武春艷, 汪劍英, 曾海燕, 譚少文

（1. 南華大學(xué)附屬第三醫(yī)院心血管內(nèi)科，湖南 衡陽(yáng) 421900；2. 南華大學(xué)附屬第三醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖南 衡陽(yáng) 421900；3. 南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院心血管內(nèi)科，湖南 衡陽(yáng) 421001）

糖尿病心肌病 （diabetic cardiomyopathy，DCM）是一種因高糖環(huán)境所致心肌特異性病變的糖尿病并發(fā)癥，是導(dǎo)致糖尿病患者致殘或死亡的重要原因之一。DCM 病理生理變化以高血壓、高血脂、炎癥反應(yīng)和心肌結(jié)構(gòu)及功能異常為主要特征［1］。雖然血糖控制和改善胰島素抵抗是治療糖尿病的常用方法，但DCM 心肌損傷并未得到明顯改善。 研究［2-3］表明： Toll 樣受體4/核 因 子κB（Toll-like receptor 4/nuclear factor-κB，TLR4/NFκB）信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在DCM 發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。TLR4 可刺激NF-κB 通路促進(jìn)DCM 中調(diào)節(jié)先天免疫所必需的炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生，導(dǎo)致DCM 大鼠心肌組織纖維化、心肌炎癥和心肌細(xì)胞肥大，最后發(fā)展為心肌功能障礙［4-5］。YOUSSEF 等［6］發(fā)現(xiàn)抑制TLR4/ NF-κB 通路激活介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可改善心肌損傷，是治療DCM 心肌損傷的關(guān)鍵靶點(diǎn)?？咕腖L-37 是人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的唯一抗菌肽，在先天免疫系統(tǒng)機(jī)制中起重要作用，其除具有抗菌活性外，還具有趨化活性、修復(fù)損傷、抑制細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性等活性［7］。研究［8］表明：抗菌肽LL-37 在肥大細(xì)胞中可與Toll 樣受體（Toll-like receptors，TLR） 結(jié)合，抑制TLR 信號(hào)通路，減少促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，并促進(jìn)損傷組織愈合。然而，抗菌肽LL-37 是否可以改善DCM 大鼠心肌損傷至今尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，本研究采用鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）+高脂飼料喂養(yǎng)大鼠構(gòu)建DCM 模型，探討抗菌肽LL-37 對(duì)DCM 大鼠心肌功能和形態(tài)學(xué)改變的潛在影響及其相關(guān)機(jī)制，為DCM 大鼠心肌損傷尋找一種新的治療方法。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器SPF 級(jí)雄性SD大鼠48 只，鼠齡6 周，體質(zhì)量180～230 g，購(gòu)于湖南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2019-0009。所有大鼠均在（22±1）℃、12 h光-暗循環(huán)的環(huán)境下飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前大鼠均以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)1 周?？咕腖L-37（純度＞99%）購(gòu)自美國(guó)AbMole 生物公司；STZ 購(gòu)自上海前塵生物科技有限公司，分別配制A 液（2.10 g 檸檬酸溶于雙蒸水定容至100 mL） 與B 液（2.94 g 檸檬酸鈉溶于雙蒸水定容至100 mL），將A 液和B 液按1∶1.2 比例混合，調(diào)節(jié)pH 值至4.3，配制成檸檬酸緩沖液，最后將STZ 溶于檸檬酸緩沖液中，現(xiàn)用現(xiàn)配；兔抗TLR4、兔抗NF-κB p65、兔抗NF-κB 抑制因子（NF-κB inhibitor α，IκBα）、兔抗GAPDH、HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG（H+L）抗體和TUNEL 細(xì)胞凋亡試劑盒購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司；ELISA 試劑盒購(gòu)自武漢默沙克生物科技有限公司。手提式血糖儀購(gòu)自長(zhǎng)沙三諾藥業(yè)股份有限公司，AU2700 自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自美國(guó)貝克曼公司，Vevo770 型超聲心動(dòng)儀購(gòu)自加拿大Visual Sonics 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備和分組將48 只大鼠隨機(jī)各分為正常對(duì)照組、模型組、低劑量LL-37 組和高劑量LL-37 組，每組12 只。除正常對(duì)照組外，其他各組大鼠均通過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)+腹腔注射STZ構(gòu)建DCM 模型［9］，即采用高脂飼料（20%蔗糖、10%豬油、1.5%膽固醇、0.1%膽酸鈉、8%蛋黃粉和60.4%普通飼料）喂養(yǎng)4 周后，禁食12 h，然后一次性腹腔注射30 mg·kg－1STZ。注射72 h 后采血測(cè)量隨機(jī)空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）水 平，若2 次 隨 機(jī)FBG 水 平 均＞16.7 mmol·L－1，則表示2 型糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型構(gòu)建成功，剔除造模不成功大鼠，并予以補(bǔ)充。對(duì)照組大鼠采用普通飼料（75%玉米、20%麥麩、3%魚(yú)粉、1.5%淀粉和0.5%鹽）喂養(yǎng)4 周，禁食12 h 后腹腔注射等體積生理鹽水。造模成功后，低和高劑量LL-37 組大鼠分別腹腔注射0.5 和2.0 mg·kg－1抗菌肽LL-37，正常對(duì)照組和模型組大鼠腹腔注射等量生理鹽水，每天1 次，連續(xù)6 周。藥物干預(yù)的同時(shí)，除正常對(duì)照組大鼠外，其他各組大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料，造成心肌損傷。

1.3 各組大鼠體質(zhì)量和FBG 水平檢測(cè)采用尾靜脈穿刺采血，使用手持血糖儀分別于4 個(gè)時(shí)間點(diǎn)（干預(yù)前及干預(yù)后2、4 和6 周）檢測(cè)各組大鼠FBG水平，同時(shí)記錄各組大鼠體質(zhì)量。

1.4 各組大鼠血脂水平檢測(cè)藥物干預(yù)6 周后靜脈取血，采用AU2700 自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總膽固醇 （total cholesterol， TC） 和 甘 油 三 酯（triglyceride，TG）水平。

1.5 心臟超聲檢查各組大鼠心功能血脂檢測(cè)結(jié)束后，腹腔注射200 μL 3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，左胸脫毛后固定在操作臺(tái)上， 采用配備RMVTM716 探頭的Vevo770 型超聲心動(dòng)儀檢測(cè)大鼠心功能，記錄超聲心動(dòng)圖參數(shù)：左心室舒張階段末期內(nèi)徑（left ventricular end diastolic dimension，LVEDd）、 左 心 室 收 縮 階 段 末 期 內(nèi) 徑 （left ventricular end systolic dimension， LVEDs）、左心室 射 血 分 數(shù) （left ventricular ejection fraction，LVEF） 和左心室短軸縮短率（left ventricular fractional shortening，LVFS）。

1.6 HE 染色和TUNEL 染色觀察各組大鼠心肌組織病理形態(tài)表現(xiàn)和心肌細(xì)胞凋亡率斷頸處死大鼠后取適量心肌組織，固定包埋， 制成厚度約為3 μm 的切片，行常規(guī)HE 及TUNEL 染色，中性樹(shù)脂封片，置于光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織病理學(xué)和心肌細(xì)胞凋亡水平。經(jīng)蘇木精染色后，細(xì)胞核呈藍(lán)色，伊紅染色后胞漿呈現(xiàn)深淺不同的紅色。TUNEL 染色陽(yáng)性細(xì)胞（凋亡細(xì)胞）呈棕褐色，細(xì)胞凋亡率以隨機(jī)5 個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞百分率表示。細(xì)胞凋亡率=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.7 ELISA 法檢測(cè)各組大鼠心肌組織中炎癥因子水平取適量心肌組織加入生理鹽水，超聲破碎儀充分勻漿，4 ℃、4000 g 離心15 min，取上清液，參照ELISA 試劑盒操作說(shuō)明書(shū)測(cè)定450 nm 波長(zhǎng)處的吸光度（A）值，根據(jù)A 值和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算白細(xì)胞介素1β （interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6） 和 腫 瘤 壞 死 因 子α （tumor necrosis factor-α，TNF-α）等炎癥因子水平。

1.8 Western blotting 法檢測(cè)各組大鼠心肌組織中TLR4/NF-κB 相關(guān)蛋白的表達(dá)水平取適量心肌組織加入RIPA 裂解緩沖液，使用碾磨棒于冰上充分碾磨，4 ℃、12000 g 離心20 min，取上清液，使用BCA 法檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白含量。取30 μg 蛋白，加入5×loading buffer 沸水浴10 min，經(jīng)10%SDS-PAGE 電泳分離蛋白，通過(guò)濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上，用5% 脫脂奶粉室溫封閉2 h，TBST 洗滌3 次，分別加入TLR4 抗體（1∶500）、NF-κB p65 抗 體（1∶1000）、IκB α 抗 體（1∶1000） 和GAPDH 抗體（1∶1000），4 ℃孵育過(guò)夜。TBST 洗滌3 次，加入HRP 標(biāo)記山羊抗兔IgG二抗（1∶10000），室溫孵育1 h，TBST 洗 滌3 次，滴加ECL 顯色液，顯影拍照。采用Image Pro Plus 6.0 軟件分析各泳道條帶灰度值，計(jì)算目的蛋白相對(duì)表達(dá)水平。目的蛋白相對(duì)表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/GAPDH 條帶灰度值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組大鼠體質(zhì)量、FBG、血脂水平、LVEDd、LVEDs、LVEF、LVFS、心肌細(xì)胞凋亡水平、炎癥因子表達(dá)水平和TLR4/NF-κB 相關(guān)蛋白表達(dá)水平均符合正態(tài)分布，以-±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Tukey 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量干預(yù)前，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，低和高劑量LL-37 組大鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與干預(yù)前比較，干預(yù)后各時(shí)間點(diǎn)正常對(duì)照組大鼠體質(zhì)量逐漸升高（P＜0.05），而 模 型 組、 低 劑 量LL-37 組 和 高 劑 量LL-37 組大鼠體質(zhì)量逐漸降低（P＜0.05），且干預(yù)后各時(shí)間點(diǎn)低劑量LL-37 組與模型組大鼠體質(zhì)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量Tab. 1 Body weights of rats in various groups （n=12,-±s, m/g）

表1 各組大鼠體質(zhì)量Tab. 1 Body weights of rats in various groups （n=12,-±s, m/g）

*P＜0.05 vs control group；△P＜0.05 vs model group；#P＜0.05 vs low dose of LL-37 group；○P＜0.05 vs before intervention.

Group Control Model Low dose of LL-37 High dose of LL-37 Body weight Before intervention 349.32±6.35295.07±13.05*290.34±20.90296.84±3.96△#2 weeks after intervention 387.13±14.04○224.27±18.31*○227.03±10.52○274.18±12.24△#○4 weeks after intervention 401.61±12.13○209.38±17.33*○218.65±10.90○251.92±27.40△#○6 weeks after intervention 438.26±13.46○140.18±12.88*○147.05±20.60○248.16±20.41△#○

2.2 各組大鼠血清FBG 水平干預(yù)前，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠FBG 水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，低和高劑量LL-37 組大鼠FBG 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與干預(yù)前比較，干預(yù)后模型組與低劑量LL-37 組大鼠FBG 水 平 逐 漸 升 高（P＜0.05）， 且 低 劑 量LL-37 組和模型組大鼠FBG 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而高劑量LL-37 組大鼠FBG 水平逐漸降低（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠FBG 水平Tab.2 FBG levels of rats in various groups [n=12,-±s,cB/(mmol·L-1）]

表2 各組大鼠FBG 水平Tab.2 FBG levels of rats in various groups [n=12,-±s,cB/(mmol·L-1）]

*P＜0.05 vs control group；△P＜0.05 vs model group；#P＜0.05 vs low dose of LL-37 group；○P＜0.05 vs FBG level before intervention.

Group Control Model Low dose of LL-37 High dose of LL-37 FBG level Before intervention 5.12±0.6121.00±1.42*21.40±0.6622.34±1.47△#2 weeks after intervention 5.26±0.7524.73±1.89*○23.83±1.23○20.12±1.61△#○4 weeks after intervention 5.60±0.8026.10±1.85*○25.01±2.73○17.44±1.50△#○6 weeks after intervention 5.72±0.1028.86±2.55*○27.36±2.74○14.50±2.39△#○

2.3 各組大鼠血脂水平與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠TC 和TG 水平均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，高劑量LL-37 組大鼠TC 和TG 水平明顯降低（P＜0.05），而低劑量LL-37 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血脂水平Tab. 3 Serum lipid levels of rats in various groups[n=12,-±s,cB/(mmol·L-1）]

表3 各組大鼠血脂水平Tab. 3 Serum lipid levels of rats in various groups[n=12,-±s,cB/(mmol·L-1）]

*P＜0.05 vs control group；△P＜0.05 vs model group；#P＜0.05 vs low dose of LL-37 group.

Group Control Model Low dose of LL-37 High dose of LL-37 TC 1.38±0.182.71±0.20*2.67±0.342.02±0.19△#TG 0.84±0.207.95±0.44*7.66±0.854.31±0.64△#

2.4 各組大鼠心功能指標(biāo)與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠LVEDd 和LVEDs 均明顯升高（P＜0.05），LVEF 和LVFS 均明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，高劑量LL-37 組大鼠LVEDd 和LVEDs 均明顯降低（P＜0.05），LVEF 和LVFS均明顯升高（P＜0.05），而低劑量LL-37 組上述各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠心功能指標(biāo)Tab. 4 Cardiac function indexes of rats in various groups （n=12，-±s）

表4 各組大鼠心功能指標(biāo)Tab. 4 Cardiac function indexes of rats in various groups （n=12，-±s）

*P＜0.05 vs control group；△P＜0.05 vs model group；#P＜0.05 vs low dose of LL-37 group.

Group Control Model Low dose of LL-37 High dose of LL-37 LVEDd (l/mm)2.81±0.203.81±0.10*3.74±0.272.74±0.11△#LVEDs (l/mm)1.27±0.162.82±0.18*2.57±0.531.41±0.10△#LVEF (η/%)81.30±5.7152.40±4.16*53.87±3.8676.39±4.15△#LVFS (η/%)45.37±3.0932.90±2.30*34.41±1.3344.18±2.79△#

2.5 各組大鼠心肌組織病理形態(tài)表現(xiàn)正常對(duì)照組大鼠心肌組織有完整且清晰的組織結(jié)構(gòu)，心肌細(xì)胞呈平行排列，無(wú)明顯的病理變化；而模型組DCM 大鼠心肌纖維排列紊亂，間質(zhì)水腫；高劑量LL-37 組大鼠心肌組織病理變化明顯改善，而低劑量LL-37 組大鼠心肌組織無(wú)明顯改變。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠心肌組織病理形態(tài)表現(xiàn)（HE,×400）Fig.1 Pathomorphology of myocardium tissue of rats in various groups（HE,×400）

2.6 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率與正常對(duì)照組（3.40%±1.38%）比較，模型組大鼠心肌細(xì)胞出現(xiàn)核破裂，細(xì)胞凋亡率（41.51%±3.71%）明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，高劑量LL-37 組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率（22.38%±3.46%）明顯降低（P＜0.05），而低劑量LL-37 組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率（39.86%±3.57%）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)圖2。

圖2 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況（TUNEL,×200）Fig.2 Apoptosis of myocardial cells of rats in various groups（TUNEL,×200）

2.7 各組大鼠心肌組織中炎癥因子水平與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠心肌組織中炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，高劑量LL-37組大鼠心肌組織中炎癥因子IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平均明顯降低（P＜0.05），而低劑量LL-37 組上述指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠心肌組織中炎癥因子表達(dá)水平Tab.5 Expression levels of inflammatory factors in myocardium tissue of rats in various groups[n=12,-x±s,ρB/(mg·L-1）]

2.8 各組大鼠心肌組織中TLR4/NF-κB 相關(guān)蛋白表達(dá)水平與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠心肌組織中TLR4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05），IκBα 蛋 白 表 達(dá) 水 平 明 顯 降 低（P＜0.05）；與模型組比較，高劑量LL-37 組大鼠心肌組織中TLR4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），IκBα 蛋 白 表 達(dá) 水 平 明 顯 升 高（P＜0.05），而低劑量LL-37 組各蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)圖3。

圖3 各組大鼠心肌組織中TLR4、NF-κB p65 和IκBα 蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig. 3 Electrophoretogram (A) and histogram (B) of expressions of TLR4, NF-κB p65 and IκBα proteins in myocardium tissue of rats in various groups

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球糖尿病成年患者數(shù)將從2010年的2.85 億 人 增 加 到2030年 的4.39 億 人［10］。DCM是由高血糖引發(fā)一系列的不良刺激，導(dǎo)致心肌纖維化和膠原沉積，最終發(fā)展為心肌舒張功能障礙，同時(shí)伴有LVEDd 升高，LVEF 降低，高血壓和高血脂癥狀也很明顯［11-12］。此外，高血糖還可能加速心肌細(xì)胞中間質(zhì)蛋白（膠原）的糖基化，從而導(dǎo)致收縮功能障礙［13］。在早期階段，這些變化是可逆的，有嚴(yán)格的代謝控制，但隨著病理過(guò)程的進(jìn)展，這些變化為不可逆，最終可能發(fā)展為糖尿病患者心肌損傷。然而目前對(duì)DCM 心肌損傷的具體病理生理機(jī)制還缺乏明確的認(rèn)識(shí)，DCM 的治療措施不能完全改善心肌損傷，尋找一種更有針對(duì)性的治療策略來(lái)改善DCM 心肌損傷對(duì)治療DCM 具有重要意義。

抗菌肽LL-37 是hCAP-18C-末端成熟形式抗菌肽?？咕腖L-37 作為一種多功能的宿主防御分子，可誘導(dǎo)傷口愈合、參與血管生成和調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，對(duì)感染和組織損傷的正常免疫反應(yīng)至關(guān)重要［14-15］。研 究［16］表 明：抗 菌 肽LL-37 可 以 誘 導(dǎo) 巨噬細(xì)胞中趨化因子和趨化因子受體的表達(dá)（IL-6、IL-8 和TNF-α 等），從而通過(guò)間接促進(jìn)免疫細(xì)胞的遷移來(lái)促進(jìn)免疫應(yīng)答抵御感染。抗菌肽LL-37 還能夠介導(dǎo)促進(jìn)免疫反應(yīng)的細(xì)胞反應(yīng)，增強(qiáng)傷口愈合過(guò)程［17］。DCM 的各種病理生理過(guò)程最終導(dǎo)致心臟結(jié)構(gòu)和功能的紊亂，抗菌肽LL-37 是否可以改善DCM 心肌損傷值得探討。本研究采用STZ+高脂飼料喂養(yǎng)大鼠建立實(shí)驗(yàn)性DCM 動(dòng)物模型，結(jié)果顯示：模型組大鼠體質(zhì)量明顯降低，F(xiàn)BG 和血脂水平均明顯升高，表明模型組大鼠體內(nèi)糖代謝和脂代謝發(fā)生紊亂，這是DCM 的發(fā)病基礎(chǔ)。心功能檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：模型組大鼠LVEDd 和LVEDs 均明顯升高，LVEF 和LVFS 均明顯降低，模型組大鼠表現(xiàn)出心臟舒張功能和收縮功能障礙。HE 染色和TUNEL染色結(jié)果顯示：模型組大鼠心肌組織損傷和細(xì)胞凋亡嚴(yán)重，表明DCM 造模成功［18-19］?？咕腖L-37處理后DCM 大鼠血糖和血脂水平降低，細(xì)胞凋亡減少，心臟各功能指標(biāo)均明顯緩解，心肌損傷明顯改善，表明抗菌肽LL-37 對(duì)DCM 大鼠心肌損傷具有明顯保護(hù)作用。

NF-κB 是控制促炎細(xì)胞因子表達(dá)和細(xì)胞存活的主要轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)刺激IL-1β、IL-6 和TNF-α 等炎性細(xì)胞因子的形成參與炎癥過(guò)程的調(diào)節(jié)，從而加快心肌組織損傷，導(dǎo)致糖尿病患者心力衰竭［20-21］。TLR4 是一種跨膜蛋白，可與內(nèi)源性配體結(jié)合，通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化NF-κB，從而引發(fā)炎癥反應(yīng)［22］。陸曉丹等［23］研究發(fā)現(xiàn)：抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路的異?；罨閷?dǎo)的炎癥反應(yīng)可明顯改善DCM。因此，本研究對(duì)抗菌肽LL-37 保護(hù)DCM 大鼠心肌損傷的作用機(jī)制與TLR4/ NF-κB 信號(hào)通路是否有關(guān)進(jìn)行探討，結(jié)果顯示：DCM 大鼠心肌組織中TLR4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平，炎癥因子IL-1β、IL-6 和TNF-α 的表達(dá)水平均明顯升高，而IκBα表達(dá)水平明顯降低，表明模型組TLR4/NF-κB信號(hào)通路處于激活狀態(tài)，且有明顯的炎癥反應(yīng)?？咕腖L-37 治療后IκBα 蛋白表達(dá)水平明顯升高，而TLR4、NF-κB p65 和各炎癥因子的表達(dá)水平均明顯降低，TLR4/NF-κB 信號(hào)通路被明顯抑制。由此可見(jiàn)，抗菌肽LL-37 對(duì)DCM 大鼠心肌損傷的保護(hù)作用可能與抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路的激活有關(guān)，通過(guò)抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生減輕炎癥反應(yīng)，從而保護(hù)心肌損傷。但本研究的不足之處在于未使用TLR4/NF-κB信號(hào)通路抑制劑進(jìn)一步予以證實(shí)。

綜上所述，抗菌肽LL-37 治療可能通過(guò)抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路活化，抑制心肌細(xì)胞凋亡，減輕炎癥反應(yīng)、改善心肌結(jié)構(gòu)異常和心肌功能障礙，從而保護(hù)DCM 大鼠心肌損傷。因此，抗菌肽LL-37 可能是治療DCM 心肌損傷的新療法，其臨床治療作用有待進(jìn)一步研究。