陳脊宇 何 航 王 芬 張崇英 朱 燕 潘 曉 羅永莉 向邦全*

(1.重慶三峽職業(yè)學(xué)院動物科技學(xué)院，重慶 404155；2.北京英惠爾生物技術(shù)有限公司，北京 100083；3.重慶市畜牧技術(shù)推廣總站，重慶 401120；4.重慶市合川區(qū)畜牧站，重慶 401520)

隨著人們對優(yōu)質(zhì)畜禽產(chǎn)品的要求越來越高，畜禽養(yǎng)殖過程中的抗生素濫用導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性、抗生素殘留等問題逐漸被人們所關(guān)注[1-2]。2019年，國家“禁抗令”的頒布，尋找安全、綠色、高效的抗生素替代物成為研究的熱點問題。作為新型飼料添加劑的益生菌及其發(fā)酵產(chǎn)物因具有改善畜禽生產(chǎn)性能、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等優(yōu)點而備受關(guān)注[3]。酵母培養(yǎng)物是酵母菌在特定培養(yǎng)基上充分厭氧發(fā)酵后形成的微生態(tài)產(chǎn)物，主要由酵母代謝物、發(fā)酵培養(yǎng)基和少量酵母細(xì)胞組成，因其富含氨基酸、葡聚糖、甘露聚糖和B族維生素等功能性物質(zhì)，對改善飼糧營養(yǎng)價值，提高畜禽生產(chǎn)性能有一定作用[4]。大量的研究已經(jīng)證實，在畜禽飼糧中添加酵母培養(yǎng)物，對改善畜禽生產(chǎn)性能、提高產(chǎn)品品質(zhì)有潛在的優(yōu)勢。Zhang等[5]研究指出，在肉鵝飼糧中添加1.0%和2.0%酵母培養(yǎng)物對提高鵝肉血清谷胱甘肽含量及過氧化氫酶和谷胱甘肽還原酶活性有促進(jìn)作用，添加酵母培養(yǎng)物對提升鵝肉抗氧化能力有益。Liu等[6]則發(fā)現(xiàn)，在54周齡老母雞飼糧中添加2.0 g/kg酵母培養(yǎng)物，通過改善回腸腸道微生物菌群，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率。Sun等[7]研究則表明，隨著酵母培養(yǎng)物添加水平的增加，干物質(zhì)消化率、法氏囊器官相對重呈線性增加。也有研究指出，在肉雞飼糧中添加1.5～2.0 g/kg酵母菌及其發(fā)酵產(chǎn)品，對回腸蛋白質(zhì)消化率和胰酶活性有積極影響，能顯著提高肉雞生產(chǎn)性能和肉產(chǎn)量[8]。Zhen等[9]研究表明，在肉雞飼糧中添加0.8%～1.0%酵母培養(yǎng)物，能顯著提高瘤胃球菌(Ruminococcus)、丙酸桿菌(Propionibacteriaceae)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)的數(shù)量，對改善肉雞腸道微生物有顯著作用。而在對蛋雞的研究中則發(fā)現(xiàn)，在老齡蛋雞飼糧中添加酵母培養(yǎng)物，十二指腸食糜中的糜蛋白酶和α-淀粉酶活性分別增加了54.8%和62.5%，血漿內(nèi)毒素含量減少了44.1%，提高了老齡蛋雞營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收和健康[10]。

綜上所述，酵母培養(yǎng)物已在畜禽生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用，且得到了較好的研究結(jié)果。但目前關(guān)于酵母培養(yǎng)物對中國地方蛋肉兼用型雞的研究還相對比較缺乏。五黑雞作為優(yōu)良的中國地方品種，是世界罕見的珍禽品種，具有蛋用、肉用、藥用和觀賞用的特點。因此，本試驗以五黑雞為研究對象，探究不同添加量酵母培養(yǎng)物對其生長性能、蛋品質(zhì)、雞蛋營養(yǎng)成分及血清生化指標(biāo)的影響，為酵母培養(yǎng)物在五黑雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本試驗所使用酵母培養(yǎng)物含粗蛋白質(zhì)15%、粗脂肪3.3%、粗纖維8.7%、粗灰分8.0%、甘露聚糖3.3%、β-葡聚糖14%、鈣0.1%、磷0.6%、鐵224 mg/kg、鋅37 mg/kg、維生素B15 mg/kg、維生素B26 mg/kg、維生素B610 mg/kg、維生素B120.3 mg/kg等。

1.2 試驗設(shè)計

選擇健康、體況基本一致的23周齡五黑雞600只，隨機分為5組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)20只。5組分別在飼喂基礎(chǔ)飼糧中添加0(對照組)、0.2%、0.4%、0.6%和0.8%的酵母培養(yǎng)物，預(yù)試期1周，試驗期9周。基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)蛋雞的營養(yǎng)需要和《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)進(jìn)行配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗在重慶市合川區(qū)蛋雞場進(jìn)行，采用疊層籠養(yǎng)，試驗期自由采食和飲水，按常規(guī)免疫消毒程序進(jìn)行管理，試驗期圈舍平均溫度為(24.54±1.21)℃，相對濕度為(70.65±2.79)%。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 樣品采集

在試驗開始后第5周，每個重復(fù)隨機選擇12枚雞蛋，3枚參照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》(NT/T 823—2020)測定蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼強度、蛋殼厚度，參照Alkan等[11]的方法測定蛋殼表面積，計算公式為：

蛋殼表面積(cm2)=10.561-0.178×橫徑-

0.045×縱徑+1.535×蛋重。

3枚用于測定蛋黃顏色和哈氏單位；3枚用于測定水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分等常規(guī)營養(yǎng)物質(zhì)含量；3枚用于雞蛋全蛋氨基酸和脂肪酸含量測定。

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 生長性能

參照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》(NY/T 823—2020)測定生長性能，以重復(fù)為單位，每天早上喂料前記錄耗料量，每天記錄產(chǎn)蛋量和蛋重。根據(jù)平均日采食量和平均日產(chǎn)蛋量計算料蛋比。

平均日采食量(g/d)=總采食量/

(每重復(fù)雞只數(shù)×試驗天數(shù));

平均日產(chǎn)蛋量(g/d)=總產(chǎn)蛋量/(每重復(fù)

雞只數(shù)×試驗天數(shù));

料蛋比=平均日采食量/平均日產(chǎn)蛋量。

1.4.2 蛋品質(zhì)

參照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》(NY/T 823—2020)測定蛋形指數(shù)、蛋殼強度、蛋殼厚度、蛋黃顏色和哈氏單位等。

1.4.3 營養(yǎng)成分含量

水分含量：參照GB 5009.3—2016測定，直接干燥法。

粗灰分含量：參照GB 5009.4—2016測定，灼燒法。

粗蛋白質(zhì)含量：參照GB 5009.5—2016測定，凱氏定氮法。

粗脂肪含量：參照GB 5009.6—2016測定，索式抽提法。

氨基酸含量：參照GB 5009.124—2016，氨基酸自動分析儀測定。

脂肪酸含量：參照GB 5009.168—2016，脂肪酸自動分析儀測定。

1.4.4 血清生化指標(biāo)

每個重復(fù)隨機選擇3只雞，于試驗結(jié)束前1天早晨空腹采血。翅靜脈采血5 mL注入無抗凝劑真空采血管。真空管放置于37 ℃恒溫箱析出血清后，再3 500 r/min離心15 min，用微量移液器分離出血清，注明日期和編號，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

利用日立7080全自動血清生化分析儀進(jìn)行分析測定，測定指標(biāo)包括：總蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、球蛋白(globulin,GLO)、尿酸(uric acid,UA)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)含量。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2013初步整理后，用SPSS 22.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，如存在顯著差異，用Duncan氏法做多重比較，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。利用線性和二次方程擬合酵母培養(yǎng)物添加量的影響，當(dāng)P<0.05時，數(shù)據(jù)被認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 酵母培養(yǎng)物對五黑雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，飼糧中添加酵母培養(yǎng)物對平均日采食量、料蛋比、平均蛋重?zé)o顯著影響(P>0.05)，但添加酵母培養(yǎng)物后，料蛋比有一定下降趨勢。與對照組相比，添加0.2%、0.4%和0.6%酵母培養(yǎng)物顯著提高了平均日產(chǎn)蛋量和產(chǎn)蛋率(P<0.05)。隨著飼糧中酵母培養(yǎng)物添加量的增加，平均日采食量、平均日產(chǎn)蛋量、料蛋比、產(chǎn)蛋率均表現(xiàn)出顯著的二次關(guān)系，且均以0.4%添加量最優(yōu)(P平均日采食量=0.03、P平均日產(chǎn)蛋量=0.04、P料蛋比=0.02、P產(chǎn)蛋率=0.04)。

表2 酵母培養(yǎng)物對五黑雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 酵母培養(yǎng)物對五黑雞蛋品質(zhì)及常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

由表3可知，飼糧中添加酵母培養(yǎng)物對五黑雞雞蛋蛋殼表面積、蛋形指數(shù)、蛋殼強度、蛋殼厚度、蛋黃顏色及水分、粗脂肪和粗灰分含量無顯著影響(P>0.05)。與對照組相比，添加酵母培養(yǎng)物顯著提升了雞蛋粗蛋白質(zhì)含量和哈氏單位(P<0.05)。隨著酵母培養(yǎng)物添加量的增多，哈氏單位呈現(xiàn)顯著的線性關(guān)系(P=0.03)，以0.6%添加量表現(xiàn)最優(yōu)。

表3 酵母培養(yǎng)物對五黑雞蛋品質(zhì)和常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

2.3 酵母培養(yǎng)物對五黑雞雞蛋氨基酸含量的影響

由表4可知，與對照組相比，飼糧中添加0.8%酵母培養(yǎng)物顯著提高了雞蛋中天門冬氨酸、絲氨酸、丙氨酸和非必需氨基酸含量(P<0.05)，此外，添加酵母培養(yǎng)物顯著提高了雞蛋總氨基酸含量(P<0.05)。隨著酵母培養(yǎng)物添加量的增多，蛋氨酸含量表現(xiàn)顯著的線性(P<0.01)和二次關(guān)系(P=0.01)；鮮味氨基酸含量則呈現(xiàn)顯著的線性關(guān)系(P=0.01)，二者均以0.8%添加量為最優(yōu)。

表4 酵母培養(yǎng)物對五黑雞雞蛋氨基酸含量的影響

2.4 酵母培養(yǎng)物對五黑雞雞蛋脂肪酸含量的影響

由表5可知，與對照組相比，飼糧中添加酵母培養(yǎng)物顯著提高了雞蛋中油酸含量(P<0.05)。就二十二碳六烯酸含量而言，添加0.6%和0.8%酵母培養(yǎng)物后含量顯著高于對照組(P<0.05)，但0.2%和0.4%組與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。隨著酵母培養(yǎng)物添加量的增多，油酸含量表現(xiàn)顯著的二次關(guān)系(P=0.03)，以0.6%添加量為最優(yōu)；二十二碳六烯酸含量則呈現(xiàn)顯著的線性關(guān)系(P=0.03)，以0.8%添加量為最優(yōu)。

表5 酵母培養(yǎng)物對五黑雞雞蛋脂肪酸含量的影響

2.5 酵母培養(yǎng)物對五黑雞血清生化指標(biāo)的影響

由表6可知，酵母培養(yǎng)物對血清球蛋白、總膽固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白含量無顯著影響(P>0.05)。與對照組相比，飼糧中添加酵母培養(yǎng)物顯著增加了血清總蛋白、白蛋白含量(P<0.05)，顯著降低了血清尿酸含量(P<0.05)。此外，0.4%組血清低密度脂蛋白含量顯著高于其他各組(P<0.05)。

表6 酵母培養(yǎng)物對五黑雞血清生化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 酵母培養(yǎng)物對五黑雞生產(chǎn)性能的影響

本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物對平均日采食量無顯著影響，這與Nursoy等[12]的研究結(jié)果基本一致，其原因與飼糧中的能氮水平有關(guān)，因此，額外添加酵母培養(yǎng)物對其影響不大。但Parlat等[13]研究卻發(fā)現(xiàn)，在日本鵪鶉飼糧中添加1 g/kg的酵母培養(yǎng)物能顯著提高其采食量，本試驗與其存在差異的原因可能由試驗動物和酵母培養(yǎng)物種類不同所致。本試驗中，添加0.2%～0.6%酵母培養(yǎng)物顯著提高了平均日產(chǎn)蛋量和產(chǎn)蛋率，且料蛋比有下降趨勢，表明酵母培養(yǎng)物對五黑雞生產(chǎn)性能的提升有積極效果，這與酵母培養(yǎng)物中富含有機酸、甘露聚糖、氨基酸及其他促生長因子等通過改善動物腸道健康，提升動物生產(chǎn)性能有關(guān)[3-4]；此外，在飼糧中添加酵母培養(yǎng)物，還能抵御病原菌，保障動物機體健康，進(jìn)而提升其產(chǎn)蛋率[14]。

3.2 酵母培養(yǎng)物對五黑雞雞蛋品質(zhì)及常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物對蛋形指數(shù)、蛋殼強度、蛋殼厚度和蛋黃顏色無顯著影響。晏家友等[15]研究指出，添加酵母培養(yǎng)物對蛋品質(zhì)無顯著影響，本試驗與其研究結(jié)果基本一致。哈氏單位是表示蛋的新鮮度和蛋白質(zhì)量的重要指標(biāo)，哈氏單位越大，表明蛋的新鮮度和雞蛋功能物質(zhì)作用越好。本試驗中，添加0.6%和0.8%顯著提高哈氏單位，這表明添加酵母培養(yǎng)物能提高雞蛋新鮮度及功能物質(zhì)，其原因與酵母培養(yǎng)物中富含維生素E、維生素C及鋅、硒、銅、錳等微量元素和其他未知因子發(fā)揮的抗氧化作用有關(guān)[16-18]。本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物促進(jìn)了蛋殼強度和厚度的提升，這表明添加酵母培養(yǎng)物對改善蛋殼質(zhì)量有一定作用，其原因與酵母培養(yǎng)物中富含大量礦物質(zhì)，且提高機體對鈣、磷的消化利用率有關(guān)[3]。

本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物顯著提高了雞蛋粗蛋白質(zhì)含量，且0.4%組最優(yōu)，這表明在蛋雞飼糧中添加一定量的酵母培養(yǎng)物對促進(jìn)雞蛋中蛋白質(zhì)的富集有一定促進(jìn)作用，其原因與酵母培養(yǎng)物富含大量的肽類物質(zhì)被動物機體吸收后，能進(jìn)一步富集在雞蛋中有關(guān)。同時，添加酵母培養(yǎng)物能改善動物對能量的利用率，進(jìn)而加速機體對蛋白質(zhì)和能量的沉積[5]，也可能促進(jìn)蛋白質(zhì)在蛋內(nèi)富集。

3.3 酵母培養(yǎng)物對五黑雞雞蛋氨基酸含量的影響

氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本組成單位，其含量與組成對雞蛋營養(yǎng)成分和風(fēng)味有一定影響。本試驗中，共檢出17種氨基酸，其中必需氨基酸7種，但色氨酸未檢出，其原因主要是由于酸水解處理將色氨酸分解[19]。根據(jù)FAO/WHO提出的理想蛋白質(zhì)模式中，必需氨基酸/總氨基酸(EAA/TAA)和必需氨基酸/非必需氨基酸(EAA/NEAA)應(yīng)分別在0.4和0.6以上。本試驗中，各組EAA/TAA和EAA/NEAA分別在0.4和0.7以上，這表明飼糧中添加酵母培養(yǎng)物對雞蛋氨基酸比值沒有負(fù)面影響。McBain等[20]研究指出，天門冬氨酸可降低血液中氮和二氧化碳沉積，在抗疲勞、改善心肌收縮等方面有一定作用。本試驗中，添加0.8%酵母培養(yǎng)物顯著提高了雞蛋中天門冬氨酸含量，這表明在飼糧中添加高劑量的酵母培養(yǎng)物對促進(jìn)功能氨基酸在雞蛋的沉積有促進(jìn)作用，這與酵母培養(yǎng)物富含的氨基酸可能有關(guān)。研究指出，肝臟在調(diào)節(jié)蛋氨酸中起到至關(guān)重要的作用，因此，蛋氨酸與肝臟的脂質(zhì)代謝有密切聯(lián)系[21]。本試驗中，隨著酵母培養(yǎng)物的添加，蛋氨酸含量逐漸增加，這表明酵母培養(yǎng)物可能對提高五黑雞的脂質(zhì)代謝有促進(jìn)作用。雞蛋鮮味氨基酸對雞蛋的風(fēng)味有重要影響，本試驗中，隨著酵母培養(yǎng)物的添加，鮮味氨基酸含量也逐漸增加，這表明酵母培養(yǎng)物對提升雞蛋風(fēng)味有一定作用，其原因是酵母菌不僅可利用葡萄糖生產(chǎn)醇類，且具有一定產(chǎn)酸能力，酸與醇類物質(zhì)作用可以產(chǎn)生具有特殊鮮味和風(fēng)味的酯類物質(zhì)[22-23]，如油酸乙酯、亞油酸乙酯等。

3.4 酵母培養(yǎng)物對五黑雞雞蛋脂肪酸含量的影響

脂肪酸是人類的重要能量來源之一，也是生物膜的重要組成部分。大量的研究已經(jīng)證明，提高雞蛋中多不飽和脂肪酸對促進(jìn)人類健康有重要作用。研究指出，天然油酸對降低人體心腦血管疾病和軟化血管，減少動脈粥樣硬化有顯著作用[24]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，添加酵母培養(yǎng)物顯著提高了雞蛋油酸含量，這表明酵母培養(yǎng)物能提升雞蛋的健康價值，還能提高蛋雞對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用率，脂肪酸被吸收進(jìn)入血液，通過血液運輸在卵泡富集進(jìn)而沉積在雞蛋中。Hooper等[25]指出，提高亞油酸和α-亞麻酸的攝入量對降低血液膽固醇含量有一定作用[26]。本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物提高了雞蛋亞油酸和α-亞麻酸含量，這與王傳龍等[27]的研究結(jié)果基本一致。其原因與酵母培養(yǎng)物中含有大量的諸如維生素E、黃酮類等具有抗氧化和提高免疫力等的物質(zhì)有關(guān)，這些具有抗氧化性的物質(zhì)或許成為調(diào)控或穩(wěn)定雞蛋中不飽和脂肪酸含量的關(guān)鍵因素[28]。Calder[29]指出，二十二碳六烯酸對促進(jìn)嬰幼兒大腦發(fā)育和行為表達(dá)有正向作用。本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物對提高雞蛋中二十二碳六烯酸含量也有一定作用，其原因可能與酵母培養(yǎng)物中含有的未知營養(yǎng)生長因子有關(guān)[30]，但具體機制有待進(jìn)一步研究。

3.5 酵母培養(yǎng)物對五黑雞血清生化指標(biāo)的影響

血清蛋白代謝的指標(biāo)常用總蛋白、白蛋白含量衡量，其也能間接反映機體新陳代謝狀態(tài)。本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物顯著提高了血清總蛋白和白蛋白含量，這與酵母培養(yǎng)物中富含的肽類物質(zhì)通過腸道屏障作用，大量進(jìn)入細(xì)胞發(fā)生作用并降低氨基酸之間的競爭，進(jìn)而促進(jìn)機體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用有關(guān)[31]。謝穎等[32]的研究也得到了類似結(jié)果。尿酸是動物吸收蛋白質(zhì)后的代謝產(chǎn)物，其含量可以反映動物機體對蛋白質(zhì)的消化利用情況，當(dāng)尿酸含量越低時，機體吸收蛋白質(zhì)越好，其體內(nèi)氨基酸也越平衡[33]。本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物顯著降低了血清尿酸含量，這進(jìn)一步驗證了酵母培養(yǎng)物能通過降低氨基酸之間的競爭，促進(jìn)機體對蛋白質(zhì)的吸收。Loor等[34]指出，甘油三酯含量越低，表明動物機體內(nèi)脂代謝越活躍。也有報道指出，動物血清中高密度脂蛋白含量降低，低密度脂蛋白含量升高時，動物的脂肪合成往往呈現(xiàn)增強趨勢[35-36]。本試驗中，添加酵母培養(yǎng)物對血清甘油三酯和高密度脂蛋白含量無顯著影響，但二者均有下降趨勢，添加酵母培養(yǎng)物顯著降低了血清低密度脂蛋白含量，表明了酵母培養(yǎng)物對促進(jìn)動物機體的脂代謝有一定作用。

4 結(jié) 論

綜合來看，在五黑雞飼糧中添加酵母培養(yǎng)物能有效地改善生產(chǎn)性能，蛋品質(zhì)，雞蛋營養(yǎng)成分、氨基酸和不飽和脂肪酸含量以及血清生化指標(biāo)等，且以0.4%的添加量效果較好。因此，在本試驗條件下，0.4%為酵母培養(yǎng)物的適宜添加量。