化合物，其中雷公藤紅素與扁蒴藤素抗炎、抗腫瘤、免疫活性作用顯著。粉背南蛇藤作為《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003版)收載品種南蛇藤根藥材的法定來源之一[3]，地標(biāo)下的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)較低，難以質(zhì)控，目前有關(guān)粉背南蛇藤的研究報道主要集中在化學(xué)成分方面，尚未見生藥學(xué)鑒別方面的報道。為此，本課題組按現(xiàn)行貴州省地方藥材標(biāo)準(zhǔn)(2015年修訂)的相關(guān)要求，對粉背南蛇藤藥材進(jìn)行了較為系統(tǒng)的生藥鑒定研究；并檢查了粉背南蛇藤藥材的水分、總灰分、酸不溶性灰分和浸出物；以南蛇藤素為對照品，采用薄層色譜法對其進(jìn)行定性鑒別，為粉背南蛇藤藥材初步建立相應(yīng)的質(zhì)量控制方法。

1 儀器和試藥

儀器：MODEL BX43F光學(xué)顯微鏡和顯微顯像系統(tǒng)、載玻片、蓋玻片、鑷子、小刀、燒杯、量筒、AG285電子分析天平(Mettler toledo)、ZF-20D暗箱式紫外分析儀、毛細(xì)管、硅膠G薄層板、展開缸、DZF-6050型真空干燥箱、KQ5200DB型數(shù)控超聲清洗器。

試劑：乙酸乙酯、甲醇、石油醚(30～60)、三氯甲烷、環(huán)己烷、甲苯、二氯甲烷均為分析純，磷鉬酸；南蛇藤素對照品(北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司，17101710)、扁蒴藤素對照品(北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司，批號：YO4J6Wl)。

藥材：粉背南蛇藤藥材于2018年采自貴州省貴陽、龍里等3個不同地區(qū)。原植物與藥材均經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)生藥實驗室孫慶文教授鑒定，憑證標(biāo)本存放于貴州中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本館。藥材產(chǎn)地信息見表1。

表1 藥材收集信息Tab.1 Information of the medicinal materials

2 方法與結(jié)果

2.1 鑒別

2.1.1 粉背南蛇藤藥材的性狀鑒別

本品呈圓柱形，細(xì)長彎曲，直徑1～2.5 cm，少數(shù)直徑可達(dá)3 cm。表面棕黃色或棕褐色，具細(xì)縱皺紋，可見橫長的橢圓形的皮孔樣凸起。質(zhì)堅硬，不易折斷，斷面不平坦，淡黃白色或灰白色，纖維性，有放射狀紋理，有排列不規(guī)則的小孔。氣香，味微苦。見圖1。

圖1 粉背南蛇藤藥材和飲片圖Fig.1 Celastrus hypoleucus medicinal materials anddecoction pieces

2.1.2 顯微鑒別

2.1.2.1 粉背南蛇藤根橫切面

通過觀察粉背南蛇藤根橫切片，歸納其顯微鑒別特征如下：橫切面呈圓形，木栓層為10～15列扁平細(xì)胞，皮部較寬，占橫切面半徑的1/3，皮層為薄壁細(xì)胞，內(nèi)含有大量淀粉粒，并有石細(xì)胞成群或單個散在，中央形成層環(huán)紋呈類圓形，射線明顯，木質(zhì)部細(xì)胞均木化，由導(dǎo)管和木纖維組成，大型導(dǎo)管多單個或2～3個成群，周圍有管胞及多數(shù)木纖維；木纖維寬4～6列細(xì)胞(圖2)。

圖2 粉背南蛇藤根橫切面顯微圖Fig.2 Micrograph of the cross section of Celastrus hypoleucus root

2.1.2.2 粉背南蛇藤粉末顯微鑒別

通過對3批粉背南蛇藤藥材的粉末制片進(jìn)行觀察，總結(jié)了其粉末顯微鑒別特征：本品粉末呈深棕色。淀粉粒眾多，單粒呈類圓形，臍點點狀或裂縫狀；復(fù)粒由2～3分粒組成，有的可見層紋。無草酸鈣簇晶，具少數(shù)草酸鈣方晶。棕色塊隨處散在，形狀、大小及顏色不一。導(dǎo)管主為具緣紋孔，多呈碎片狀，紋孔排列緊密，較多為網(wǎng)紋導(dǎo)管，也有少數(shù)螺紋導(dǎo)管。纖維眾多，多成束或散在，長條形，末端漸尖，具紋孔，木纖維常見，壁厚。木栓細(xì)胞棕色，壁稍厚。石細(xì)胞淡黃綠色，呈類方形、類長方形或一邊斜尖，層紋明顯，紋孔及孔溝明顯。見圖3。

圖3 粉背南蛇藤根粉末顯微鑒別Fig.3 Microscopic identification of the root powder of Celastrus hypoleucus

2.1.3 薄層鑒別

取粉背南蛇藤藥材粉末2 g，于50 mL具塞錐形瓶中，加入20 mL乙酸乙酯，于30 ℃下超聲30 min，靜置放冷，過濾，即得供試品溶液。另取南蛇藤素對照品適量，用甲醇溶解配制成 1.1 mg/mL 的溶液，即得對照品溶液。參照《中國藥典》2015版四部通則薄層色譜法(通則0502)試驗，分別吸取供試品溶液和南蛇藤素對照品溶液3 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-石油醚-丙酮(2∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的磷鉬酸顯色劑，加熱至斑點清晰，進(jìn)行檢視。在此試驗條件下，在供試品色譜中與南蛇藤素對照品色譜相同的位置上，顯示相同顏色的斑點，分離度較好，斑點顯色清晰(圖4)。

圖4 3個批次粉背南蛇藤藥材的薄層色譜圖Fig.4 TLC of the three batches of Celastrus hypoleucus

2.2 檢查

2.2.1 水分

按照2015版《中國藥典》四部通則0832水分測定法項下第二法(烘干法)測定。取本品粉末各4 g，平鋪于恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過10 mm，精密稱定，打開瓶蓋在105 ℃下干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，冷卻，稱重，直至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計算供試品中的含水量(%)。每批做三個平行樣，結(jié)果見表2。

表2 粉背南蛇藤藥材的水分測定結(jié)果(單位：%)Tab.2 Moisture measurement results of Celastrus hypoleucus

實驗數(shù)據(jù)表明，3批粉背南蛇藤藥材中的水分含量的差異性較小，平均含量為10.58%。含水量較高的批次(20180828033)是采自花溪高坡石門村的粉背南蛇藤藥材，為11.38%；較低的批次(20180823032)是采自花溪高坡擾繞村的粉背南蛇藤藥材，為9.65%。

2.2.2 灰分測定2.2.2.1 總灰分測定

照2015版《中國藥典》四部通則2302灰分測定法項下總灰分測定法測定。取藥材粉末3 g，于熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量，緩緩熾熱，于200 ℃炭化2 h，注意避免燃燒，完全炭化時，漸升高溫度至600 ℃，保持600 ℃熾灼4 h，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量(%)。結(jié)果見表3。

表3 粉背南蛇藤藥材總灰分測定結(jié)果(%)Tab.3 Total ash measurement results of Celastrus hypoleucus

結(jié)果表明，3批粉背南蛇藤藥材中的總灰分存在比較大的差異，平均含量為4.94%。含量最高的批次(20180828033)是采自花溪高坡石門村的粉背南蛇藤藥材，為6.80%；最低的批次(20180719031)是采自龍里羊場鎮(zhèn)的粉背南蛇藤藥材，為2.81%。

2.2.2.2 酸不溶性灰分測定

照2015版《中國藥典》四部通則2302灰分測定法項下酸不溶性灰分測定法測定。取上項所得的灰分，于坩堝中小心加入稀鹽酸約10 mL并用表面皿覆蓋坩堝，置于水浴上加熱10 min，表面皿用熱水5 mL沖洗，洗液并入坩堝中，用定量濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘渣用純水洗于濾紙上，洗滌至洗液用硝酸銀溶液檢測不顯氯化物反應(yīng)為止，將濾渣和濾紙移置同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量，算供試品中酸不溶性灰分的含量(%)。結(jié)果見表4。

表4 粉背南蛇藤酸不溶性灰分測定Tab.4 Acid-insoluble ash measurement resultsof Celastrus hypoleucus

結(jié)果表明，3批粉背南蛇藤藥材中的酸不溶性灰分的差異性較大，平均含量為2.49%。含量較高的批次(20180828033)是采自花溪高坡石門村的粉背南蛇藤藥材，為3.00%；含量較低的批次(20180719031)是采自龍里羊場鎮(zhèn)的粉背南蛇藤藥材，為2.05%。

2.2.3 浸出物

照2015版《中國藥典》四部通則2201浸出物測定法分別進(jìn)行水溶性浸出物和醇溶性浸出物測定。取同一批藥材樣品粉末，以水和溶解范圍較廣的70%乙醇為溶劑分別進(jìn)行冷浸法和熱浸法的條件考察，確定浸出物采用的方法。

表5 冷浸法和熱浸法水溶性測定結(jié)果比較Tab.5 Comparison of water solubility determination resultsbetween cold leaching method and hot leaching method

結(jié)果表明，無論是水溶性浸出物還是醇溶性浸出物都是熱浸法，浸出率比較高，因此選擇熱浸法，因粉背南蛇藤藥材在《中國藥典》中并無收載，照上述方法分別考察以0%(純水)、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇和95%乙醇作為溶劑對苦皮藤藥材的浸出率。結(jié)果見表6。

表6 不同濃度乙醇的浸出物測定結(jié)果Tab.6 Determination results of extracts by differentconcentrations of alcohol

結(jié)果表明，乙醇濃度越高，浸出率越低，相反的醇濃度越低，浸出率越高，以水為溶劑時浸出率最高，因此以水為溶劑進(jìn)行3批粉背南蛇藤藥材的浸出物測定，結(jié)果見表7。

表7 粉背南蛇藤藥材水溶性熱浸出物測定結(jié)果Tab.7 Determination results of water-soluble extract inCelastrus hypoleucus by hot leaching method

結(jié)果表明，3批粉背南蛇藤藥材的水溶性浸出物差異較大，平均值為15.52%，含量較高的批次(20180828033)是采自花溪高坡石門村的粉背南蛇藤藥材，為17.38%；較低的批次(20180719031)是采自龍里羊場鎮(zhèn)的粉背南蛇藤藥材，為12.74%。

3 討論

粉背南蛇藤在《貴州省中藥材·民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003年版)中僅記載了性狀鑒別項，本研究對粉背南蛇藤藥材及飲片進(jìn)行性狀觀察、對性狀鑒別項的描述更加具體，且在觀察其飲片時發(fā)現(xiàn)其他特性，藥材表面可見很長的橢圓形皮孔樣凸起，斷面有放射狀紋理，有排列不規(guī)則的小孔；本實驗還對粉背南蛇藤根藥材進(jìn)行薄層鑒別研究，結(jié)果表明，3批供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，分離度較好，斑點顯色清晰。實驗中對展開系統(tǒng)、提取溶劑、點樣量等條件及方法耐用性進(jìn)行了考察，結(jié)果重復(fù)性好，專屬性強，該法鑒別粉背南蛇藤藥材操作簡單，快速準(zhǔn)確，可作為粉背南蛇藤藥材的質(zhì)量控制方法之一。

本研究參照《中國藥典2015版》(四部)(通則0832第二法、通則2302、通則2201)分別對粉背南蛇藤藥材進(jìn)行水分、灰分、浸出物的檢查。3個批次粉背南蛇藤水分平均值為10.61%、總灰分平均值為4.95%、酸不溶性灰分平均值為2.50%、水溶性浸出物平均值為15.52%。該研究制定的方法操作簡便，可有效控制粉背南蛇藤質(zhì)量，該方法將為黔產(chǎn)粉背南蛇藤載入地方標(biāo)準(zhǔn)提供實驗基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。