劉 露 錢小軍 彭 梅

（宜春市人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，江西 宜春 336000）

放射性肺炎是由于肺部及縱隔腫瘤、食管癌等腫瘤經(jīng)放射治療后，在放射野內(nèi)正常肺組織受到損失引起的炎癥反應(yīng)。早期無(wú)癥狀，后期產(chǎn)生肺纖維化，導(dǎo)致呼吸功能損害，甚至呼吸衰竭[1]。在放射治療后2～3 個(gè)月，或停止放療后半年出現(xiàn)刺激性干咳、活動(dòng)后加劇，伴有氣急、心悸，偶有高熱[2]。西醫(yī)通過嚴(yán)格掌握放射劑量、照射野的大小和速度來預(yù)防放射性肺炎，治療上主要使用腎上腺皮質(zhì)激素、細(xì)胞毒性藥物等[3]。中醫(yī)治療方法有養(yǎng)陰清肺法、活血化瘀法等[4]。

艾葉含揮發(fā)油類、黃酮類等，包括止咳、平喘、抗菌、抗病毒等作用[5]。本課題通過比較艾葉揮發(fā)油α-萜品烯醇、β-丁香烯醇、潑尼松3 種藥物對(duì)放射性肺炎大鼠的治療效果，為研發(fā)放射性肺炎的治療藥物提供一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Sprague Dawley（SD）大鼠，SPF 級(jí)，雄性60 只，體質(zhì)量（180± 200）g，由北京明瀞實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SYXK20200019，于SPF 級(jí)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 實(shí)驗(yàn)藥品：艾葉揮發(fā)油α－ 萜品烯醇及β－ 丁香烯醇由中醫(yī)藥研究院提供，潑尼松片（浙江仙琚制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H33021207），生理鹽水（信合援生物藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20023810）。

1.3 試劑 TGF-β、PDGF、IL-1 所需試劑盒均購(gòu)買于上海江藍(lán)純公司，批號(hào)分別980790、980795、980791，SOD 試劑盒購(gòu)買于上海博士德生科有限公司，批號(hào)為201501092。HE 染色試劑盒購(gòu)買于南京建成生物研究所，批號(hào)為SD89762。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 APO-9 型放射治療機(jī)（成都中國(guó)核動(dòng)力研究設(shè)計(jì)院放射儀器有限公司），CX31 型電子顯微鏡（美國(guó)奧林匹斯公司），DP-3 型石蠟切片機(jī)（日本島津公司），BIOBASE 組織包埋機(jī)（濟(jì)南天橋有限責(zé)任公司）。

1.5 分組、造模與給藥 分組：采用隨機(jī)數(shù)字表法將60只大鼠平均分為4 組，15 只組T（艾葉揮發(fā)油α-萜品烯醇），15 只組D（艾葉揮發(fā)油β-丁香烯醇），15 只組C（潑尼松），15 只組K；每組大鼠在相同條件下飼養(yǎng)。

造模方式：根據(jù)文獻(xiàn)[6]推薦的放射性肺炎造模方法與劑量，用10% 水合氯醛麻醉大鼠，使用模具固定，用鉛磚遮擋小鼠胸部以外區(qū)域后，采用15 Gy 大劑量單次照射，劑量率1 Gy／ min，每天照射1 次，連續(xù)照射30 d。

給藥劑量：根據(jù)參考文獻(xiàn)[7]推薦大鼠的劑量＝Xmg/kg×70 kg× 0.018/200 g＝X mg/kg× 70 kg× 0.018/0.2 kg＝6.3X mg/kg。按單位體質(zhì)量的劑量來算，大鼠的等效劑量相當(dāng)于人的6.3 倍。成人的標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量設(shè)為70 kg。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)及藥典[8]中艾葉揮發(fā)油提取物的推薦成人劑量（1 g/d）。換算本研究中每只大鼠300 g 每天用量：組T（用量104 mg/kg，組D 用量104 mg/kg，組C 用量6.3 mg/kg，組K 予等量的生理鹽水。

1.6 樣本采集與處理

1.6.1 行肺泡灌洗檢測(cè)淋巴細(xì)胞數(shù) 對(duì)大鼠行全肺支氣管肺泡灌洗術(shù)，以檢測(cè)淋巴細(xì)胞數(shù)。

1.6.2 檢測(cè)TGF-β、PDGF、IL-1 心臟取血清用于ELISA 檢測(cè)。分離肺葉，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)TGF-β、PDGF、IL-1。

1.6.3 檢測(cè)SOD 取大鼠右側(cè)肺一半，采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)SOD。

1.6.4 行HE 染色 取右側(cè)肺另一半，采用常規(guī)HE（蘇木精-伊紅）染色，光鏡觀察各組大鼠肺部病理組織結(jié)構(gòu)。采用Szapiel[9]半定量方法對(duì)HE 染色進(jìn)行評(píng)定肺泡炎情況。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用（）表示，各組數(shù)據(jù)先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析，若符合方差齊性和正態(tài)分布，則進(jìn)行單因素方差分析，多重比較進(jìn)行LSD 法；若方差不齊，則進(jìn)行多重秩和檢驗(yàn)。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺泡灌洗檢測(cè)淋巴細(xì)胞數(shù) 治療后，組T、組D、組C 肺泡灌洗液中淋巴細(xì)胞數(shù)明顯低于組K；組T 數(shù)值最低，各組之間相比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠肺泡灌洗檢測(cè)淋巴細(xì)胞數(shù)(，×109/L)

表1 各組大鼠肺泡灌洗檢測(cè)淋巴細(xì)胞數(shù)(，×109/L)

注：方差分析F=188.742，P=0.001＜0.01。a 為組T 與組D 比較，b 為組T 與組C 比較，C 為組T 與組K 比較，d 為組D 與組C，e 為組D 與組K 比較，f 為組C 與組K 比較。

2.2 TGF-β、PDFG、IL-1 含量檢測(cè)結(jié)果 治療后，組T、組D、組C 中SOD 含量明顯高于組K；組T 數(shù)值最高，各組之間相比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。治療后，組T、組D、組C 中TGF-β 含 量、PDFG 含量、IL-1 含量明顯低于組K；組T 數(shù)值最低，各組之間相比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠TGF-β、PDFG、IL-1 含量檢測(cè)結(jié)果()

表2 各組大鼠TGF-β、PDFG、IL-1 含量檢測(cè)結(jié)果()

注：SOD 方差分析F=347.706，P=0.001＜0.01；TGF-β 方差分析F=246.230，P=0.002＜0.01；PDFG 方差分析F=311.523，P=0.002＜0.01；IL-1 方差分析F=240.330，P=0.003＜0.01。a 為組T 與組D 比較，b 為組T 與組C 比較，C 為組T 與組K 比較，d 為組D 與組C，e 為組D 與組K 比較，f 為組C 與空白組K 比較。

2.3 肺部肺泡炎評(píng)分結(jié)果 治療后，組T 大鼠僅出現(xiàn)輕度肺泡炎，組D 為中度肺泡炎，組C 為重度肺泡炎，組K 為極重度肺泡炎。組T、組D、組C 中肺部肺泡炎評(píng)分明顯低于組K；組T 評(píng)分最低，各組之間相比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見表3。

表3 各組肺部肺泡炎評(píng)分結(jié)果 (，分)

表3 各組肺部肺泡炎評(píng)分結(jié)果 (，分)

注：肺泡炎方差分析F=237.612，P=0.002＜0.01；a 為治組T 與組D 比較，b 為組T 與組C 比較，C 為組T 與組K 比較，d 為組D 與組C，e 為組D與組K 比較，f 為組C 與組K 比較。

3 討論

放射性肺炎發(fā)生的機(jī)制包括：遺傳異質(zhì)性、氧化應(yīng)激、細(xì)胞損傷等原因[10]。肺泡毛細(xì)血管屏障由血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞構(gòu)成，一旦發(fā)生放射性肺炎，肺泡腔內(nèi)見大量血液滲出物和炎癥細(xì)胞。會(huì)分泌大量的細(xì)胞因子，包括TGF-β、白介素-13、前列腺素E2、淋巴細(xì)胞等。TGF-β 是纖維化最密切的細(xì)胞因子，也是至今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的細(xì)胞外基質(zhì)沉積促進(jìn)劑[11]。CD4+T 細(xì)胞根據(jù)分泌的不同細(xì)胞因子，可分為Th1、Th2 細(xì)胞。Th2 主要通過分泌IL-1、IL-5、IL-10 以及單核細(xì)胞趨化蛋白1 等細(xì)胞因子，進(jìn)一步介導(dǎo)體液免疫。研究發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2 細(xì)胞因子的平衡向Th2 偏移是放射性肺炎發(fā)病機(jī)制之一[12]。Th2 的標(biāo)志性細(xì)胞因子是IL-1，能夠促進(jìn)Th1 向Th2 偏移，并產(chǎn)生抑制Th1 細(xì)胞因子[13]。

當(dāng)肺組織受到電離輻射作用后，會(huì)產(chǎn)生活性氧類物質(zhì)。DNA、蛋白質(zhì)及脂膜遭到活性氧的破壞，若機(jī)體的抗氧化體系，包括過氧化氫酶、SOD、谷胱甘肽過氧化物酶等不足以抵消這種破壞時(shí)，便會(huì)出現(xiàn)氧化應(yīng)激損傷[14]。

巨噬細(xì)胞分為M1、M2 型巨噬細(xì)胞。多種促炎因子及一氧化氮合酶，主要由M1 巨噬細(xì)胞分泌。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、PDGF 等由M2 型巨噬細(xì)胞高表達(dá)，后誘導(dǎo)產(chǎn)生精氨酸酶，具有抗炎、促進(jìn)損傷修復(fù)的作用。大量數(shù)據(jù)表明，疾病發(fā)生炎癥階段，M1 巨噬細(xì)胞的增加有助于清除病原微生物，抑制炎癥反應(yīng)并促進(jìn)肺組織纖維化[15]。

艾葉主要有效成分為艾葉揮發(fā)油，具有抗菌、平喘、鎮(zhèn)咳、增強(qiáng)免疫功能等作用[16-20]。努爾比耶·奧布力喀斯木等[21]檢測(cè)出艾葉揮發(fā)油所含成分30 種，有石竹烯（13.2%）、α-萜品烯醇（5.28%）、β-丁香烯醇（4.86%）等。

本課題通過比較組T（艾葉揮發(fā)油α-萜品烯醇），組D（艾葉揮發(fā)油β-丁香烯醇），潑尼松（組C）3 種藥物對(duì)治療放射性肺炎大鼠的治療效果，組T 中淋巴細(xì)胞數(shù)、炎性因子（TGF-β、PDGF、IL-1）含量明顯低于組D、組C、組K（P ＜0.05）。組T 氧化應(yīng)激指標(biāo)（SOD）較組D、組C、組K 明顯上升（P ＜0.05）。HE 染色，組T 大鼠僅出現(xiàn)輕度肺泡炎，組D 為中度肺泡炎，組C 主要為重度肺泡炎，組K 為極重度肺泡炎。組T 肺泡炎評(píng)分低于組D、組C、組K（P ＜0.5）。

本實(shí)驗(yàn)不足之處，首先，本研究為初步探索性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，僅藥物對(duì)放射性肺炎大鼠藥效研究，而未對(duì)多藥物劑量研究，后續(xù)進(jìn)一步研究藥效與劑量關(guān)系；其次，艾葉揮發(fā)油提取物治療放射性肺炎大鼠作用機(jī)制需要進(jìn)一步深入研究和探討。