陳文承，陳 芬，扶亞祥，唐春華，謝雯琴

（1.郴州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南郴州 423000；2.湘南學(xué)院，湖南郴州 423000；3.長(zhǎng)沙市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法局，湖南長(zhǎng)沙 410013；4.長(zhǎng)沙市望城區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，湖南長(zhǎng)沙 410200；5.永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南永州 425100）

弓形蟲（Toxoplasma gondii）是一種世界范圍內(nèi)廣泛分布的機(jī)會(huì)性病原蟲，可寄生于除紅細(xì)胞外的所有有核細(xì)胞，可自然感染人類以及犬、貓、豬、牛、羊、雞等溫血?jiǎng)游?，其終末宿主是貓等貓科動(dòng)物[1-2]。由弓形蟲感染引起的弓形蟲病是一種人獸共患病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為須報(bào)告動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病[3]。弓形蟲病在免疫力正常的人群中不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀[4-7]，但對(duì)免疫力低下人群損害極大，嚴(yán)重者甚至死亡[8]。家畜感染弓形蟲后，可出現(xiàn)流產(chǎn)等繁殖障礙癥狀，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失[9-10]，且能通過其肉、奶制品等直接或間接地傳染給人而威脅人類健康[11]。

我國(guó)是全球牛肉的主要消費(fèi)市場(chǎng)，2019 年牛肉消費(fèi)量為840 萬t。人類感染弓形蟲主要通過攝入生的或未煮熟的食物，包括肉類[11]。初步調(diào)查[12]表明，湖南省黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率高達(dá)24.5%。湖南省黃牛養(yǎng)殖逐漸興盛，而郴州市擁有湖南省主要的黃牛養(yǎng)殖基地，但是關(guān)于郴州市黃牛弓形蟲感染情況未見報(bào)道。因此，監(jiān)測(cè)該地區(qū)黃牛弓形蟲流行情況并分析影響其感染的風(fēng)險(xiǎn)因素具有重要公共衛(wèi)生意義。

1 材料和方法

1.1 采樣策略和樣本來源

根據(jù)《湖南省動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》，結(jié)合隨機(jī)取樣原則，分別從郴州市的東部（汝城縣）、西部（嘉禾縣）、南部（宜章縣）、北部（安仁縣）和中部（蘇仙區(qū)和資興市）地區(qū)的牛場(chǎng)采樣。經(jīng)調(diào)查全國(guó)肉牛飼養(yǎng)規(guī)模記錄數(shù)據(jù)，這6 個(gè)地區(qū)共有規(guī)?；?chǎng)（150 頭≤存欄數(shù)＜2 000 頭）4 個(gè)（蘇仙區(qū)1 個(gè)、汝城縣1 個(gè)、資興市1 個(gè)、安仁縣1 個(gè)），散養(yǎng)牛場(chǎng)（30 頭≤存欄數(shù)＜149 頭）93 個(gè)（蘇仙區(qū)27 個(gè)、宜章縣6 個(gè)、嘉禾縣7 個(gè)、安仁縣4 個(gè)、資興市49 個(gè)）。本次研究樣品來自9 個(gè)牛場(chǎng)，其中規(guī)模場(chǎng)4 個(gè)、散養(yǎng)場(chǎng)5 個(gè)（每個(gè)地區(qū)各取1 個(gè)）。對(duì)存欄量大于150 頭的規(guī)模場(chǎng)，按照5%的比例采樣，對(duì)散養(yǎng)場(chǎng)則全群采樣。2018 年秋季、冬季以及2019 年春季、夏季，共通過頸靜脈采集黃牛血液樣本710 份。

1.2 樣本處理

將血液樣本置于普通一次性塑料管中，經(jīng)4 000×g離心10 min 后得到血清，將血清轉(zhuǎn)入新的離心管中并保存在-20 ℃直至使用。

1.3 主要試劑

弓形蟲 IHA 抗原、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清（效價(jià)≥1:1 024）和稀釋液，均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.4 方法

1.4.1 間接血凝試驗(yàn)（IHA） 按照文獻(xiàn)[13-14]和《弓形蟲病診斷技術(shù)》（NY/T 573—2002）進(jìn)行檢測(cè)。先在反應(yīng)板每孔滴加0.075 mL 血清，然后在第一孔滴加0.025 mL 樣品，隨后以4 倍遞呈稀釋3 孔，最后一孔棄去0.025 mL，蓋上玻璃板，使用微型振蕩器振蕩2 min。完成上述步驟后，放入37 ℃恒溫箱中2 h 后觀察結(jié)果。每板設(shè)陰、陽(yáng)性及空白對(duì)照各2 孔。被檢血清1:16 稀釋孔內(nèi)，呈現(xiàn)“澄清”以上凝集者判為陽(yáng)性，若有可疑孔，則需復(fù)檢[15]。

1.4.2 數(shù)據(jù)分析 用Excel 2016 軟件整理收集到的數(shù)據(jù)，并計(jì)算黃牛弓形蟲血清抗體陽(yáng)性率及其95%置信區(qū)間（95%CI）。采用SPSS V23.0（IBM，Chicago，IL）軟件，對(duì)不同變量（牧群規(guī)模、衛(wèi)生狀況、地區(qū)、季節(jié)、黃牛性別、黃牛年齡以及養(yǎng)殖場(chǎng)是否有貓）的弓形蟲感染情況進(jìn)行多元邏輯回歸分析，當(dāng)P＜0.05 時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本調(diào)查還分析了基于似然比統(tǒng)計(jì)的優(yōu)勢(shì)比（OR）及其95%CI。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

在采集的710 份黃牛血清樣品中，檢測(cè)出弓形蟲抗體陽(yáng)性64 份，平均抗體陽(yáng)性率為9.0%（表1）。所有被檢牛場(chǎng)均存在感染，場(chǎng)群抗體陽(yáng)性率為100%。

表1 湖南省郴州市各地區(qū)黃牛血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.2 三間分布及風(fēng)險(xiǎn)因素

2018 年秋至2019 年夏，郴州市各縣區(qū)黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率及相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素分析結(jié)果見表2。

表2 湖南省郴州市黃牛弓形蟲血清流行率相關(guān)變量分析結(jié)果

2.2.1 地區(qū)分布 不同地區(qū)黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率分析結(jié)果顯示：南部和北部牛場(chǎng)黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率較高，分別為12.9%和12.7%，東部和中部較低，陽(yáng)性率分別為9.4%和7.4%，而西部最低，僅為1.7%。

2.2.2 季節(jié)分布 在不同的季節(jié)分組中，春季（12.9%）和夏季（13.7%）黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率較高，而秋季和冬季的陽(yáng)性率明顯低于這兩個(gè)季節(jié)，分別為5.1%和4.1%（P＜0.05）。

2.2.3 群間分布 規(guī)模牛場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率與散養(yǎng)牛場(chǎng)沒有明顯差異（P＞0.05），分別為8.9%和9.1%；衛(wèi)生狀況差的牛場(chǎng)抗體陽(yáng)性率（12.9%）明顯高于衛(wèi)生狀況好的牛場(chǎng)（7.4%，P＜0.05）；母黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率為9.1%，略高于公黃牛（8.6%），但差異不顯著（P＞0.05）；不同年齡段的黃牛均可感染，其中3 歲以上黃牛的弓形蟲抗體陽(yáng)性率最高，為14.8%，而1 歲以下、1～2 歲和2～3歲年齡段的黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率分別為7.8%、8.1%、9.7%，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；有貓存在的牛場(chǎng)弓形蟲抗體陽(yáng)性率為12.8%，而沒有貓存在的為2.9%，差異顯著（P＜0.05）。

2.2.4 風(fēng)險(xiǎn)因素 基于上述三間分布結(jié)果，認(rèn)為黃牛養(yǎng)殖的地理區(qū)域、季節(jié)以及養(yǎng)殖場(chǎng)中貓的存在和衛(wèi)生狀況是影響郴州市黃牛弓形蟲感染的4 個(gè)主要風(fēng)險(xiǎn)因素。郴州市北部牛場(chǎng)感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)約是西部的8.4 倍，南部約是西部的8.6 倍，中部約是西部的4.6 倍；有貓存在的牛場(chǎng)感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)是沒有貓的4.8 倍；黃牛在夏季感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)約是在冬季的3.7 倍，衛(wèi)生狀況差的牛場(chǎng)黃牛感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)約是衛(wèi)生狀況好的1.9 倍（表2）。

3 討論

3.1 總體情況

本調(diào)查結(jié)果顯示，郴州市黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率為9.0%，與近十年來國(guó)內(nèi)牛弓形蟲血清總陽(yáng)性率（10.1%）[16]相近，但相比于21 世紀(jì)初湖南省黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率（24.5%）[12]有明顯降低，這可能與2012—2020年采取的疫病控制措施有關(guān)。本研究結(jié)果比 2018 年重慶市部分地區(qū)牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率（27.25%）[17]、2017 年云南省臨滄市牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率（14%）[18]都要低，但比2019 年延邊市黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率（5.0%）[19]，2018 年河南省牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率（1.93%）[20]，2019 年青海省互助加定鎮(zhèn)牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率（0）[21]和內(nèi)蒙古自治區(qū)部分地區(qū)牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率（0）[22]要高。這些差異可能與地理區(qū)域、氣候環(huán)境和飼養(yǎng)管理有關(guān)。

3.2 影響因素

3.2.1 地理區(qū)域 根據(jù)本調(diào)查的分析結(jié)果可知，地理區(qū)域是黃牛感染弓形蟲的最主要風(fēng)險(xiǎn)因素，其原因可能與不同區(qū)域的水流域有關(guān)[23]。之前的研究[24]表明，弓形蟲卵囊可以通過淡水徑流進(jìn)入海洋，從而對(duì)居住在河流、湖泊附近的人類和其他動(dòng)物構(gòu)成威脅，而資興市為此次調(diào)查中黃牛弓形蟲血清陽(yáng)性率最高的地區(qū)，其境內(nèi)有東江湖等湖泊流域，增加了黃牛在飲水時(shí)感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)。

3.2.2 養(yǎng)殖場(chǎng)有無貓 本次調(diào)查結(jié)果表明，貓的存在是影響黃牛感染弓形蟲的重要風(fēng)險(xiǎn)因素之一。調(diào)查發(fā)現(xiàn)有貓存在的養(yǎng)殖場(chǎng)弓形蟲陽(yáng)性率大大高于沒有貓的養(yǎng)殖場(chǎng)，這與之前的研究[25-27]結(jié)果一致。貓科動(dòng)物作為弓形蟲的終末宿主，是唯一可以用卵囊污染環(huán)境的動(dòng)物[28]。這些卵囊對(duì)環(huán)境因素具有高度的抗性，可以在潮濕的環(huán)境中產(chǎn)生孢子并存活數(shù)月[29]。養(yǎng)殖場(chǎng)的貓和黃牛經(jīng)常近距離接觸，甚至同飲水，持續(xù)接觸貓糞便中排泄的卵囊會(huì)增加感染的風(fēng)險(xiǎn)[30]。有貓的養(yǎng)殖場(chǎng)弓形蟲血清陽(yáng)性率較高，這提示應(yīng)重視貓科動(dòng)物污染環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)。

3.2.3 季節(jié)因素 本調(diào)查結(jié)果顯示，季節(jié)因素也是黃牛感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。其中黃牛在春夏兩季弓形蟲抗體陽(yáng)性率最高，明顯高于秋冬兩季，這可能與春夏的溫度和濕度高有關(guān)。弓形蟲的感染在溫暖潮濕地區(qū)比寒冷干燥地區(qū)更普遍[5]。作為牛飼料的新鮮牧草可能是弓形蟲卵囊的溫床，而潮濕的環(huán)境有利于卵囊的存活。本調(diào)查的結(jié)果與以往的報(bào)道一致[25，31-33]。但也有研究表明，季節(jié)并不是弓形蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素[34-35]。

3.2.4 衛(wèi)生因素 本次調(diào)查結(jié)果顯示，衛(wèi)生因素也能影響黃牛感染弓形蟲，衛(wèi)生狀況好的牛場(chǎng)弓形蟲陽(yáng)性率明顯低于衛(wèi)生狀況差的牛場(chǎng)。不規(guī)范管理的養(yǎng)殖場(chǎng)導(dǎo)致黃牛飲用水質(zhì)差、飼料不新鮮等一系列問題，都有可能增加黃牛感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)。

3.2.5 畜群規(guī)模 調(diào)查結(jié)果顯示，規(guī)模牛場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率與散養(yǎng)牛場(chǎng)沒有明顯差異，分別為8.9%和9.1%，經(jīng)分析后可知，群規(guī)模并不是影響郴州市黃牛感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)因素，造成該結(jié)果的原因尚不清楚，但是樣本量的差異可能對(duì)結(jié)果造成一定的影響。要弄清此原因，還需要進(jìn)行更加深入的研究。

3.2.6 性別和年齡 母牛血清陽(yáng)性率（9.1%）略高于公牛（8.9%），這與之前的報(bào)道一致[16]。不同年齡階段的黃牛弓形蟲抗體陽(yáng)性率也沒有顯著差異，說明性別和年齡不是影響黃牛弓形蟲陽(yáng)性率的風(fēng)險(xiǎn)因素。其原因可能是，任何年齡段的黃牛都有機(jī)會(huì)接觸到被弓形蟲卵囊污染的食物而受感染，再加上黃牛是放牧動(dòng)物，其生活的范圍廣闊，更增加了被感染的概率。

3.3 采樣及檢測(cè)方法的局限性

本次調(diào)查在采樣過程中遵循隨機(jī)采樣原則，但由于特殊原因，個(gè)別區(qū)縣的養(yǎng)殖場(chǎng)不同意采樣，故采樣范圍未覆蓋到整個(gè)郴州市區(qū)縣不同規(guī)模的養(yǎng)殖場(chǎng)。其次，本試驗(yàn)也存在分組中樣本數(shù)量不均衡等問題，這些都有可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成一定影響。

IHA 法是一種高特異性、成本低且容易操作的弓形蟲檢測(cè)方法，主要檢測(cè)弓形蟲的IgG 和IgM抗體。IHA 比弓形蟲改良凝集試驗(yàn)（MAT）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）有更高的特異性[36]，且因?yàn)镋LISA 試劑盒價(jià)格昂貴，MAT 法抗原診斷液制備較為復(fù)雜，所以IHA 法被廣泛應(yīng)用于多種動(dòng)物的弓形蟲流行病學(xué)研究[37-38]。但不可否認(rèn)，IHA的敏感性低于MAT 和ELISA，所以本研究結(jié)果可能存在一些誤差。

4 結(jié)論

本調(diào)查表明：湖南郴州市黃牛弓形蟲感染較為普遍，所有被調(diào)查的牛場(chǎng)均存在一定程度的感染；牛場(chǎng)的地理位置、貓的存在、季節(jié)和牛場(chǎng)衛(wèi)生狀況是郴州市黃牛感染弓形蟲的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。因此，郴州市需要根據(jù)主要風(fēng)險(xiǎn)因素制定相應(yīng)的防控措施，做好牛弓形蟲病防控，降低對(duì)人類的潛在危害。