梁 嬋 陳代文 何 軍 鄭 萍 毛湘冰 虞 潔 羅玉衡 羅鈞秋 黃志清 閻 輝 余 冰

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所，動(dòng)物抗病營(yíng)養(yǎng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都 611130)

仔豬斷奶階段是機(jī)體免疫力增強(qiáng)和胃腸道發(fā)育完善的關(guān)鍵過渡期，此時(shí)極易遭受外界多種有害因素的干擾，從而引起仔豬腹瀉和生長(zhǎng)性能下降。飼用抗生素是用于預(yù)防和治療斷奶仔豬腹瀉和促生長(zhǎng)的重要手段之一，但目前我國(guó)正處于飼料禁抗的大背景下，因而，推動(dòng)開發(fā)安全、綠色和高效的抗生素替代品和替代方案具有重要意義。近年來，纖維和植物精油作為天然植物的組成部分，具有安全、環(huán)保且來源廣泛等優(yōu)點(diǎn)，引起了眾多研究者的關(guān)注。研究表明，飼糧纖維能夠調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)，增加短鏈脂肪酸(如乙酸、丙酸和丁酸)的產(chǎn)生，對(duì)改善動(dòng)物腸道健康、增強(qiáng)機(jī)體免疫和提高生長(zhǎng)性能具有重要意義[1-2]。植物精油具有抗菌、抗炎和抗氧化的功能，能夠提高動(dòng)物機(jī)體免疫和抗氧化作用，調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)，改善腸道健康，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)[3-4]。然而，在動(dòng)物生產(chǎn)中，單一添加飼糧纖維或植物精油作用有限，均難以達(dá)到完全替代抗生素的效果。有研究表明，將可溶和不溶性纖維復(fù)合添加、多種植物精油混合使用其效果均優(yōu)于單一添加[5-7]。Chen等[8]研究發(fā)現(xiàn)，可溶和不可溶性纖維(0.5%菊粉+0.5%木質(zhì)纖維素)復(fù)合添加對(duì)仔豬促生長(zhǎng)效果優(yōu)于單一纖維；賈淋雁[9]研究指出，仔豬飼糧中添加200 mg/kg復(fù)合植物精油能夠提高仔豬的免疫功能和抗氧化能力，并能緩解豬流行性腹瀉病毒攻毒誘導(dǎo)發(fā)生的腹瀉和生長(zhǎng)性能的下降，且復(fù)合植物精油的添加效果優(yōu)于單一植物精油[10]。此外，蒲俊寧[10]研究表明，植物精油、益生菌和酸化劑(400 mg/kg牛至油+400 mg/kg凝結(jié)芽孢桿菌+3 000 mg/kg苯甲酸)組合添加能提高仔豬抗氧化能力，改善生長(zhǎng)性能并降低仔豬腹瀉。類似的研究也發(fā)現(xiàn)，植物精油與酸化劑、益生菌和酶制劑等聯(lián)合添加在斷奶仔豬生產(chǎn)上的應(yīng)用均表現(xiàn)出協(xié)同的效果[11-13]。不過，關(guān)于植物精油與纖維聯(lián)合使用的效果如何，目前相關(guān)研究缺乏，有待進(jìn)一步探索。因此，本研究推測(cè)復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合使用可能具有潛在的加性效應(yīng)，并考察復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加在大腸桿菌攻毒條件下對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、抗氧化能力和免疫功能的影響，旨在為仔豬無抗飼料的研發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

菊粉：主要成分為天然果聚糖，白色粉末狀，100%可溶，純度>90%，購(gòu)自于陜西某公司；微晶纖維素：已純化并部分解聚的纖維素，白色粉末狀，100%不溶，純度≥99%，購(gòu)自于山東某公司；植物精油：主要活性成分為多種天然植物精油，由3%尤加利精油、2%牛至精油、0.5%百里香精油、0.1%檸檬精油、0.1%大蒜精油和5%椰子油組成，半包被淺褐色粉末，具有中草藥氣味，由四川某公司惠贈(zèng)；金霉素：有效含量15%，使用劑量25～75 g/t；維吉尼亞霉素：有效含量50%，使用劑量10～25 g/t；喹烯酮：有效含量98%，使用劑量50 g/t；產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(血清型O149：K91，K88ac)購(gòu)買于中國(guó)獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因素設(shè)計(jì)，選取28頭(28±1)日齡的健康“杜×長(zhǎng)×大”斷奶仔豬，根據(jù)體重[(7.93±0.44)kg]相近原則，隨機(jī)分為4個(gè)組，分別為對(duì)照組(飼喂基礎(chǔ)飼糧)、攻毒對(duì)照組(飼喂基礎(chǔ)飼糧)、抗生素組(飼喂基礎(chǔ)飼糧+75 mg/kg金霉素+25 mg/kg維吉尼亞霉素+50 mg/kg喹烯酮)和復(fù)合纖維+植物精油組(飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.5%菊粉+0.5%微晶纖維素+200 mg/kg植物精油)，每組7個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭仔豬，單籠飼養(yǎng)。試驗(yàn)期25 d。于試驗(yàn)第22天上午，對(duì)仔豬進(jìn)行空腹稱重后，各試驗(yàn)組試豬一次性灌服10 mL/kg BW大腸桿菌(6×109CFU/mL)懸浮液，而對(duì)照組采用相同方式灌服生理鹽水。

1.3 試驗(yàn)飼糧

基礎(chǔ)飼糧為玉米-豆粕-乳清粉-魚粉型，參考NRC(2012)營(yíng)養(yǎng)需求配制而成，各試驗(yàn)組飼糧均由相應(yīng)產(chǎn)品等量替代基礎(chǔ)飼糧中的玉米構(gòu)成，所有飼糧均為粉料?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所試驗(yàn)基地仔豬試驗(yàn)舍進(jìn)行，所有仔豬按常規(guī)飼養(yǎng)管理方式進(jìn)行。試驗(yàn)期間，每日飼喂3次(08:00、14:00和20:00)，每次以試豬采食結(jié)束后料槽略有余料為度，自由飲水。圈舍室溫保持在26～28 ℃，相對(duì)濕度為45%～75%。對(duì)照組和大腸桿菌攻毒組(試驗(yàn)組)試豬分舍飼養(yǎng)，以防止交叉感染。

1.5 樣品采集與處理

試驗(yàn)第26天，對(duì)所有仔豬空腹稱重后，前腔靜脈采血15 mL，置于普通真空采血管，室溫靜置30 min后低溫離心(3 500 r/min，10 min)，分離出血清，-20 ℃保存，待測(cè)血清生化指標(biāo)。采血完成后，按照試豬體重以0.1 mL/kg肌肉注射術(shù)眠靈注射液(主要成分為賽拉嗪、咪達(dá)唑侖)進(jìn)行麻醉，隨后頸動(dòng)脈放血屠宰，打開腹腔，快速結(jié)扎空腸。于空腸1/2處剪取20 cm腸段，縱向剖開，用生理鹽水沖凈腸道內(nèi)容物并用濾紙吸干水分，使用玻璃片刮取空腸黏膜置于2 mL凍存管中，將樣品放入液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80 ℃保存待測(cè)。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.6.1 生長(zhǎng)性能

于試驗(yàn)第1天和第26天上午，對(duì)空腹過夜的仔豬進(jìn)行稱重，并每日記錄每頭豬只的采食量，計(jì)算第1～25天的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.6.2 血清和腸道抗氧化指標(biāo)

10%空腸黏膜勻漿樣品制備：稱取1 g左右空腸黏膜樣，準(zhǔn)確記錄重量，按重量∶體積=1∶9的比例加入4 ℃預(yù)冷的生理鹽水，于超聲破碎儀勻漿，勻漿液于4 ℃離心機(jī)3 000 r/min離心15 min，吸取上清，分裝后于-80 ℃保存待測(cè)。

血清和空腸黏膜中總抗氧化能力(T-AOC)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量以及空腸黏膜中總蛋白(TP)含量均采用相應(yīng)試劑盒(南京建成生物工程研究所)進(jìn)行測(cè)定，具體操作均嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。

1.6.3 血清和腸道免疫指標(biāo)

血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和白細(xì)胞介素-10(IL-10)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司)進(jìn)行測(cè)定，具體操作均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定空腸黏膜免疫相關(guān)基因IL-6、IL-1β、TNF-α以及Toll樣受體4(TLR4)/髓樣分化因子88(MyD88)信號(hào)通路相關(guān)基因TLR4、CD14、MyD88、白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶1(IRAK1)、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)和核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)p65 mRNA相對(duì)表達(dá)量(詳細(xì)引物序列見表2)，具體操作方法參考Fu等[14]。所有目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量均以β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)為內(nèi)參基因，相對(duì)熒光定量采用2-ΔΔCt法計(jì)算[15]。

表2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列

1.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.4統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析。其中，對(duì)照組和攻毒對(duì)照組之間的差異采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比分析；而試驗(yàn)組所有指標(biāo)均采用Mixed模型進(jìn)行單因素方差分析，并結(jié)合Duncan氏法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以平均值(mean)表示，數(shù)據(jù)的變異性以均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示，以P<0.05視為差異顯著，0.05≤P<0.10視為有差異顯著趨勢(shì)。

2 結(jié) 果

2.1 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，各組仔豬生長(zhǎng)性能無顯著差異(P>0.05)。但與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組組仔豬ADG降低了7.19%(P>0.05)，F(xiàn)/G提高了5.59%(P>0.05)；與攻毒對(duì)照組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬ADFI和ADG分別提高了26.06%和31.73%(P>0.05)；與抗生素組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬ADFI和ADG分別提高了10.82%和10.97%(P>0.05)。

表3 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬血清和空腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組仔豬血清和空腸黏膜MDA含量顯著提高(P<0.05)，血清GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)，血清T-AOC有降低的趨勢(shì)(P=0.064)。與攻毒對(duì)照組相比，抗生素組和復(fù)合纖維+植物精油組仔豬血清T-AOC顯著提高(P<0.05)，空腸黏膜MDA含量顯著降低(P<0.05)，且復(fù)合纖維+植物精油組血清MDA含量也顯著降低(P<0.05)。與抗生素組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬血清和空腸黏膜抗氧化指標(biāo)均無顯著差異(P>0.05)，但血清MDA含量有降低趨勢(shì)(P=0.059)，空腸黏膜T-AOC有提高趨勢(shì)(P=0.075)。

表4 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬血清和空腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組仔豬血清IgA和IL-4含量顯著降低(P<0.05)，血清IL-1β和TNF-α含量顯著提高(P<0.05)，血清IL-6含量有提高的趨勢(shì)(P=0.051)。與攻毒對(duì)照組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬血清IgA和IL-4含量顯著提高(P<0.05)。與抗生素組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬血清IgA含量顯著提高(P<0.05)。

表5 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

2.4 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬腸道免疫指標(biāo)的影響

由圖1可知，與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組仔豬空腸黏膜IL-6 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著提高(P<0.05)。與攻毒對(duì)照組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬空腸黏膜IL-6 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，抗生素組空腸黏膜IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著提高(P<0.05)。與抗生素組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬空腸黏膜IL-1β和TNF-αmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)。

#表示對(duì)照組與攻毒對(duì)照組之間差異顯著(P<0.05)。試驗(yàn)組數(shù)據(jù)柱標(biāo)記不同字母表示差異顯著(P<0.05)。圖2同。

由圖2可知，與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組仔豬空腸黏膜NF-κBp65和IRAK1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著提高(P<0.05)，空腸黏膜TLR4 mRNA相對(duì)表達(dá)量有提高的趨勢(shì)(P=0.083)。與攻毒對(duì)照組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬空腸黏膜TLR4和NF-κBp65 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，而抗生素組空腸黏膜CD14和MyD88 mRNA相對(duì)表達(dá)量則顯著提高(P<0.05)。與抗生素組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬空腸黏膜CD14、MyD88、NF-κBp65和TRAF6 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)。

圖2 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬空腸黏膜TLR4、CD14及其下游信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)量的影響

3 討 論

3.1 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬生長(zhǎng)性能的影響

纖維和植物精油被認(rèn)為是潛在的抗生素替代品，在改善動(dòng)物生長(zhǎng)性能和預(yù)防腹瀉方面具有一定的積極作用[16-17]。Chen等[8]研究發(fā)現(xiàn)，1%復(fù)合纖維能夠提高仔豬ADG，降低F/G。Alali等[18]在肉雞飲水中添加復(fù)合精油可顯著提高肉雞平均體重，降低F/G，且0.05%復(fù)合精油能顯著減少肉雞飼糧中海德爾堡沙門氏菌(SalmonellaHeidelberg)的污染。本研究發(fā)現(xiàn)，與攻毒對(duì)照組相比，復(fù)合纖維+植物精油組仔豬ADFI和ADG分別提高了26.06%和31.73%，且其應(yīng)用效果優(yōu)于抗生素。這說明，在大腸桿菌感染的條件下，復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加能有效緩解仔豬生長(zhǎng)性能下降，這與前人研究結(jié)果一致。盡管纖維和植物精油聯(lián)合添加具有一定的促生長(zhǎng)作用，但其作用機(jī)制還不明確。而最近的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飼糧中添加復(fù)合植物提取物(主要成分是大蒜素和菊粉)，即纖維和植物精油聯(lián)合添加能夠增強(qiáng)蛋雞機(jī)體的免疫功能及抗氧化能力，并提高產(chǎn)蛋率，改善蛋品質(zhì)[19]。因此，我們推測(cè)本研究中聯(lián)合添加復(fù)合纖維和植物精油發(fā)揮促生長(zhǎng)作用可能與其對(duì)機(jī)體免疫和抗氧化能力的增強(qiáng)作用有關(guān)。

3.2 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬抗氧化能力的影響

正常情況下，機(jī)體在氧化代謝過程中產(chǎn)生的自由基能被抗氧化系統(tǒng)及時(shí)清除，維持體內(nèi)氧化與抗氧化的平衡。當(dāng)動(dòng)物機(jī)體遭受應(yīng)激(如仔豬斷奶、細(xì)菌或病毒感染)時(shí)，體內(nèi)產(chǎn)生大量自由基，導(dǎo)致氧化還原狀態(tài)失衡，造成機(jī)體氧化損傷[20]。MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，可反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細(xì)胞的損傷程度。在本研究中，與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組仔豬血清和空腸黏膜MDA含量顯著提高，血清T-AOC有降低的趨勢(shì)，說明大腸桿菌感染導(dǎo)致仔豬發(fā)生氧化應(yīng)激，降低了機(jī)體抗氧化能力。然而，大腸桿菌攻毒后仔豬血清GSH-Px活性顯著提高，這可能是由于在輕度和中度氧化應(yīng)激狀態(tài)下，機(jī)體出于自身保護(hù)，體內(nèi)的自由基會(huì)誘導(dǎo)激活抗氧化酶基因的編碼啟動(dòng)，從而增強(qiáng)宿主抗氧化系統(tǒng)的能力，但這并不足以保護(hù)機(jī)體免受損傷[21-22]。研究發(fā)現(xiàn)，菊粉能顯著提高肉仔雞血清T-SOD和GSH-Px活性，并降低血清MDA含量[23]。Wu等[24]研究表明，菊粉能夠緩解大鼠因攝食高脂無纖維飼糧導(dǎo)致的氧化應(yīng)激。大量研究發(fā)現(xiàn)，多種植物精油(如牛至精油、百里香精油和丁香精油等)都具有較強(qiáng)的抗氧化活性[25-28]。Wei等[29]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加牛至精油能夠顯著提高大鼠空腸黏膜超氧化物歧化酶和GSH-Px活性，顯著降低空腸黏膜活性氧(ROS)和MDA含量，有效緩解敵草快(diquat)引起的大鼠腸道氧化損傷。本研究中，復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加顯著緩解大腸桿菌攻毒仔豬血清和空腸黏膜MDA含量的升高，并顯著提高血清T-AOC，這反映了復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加能夠改善仔豬抗氧化能力，具有增強(qiáng)清除多余自由基的潛能。

3.3 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

當(dāng)仔豬遭受外源致病菌侵襲后，機(jī)體免疫系統(tǒng)被激活，釋放大量炎癥細(xì)胞因子(如IL-6、IL-1β和TNF-α)[30]，引起機(jī)體發(fā)生嚴(yán)重的炎癥發(fā)應(yīng)[31-33]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組仔豬血清IL-6、IL-1β和TNF-α等促炎細(xì)胞因子含量有升高趨勢(shì)或顯著升高，血清IgA和IL-4含量顯著降低，說明大腸桿菌感染引起了仔豬機(jī)體發(fā)生強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)。前人研究表明，纖維能夠降低人體血液中IL-1β基因的表達(dá)量，從而緩解脂多糖(LPS)誘發(fā)的炎癥反應(yīng)[34]。Ocaa-Fuentes等[35]發(fā)現(xiàn)，牛至油可顯著降低應(yīng)激狀態(tài)下人單核巨噬細(xì)胞THP-1合成TNF-α、IL-1β和IL-6，緩解動(dòng)脈粥樣硬化誘發(fā)的炎癥反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)，與攻毒對(duì)照組相比，復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加能顯著緩解大腸桿菌攻毒仔豬血清IgA和IL-4含量的降低，說明復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加在大腸桿菌攻毒條件下能增強(qiáng)仔豬機(jī)體的免疫功能，降低攻毒引起的炎癥反應(yīng)，這可能也是本試驗(yàn)中復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加緩解大腸桿菌攻毒仔豬生長(zhǎng)性能降低的原因之一。

3.4 復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬腸道免疫指標(biāo)的影響

腸道是機(jī)體與外界飲食抗原和各種微生物持續(xù)接觸最廣泛的部位，是機(jī)體防御的最前線、最大的免疫器官。當(dāng)仔豬遭受大腸桿菌侵襲后，腸道黏膜中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)和IL-10含量顯著降低，黏膜中IL-6、IL-1β和TNF-α含量顯著提高，導(dǎo)致腸道屏障發(fā)生炎癥損傷[13,36-37]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組仔豬空腸黏膜中IL-6 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著提高，而飼糧聯(lián)合添加復(fù)合纖維和植物精油能顯著緩解空腸黏膜中IL-6 mRNA相對(duì)表達(dá)量的升高，但抗生素組空腸黏膜中IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)量則顯著提高?？梢?，聯(lián)合添加復(fù)合纖維和植物精油能夠改善大腸桿菌攻毒導(dǎo)致的仔豬腸道炎癥損傷，而抗生素則會(huì)加劇這種炎癥損傷。

Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)是機(jī)體內(nèi)一類重要的模式識(shí)別受體，在腸道免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用。當(dāng)大腸桿菌入侵后，TLR與病原相關(guān)分子模式(如LPS)相結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，誘導(dǎo)促炎因子合成和釋放，引發(fā)炎癥反應(yīng)[38]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，攻毒對(duì)照組仔豬空腸黏膜NF-κBp65和IRAK1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著提高，且空腸黏膜TLR4 mRNA相對(duì)表達(dá)量有提高的趨勢(shì)，這與Pu等[13]的結(jié)果基本一致。而與攻毒對(duì)照組相比，復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加能夠顯著緩解仔豬空腸黏膜TLR4和NF-κBp65 mRNA相對(duì)表達(dá)量的提高，而抗生素則顯著提高CD14和MyD88 mRNA相對(duì)表達(dá)量，該結(jié)果與上述炎癥因子的釋放相一致。可見，大腸桿菌攻毒后，復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加可通過抑制TLR4/核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)信號(hào)通路激活來降低炎癥因子IL-6的釋放，從而緩解仔豬腸道的炎癥損傷；而抗生素則會(huì)激活該通路，使得炎癥因子IL-1β釋放增加，加劇腸道炎癥損傷。

4 結(jié) 論

飼糧聯(lián)合添加復(fù)合纖維和植物精油可顯著抑制大腸桿菌誘導(dǎo)的仔豬氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，改善仔豬生長(zhǎng)性能，且作用效果優(yōu)于抗生素。其中，復(fù)合纖維和植物精油聯(lián)合添加緩解大腸桿菌引起的仔豬腸道炎癥損傷的機(jī)制，與其抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路降低炎癥因子的釋放有關(guān)。