陳 杰，吳科芳

(1.慈溪市第三人民醫(yī)院醫(yī)療健康集團(tuán)(總院) 呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，浙江 寧波 315324；2.慈溪市第三人民醫(yī)院醫(yī)療健康集團(tuán)長(zhǎng)河分院 內(nèi)科，浙江 寧波 315324)

肺癌的發(fā)病率和死亡率呈快速增長(zhǎng)。鱗癌占非小細(xì)胞肺癌的25%～30%，細(xì)胞毒性藥物是晚期肺鱗癌的主要治療手段。近年來(lái)，隨著基因測(cè)序技術(shù)、生物醫(yī)學(xué)水平的快速發(fā)展，抗腫瘤藥物研發(fā)的焦點(diǎn)逐漸從傳統(tǒng)細(xì)胞毒性藥物轉(zhuǎn)移到靶點(diǎn)特異性抗腫瘤藥物。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(fibroblast growth factor receptors，F(xiàn)GFRs)屬于酪氨酸蛋白激酶型受體的一種，能夠與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factors，F(xiàn)GFs)結(jié)合，參與細(xì)胞的增殖、分化、新生血管形成、創(chuàng)傷修復(fù)等生理過(guò)程。FGFRs異常表達(dá)可使細(xì)胞過(guò)度增殖，F(xiàn)GFRs還與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、腫瘤新生血管形成及化療藥物抗藥性有關(guān)，因此被認(rèn)為是抗腫瘤藥物的分子靶點(diǎn)。FGFR1是FGFRs的4種亞型之一，研究發(fā)現(xiàn)FGFR1高表達(dá)與肺癌的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系。本研究對(duì)比觀察FGFR1在肺鱗癌組織與癌旁組織中的表達(dá)水平，探討其與肺鱗癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，為肺鱗癌臨床診斷、靶向治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2014年6月—2016年5月于慈溪市第三人民醫(yī)院接受治療的45例肺鱗癌患者的臨床資料，其中男27例，女18例；年齡34～82歲，平均(58.29±6.73)歲；有吸煙史31例；分化程度：低分化21例，中分化16例，高分化8例；有淋巴轉(zhuǎn)移27例；第8版國(guó)際肺癌TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期12例，Ⅲ期9例，Ⅳ期6例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②符合2015年版WHO肺腫瘤組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)中鱗狀細(xì)胞癌的組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)；③未接受過(guò)放、化療；④信息資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位的惡性腫瘤；②妊娠、哺乳期婦女；③精神疾病史。

1.2 材料和試劑 兔源FGFR1多克隆抗體由美國(guó)Abnova公司提供，SP免疫組化試劑盒、磷酸鹽緩沖液(PBS)及生物素標(biāo)記的二抗均購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，二甲基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 檢測(cè)

1.3.1 免疫組化 收集所有45例患者的肺鱗癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本，石蠟包埋切片。取5 μm石蠟組織連續(xù)切片，脫蠟，梯度酒精水化，PBS漂洗3×5 min。所有組織標(biāo)本均采用微波修復(fù)抗原，滴加兔源FGFR1多克隆抗體(1∶100稀釋)，4 ℃冰箱過(guò)夜。取出切片，PBS漂洗3×5 min。依次滴加生物素標(biāo)記的二抗和SP溶液，每片滴加新鮮配制的DAB顯色液，光學(xué)顯微鏡下控制反應(yīng)時(shí)間(1～5 min)，蒸餾水充分沖洗，復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，中性樹(shù)膠封固。

1.3.2 結(jié)果判定 400倍光學(xué)顯微鏡下每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，要求細(xì)胞定位明確，間質(zhì)清晰，無(wú)背景著色，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例與細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)﹤5%為陰性(-)，計(jì)0分；5%～25%為弱陽(yáng)性(+)，計(jì)1分；26%～50%為中度陽(yáng)性(++)，計(jì)2分；>50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，其中51%～75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分。按照染色的深淺分為不著色(0分)、淡黃色(1分)、黃色(2分)、棕黃色(3分)4級(jí)。最終表達(dá)結(jié)果為每張切片陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分的乘積，陰性表達(dá)指分?jǐn)?shù)≤3分，陽(yáng)性表達(dá)指分?jǐn)?shù)﹥3分。

1.4 隨訪 統(tǒng)計(jì)隨訪時(shí)間和生存情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料比較采用檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用檢驗(yàn)，繪制Kaplan-Meier生存曲線，肺鱗癌患者預(yù)后的影響因素采用多因素Logistic回歸模型分析。<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FGFR1在肺鱗癌及癌旁組織中的表達(dá) FGFR1在肺鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率(62.22%，28/45)高于在癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率(35.56%，16/45)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(=6.403，<0.05)。

2.2 FGFR1在不同臨床資料肺鱗癌患者中的表達(dá)情況 肺鱗癌患者FGFRl陽(yáng)性表達(dá)組和陰性表達(dá)組的性別、吸煙史、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移、TNM分期比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 FGFR1在不同臨床資料肺鱗癌患者中的表達(dá)情況[n(%)]Table 1 FGFR1 expression in lung squamous cell carcinoma patients[n(%)]

2.3 FGFR1表達(dá)與肺鱗癌患者預(yù)后的關(guān)系 該組病例中40例獲得隨訪，失訪5例，隨訪時(shí)間3.9～41.0個(gè)月，平均隨訪時(shí)間為(24.40±6.10)個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為25.80個(gè)月，其中FGFR1表達(dá)陽(yáng)性組患者中位生存時(shí)間為24.94個(gè)月，F(xiàn)GFR1表達(dá)陰性組患者中位生存時(shí)間為35.09個(gè)月。兩組患者生存時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。多因素Logistic回歸分析顯示，分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移、TNM分期、吸煙史、FGFR1陽(yáng)性是影響肺鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 肺鱗癌患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析Table 2 Multivariate Logistic regression analysis of prognosis of patients with lung squamous cell carcinoma

3 討論

流行病學(xué)研究顯示，肺鱗癌發(fā)生率僅次于肺腺癌，全球每年約有40萬(wàn)患者死于肺鱗癌。肺癌不同個(gè)體或同一個(gè)體處于不同狀態(tài)下的基因和蛋白表達(dá)譜不同，存在明顯的個(gè)體特征。個(gè)體化治療模式逐漸成為腫瘤臨床治療研究的熱點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)GFR1在肺鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，提示FGFR1的高表達(dá)可能是引起肺鱗癌發(fā)生發(fā)展的重要原因。肺鱗癌患者中發(fā)生FGFR1基因擴(kuò)增的概率為10.7%～20.7%，高于肺腺癌的3%。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GFR1基因擴(kuò)增和表達(dá)與吸煙狀況有關(guān)，男性、有吸煙史的肺鱗癌患者的FGFR1陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于女性和無(wú)吸煙史患者。本研究結(jié)果顯示，肺鱗癌患者FGFRl陽(yáng)性表達(dá)組和陰性表達(dá)組的性別、吸煙史、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移、TNM分期均有顯著差異，F(xiàn)GFR1表達(dá)陽(yáng)性組患者中位生存時(shí)間短于FGFR1表達(dá)陰性組患者，提示FGFR1表達(dá)與肺鱗癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后存在密切關(guān)聯(lián)。有文獻(xiàn)報(bào)道，胃癌患者FGFR1表達(dá)與腫瘤分化程度、TNM分期呈正相關(guān)，可能與lncRNA-BBOX1-2正向調(diào)節(jié) FGFR1表達(dá)參與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。賴蓉的研究結(jié)果顯示，肺鱗癌原發(fā)灶SUVmax與T分期存在顯著關(guān)聯(lián)，相關(guān)系數(shù)為0.324(=0.005)，與 N、M分期無(wú)關(guān)。王雨亮的研究結(jié)果顯示FGFRl的基因擴(kuò)增與TNM分期無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果顯示，TNM分期Ⅳ期患者FGFRl陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于其他TNM分期者，后續(xù)還需加大樣本量和延長(zhǎng)隨訪時(shí)間，進(jìn)一步明確FGFRl表達(dá)在肺鱗癌患者中的臨床意義。經(jīng)多因素Logistic回歸分析顯示，分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移、TNM分期、吸煙史、FGFR1陽(yáng)性是影響肺鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示FGFR1表達(dá)可作為預(yù)測(cè)肺鱗癌患者生存質(zhì)量的臨床指標(biāo)及治療靶點(diǎn)。

綜上所述，F(xiàn)GFR1在肺鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于在癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，F(xiàn)GFRl表達(dá)在不同性別、吸煙史、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移、TNM分期的肺鱗癌組織中的表達(dá)存在顯著差異。FGFRl陽(yáng)性是影響肺鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，F(xiàn)GFRl表達(dá)結(jié)果可作為判斷肺鱗癌患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的重要參考指標(biāo)。