于艷雙

（中檢集團(tuán)(黑龍江)檢測(cè)有限公司,黑龍江 哈爾濱 150028）

對(duì)羥基苯甲酸酯又稱尼泊金酯，具有廣泛的抗菌作用，因其無臭無味，不影響產(chǎn)品風(fēng)味，毒性低；在體內(nèi)代謝迅速并且不產(chǎn)生積累，防腐效果優(yōu)良[1]；用量約為苯甲酸鈉的10%即可達(dá)到良好的防腐效果，協(xié)同性好[2]；通常與尼泊金乙酯等混合使用，效果超常，可以減少添加量，因其諸多優(yōu)點(diǎn)，常被應(yīng)用在食品及化妝品工業(yè)中，在食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014中，對(duì)于防腐劑對(duì)羥基苯甲酸酯類的添加量做了相應(yīng)規(guī)定[3]；該次優(yōu)化是參照GB 5009.31-2016食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類[4]在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過程中遇到的真實(shí)情況進(jìn)行優(yōu)化及對(duì)照[5]。所引用標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)于不同類型基質(zhì)，給出了兩種前處理方式，但在實(shí)際操作中，膠體類調(diào)料（如醬油）、飲料（如乳飲料）會(huì)出現(xiàn)膠體聚沉現(xiàn)象[6]，導(dǎo)致提取難以充分，使用分液漏斗靜置分層，也很難滿足日常工作效率，故在前處理部分，根據(jù)實(shí)際工作需要做出了調(diào)整及優(yōu)化。不但可以準(zhǔn)確地測(cè)定被測(cè)組分含量，而且操作簡單，污染物少，不受基質(zhì)影響，基體干擾小。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)原理

因?qū)αu基苯甲酸酯在pH值大于8.5的情況下，會(huì)被高分子化合物如甲基纖維素、明膠蛋白質(zhì)等束縛，難以提??；在pH值小于4時(shí)失去殺菌活性，故在稱取、轉(zhuǎn)移樣品后進(jìn)行酸化使其pH值小于4，失去殺菌活性，免除微生物活動(dòng)對(duì)于目標(biāo)物含量的測(cè)定造成影響[7]。對(duì)羥基苯甲酸酯在水中溶解度較低，故采用乙醚提取，濃縮，乙醇復(fù)溶，并利用氫火焰離子化檢測(cè)器氣相色譜法進(jìn)行分離測(cè)定、保留時(shí)間定性、外標(biāo)法定量[8]。

1.2 儀器與試劑

AgilentGC-7890N型氣相色譜儀（具FID檢測(cè)器）。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 對(duì)羥基苯甲酸甲酯（CAS：99-76-3上海安譜）；對(duì)羥基苯甲酸乙酯（CAS：120-47-8上海安譜）；對(duì)羥基苯甲酸丙酯（CAS：94-13-3上海安譜）；對(duì)羥基苯甲酸丁酯（CAS：94-26-8上海安譜）。乙醚和乙醇，均為色譜純，迪馬公司；NaCl、Na2SO4、HCl，均為分析純，科密歐公司。

1.3 樣品處理

稱取5g（精確至0.001g）試樣于50mL離心管中，加入10mL飽和NaCl溶液和1mL 1∶1 HCl溶液，搖勻，以20mL無水乙醚洗滌3次，每次渦旋提取1min，4000r·min-1離心3min。

在古氏漏斗底部固定少量脫脂棉，覆住出口，裝入高約2cm的無水Na2SO4，轉(zhuǎn)移乙醚層，通過裝好的無水Na2SO4柱過濾至雞心瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，準(zhǔn)確加入2.0mL無水乙醇溶解殘留物，待氣相色譜分析。

1.4 實(shí)驗(yàn)條件

色譜柱 安捷倫DB-5毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25μm）；分流比10∶1，進(jìn)樣口溫度：220℃；恒壓進(jìn)樣，流速：高純N22mL·min-1，H240mL·min-1，空氣450mL·min-1；檢測(cè)器溫度：260℃，柱溫箱升溫程序：100℃保持1min，以20℃·min-1升溫到170℃，再以12℃·min-1升溫到220℃保持1min，最后以10℃·min-1升溫到250℃保持6min。保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積定量。出峰順序見圖1。

圖1 出峰順序Fig.1 Peak sequence

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

臨用時(shí)用無水乙醇分別配制成4.0、10.0、20.0、50.0、100、200μg·mL-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，供色譜分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理?xiàng)l件的選擇

因原本實(shí)驗(yàn)涉及多次的靜置分層，耗時(shí)較多，并且涉及樣品是膠體時(shí)，如醬油，牛乳等，在提取過程會(huì)產(chǎn)生膠體聚沉現(xiàn)象，當(dāng)樣品是果醬等粘度高的樣品時(shí)，在分液漏斗中也不易提取完全，故在密閉的離心管中采用渦旋震蕩提取，提取較為充分，離心分層也可以達(dá)到更好的效果，所有有機(jī)溶劑的量也可減少過半，實(shí)現(xiàn)了提取均一徹底、分層完全的效果。

2.2 色譜條件的選擇

色譜條件部分與GB 5009.31-2016標(biāo)準(zhǔn)一致，不做討論。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性考察

將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液配制成系列標(biāo)準(zhǔn)使用液，進(jìn)行測(cè)定，記錄譜圖。以濃度c（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，各組分在其濃度范圍有良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2見表1。

由表1可以看出，R2在0.9993～0.9998范圍，表現(xiàn)良好。

2.4 精密度和檢出限考察

以3倍信噪比計(jì)算檢出限，該濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各物質(zhì)的峰面積，得到相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），精密度和檢出限見表2。

表1 標(biāo)準(zhǔn)系列濃度、峰面積及線性Tab.1 Linearity of calibration series from concentration and peak area

表2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢出限及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Tab.2 Detection limit and relative standard deviation of reference materials

由表2可見，檢出限均可達(dá)到國標(biāo)法檢出限0.6mg·kg-1的要求，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%，表現(xiàn)良好。

2.5 樣品和加標(biāo)回收率

取3種不同基質(zhì)（醬油、醋、果醬），并將一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液分別加到每種基質(zhì)中，與樣品共同處理，同時(shí)進(jìn)行測(cè)量，得到樣品中各物質(zhì)含量，加標(biāo)量，加標(biāo)回收率見表3。

表3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)回收率測(cè)定結(jié)果Tab.3 Measurement results of calibration recovery rate

由表3可見，改進(jìn)后的方法平均加標(biāo)回收率在95.4%～99.8%范圍，與國標(biāo)法相近。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜法測(cè)定食品中氨基甲酸酯，在該優(yōu)化條件下，線性相關(guān)系數(shù)R2在0.9993～0.9998范圍，檢出限在0.45～0.56mg·kg-1范圍，加標(biāo)回收率在95.4%～99.8%范圍，實(shí)現(xiàn)了GB 5009.31-2016中對(duì)氨基甲酸酯的測(cè)定，通過對(duì)前處理?xiàng)l件的優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了樣品前處理的簡化，不僅基質(zhì)效應(yīng)更加穩(wěn)定，還能達(dá)到更加徹底的分離效果，高效快速，可為食品中氨基甲酸酯的測(cè)定提供佐證與參考。