宋桂成 周淼平 余桂紅 姚金保 馬鴻翔

(1 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所，江蘇 南京 210014；2 揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009)

低氧脅迫是濕害造成植物代謝途徑改變和生長減緩的主要原因，乙烯響應(yīng)因子(ethylene-responsive factor，ERF)是植物應(yīng)答非生物脅迫信號傳導(dǎo)和調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)的一類重要轉(zhuǎn)錄因子[1]。ERF是APETALA2/ethylene-responsive factor(AP2/ERF)的一個亞家族成員，含有至少一個保守的AP2/ERF結(jié)構(gòu)域，大約由60個氨基酸組成[2]。ERF蛋白可以直接結(jié)合GCCbox或DRE/CRT順式作用元件，調(diào)控靶基因的表達(dá)[3]。AP2/ERF的亞族成員含有各自保守的氨基酸序列結(jié)構(gòu)和功能特征，參與植物濕害或低氧脅迫等非生物脅迫的表達(dá)調(diào)控[4]。研究發(fā)現(xiàn)，ERF通過參與植物激素合成、代謝物合成、活性氧(reactive oxygen species，ROS)清除等多種途徑調(diào)節(jié)濕害或低氧脅迫等非生物脅迫應(yīng)答[5]。淹水條件下，SNORKEL1和SNORKEL2可以誘導(dǎo)合成大量的赤霉素(gibberellin，GA)，GA可以促進(jìn)水稻莖部伸長生長，使受淹葉片伸出水面，進(jìn)行有氧呼吸，提高深水稻在完全淹沒條件下的耐淹性[6]。Yamauchi等[7]研究發(fā)現(xiàn)，低氧脅迫下乙稀合成前體1氨基環(huán)丙烷羧酸(1-cyclopropane carboxylic acid，ACC)處理小麥幼根，能增加煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)氧化酶相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)ROS合成，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞程序性死亡(programmed cell death，PCD)相關(guān)信號通路，形成通氣組織。ERF蛋白通過結(jié)合乙烯啟動子區(qū)域GCCbox或DRE調(diào)控原件，促進(jìn)乙烯合成，進(jìn)而影響相關(guān)基因表達(dá)，形成通氣組織，提高植株對濕害或低氧的抗性。Christianson等[8]通過對淹水處理的棉花進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)，淹水24 h后，受脅迫影響差異表達(dá)的1 305個基因中，ERFs主要參與激素合成、淀粉和氮代謝等途徑，是調(diào)控植株濕害應(yīng)答的重要響應(yīng)因子。大豆ERFVII1、ERFVII4、ERFVII5和ERFVII8基因受濕害、低氧脅迫和外源乙烯的誘導(dǎo)表達(dá)，是大豆耐濕的重要響應(yīng)因子[9]。前人研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥ERF-Ⅶ家族的ERF主要參與低氧脅迫的應(yīng)答，如RELATEDTOAPETALA2.2(RAP2.2)、RAP2.12通過啟動子區(qū)域GCCbox或DRE順式元件調(diào)控缺氧反應(yīng)基因的表達(dá)，使植株適應(yīng)缺氧環(huán)境[10-12]。

濕害造成低氧脅迫是導(dǎo)致小麥(TriticumaestivumL.)減產(chǎn)的主要因素之一[13]。研究小麥耐濕分子機(jī)制，挖掘調(diào)控耐濕的關(guān)鍵基因?qū)μ岣咝←溎蜐裥院彤a(chǎn)量尤為重要[14]。在模式植物擬南芥和模式作物水稻中，ERF基因調(diào)控植株個體適應(yīng)低氧脅迫環(huán)境的機(jī)制已較為完善[11-12]，但在小麥中該基因仍有待深入研究。因此，挖掘和探索小麥耐低氧脅迫相關(guān)的ERF基因?qū)μ岣咝←湹哪蜐裥院彤a(chǎn)量有重要意義。

目前研究已發(fā)現(xiàn)小麥AP2/ERF家族基因有117個，ERF亞族共47個，雖已明確其中多數(shù)基因參與抗旱[15]、耐鹽[16-17]、低溫脅迫[16]等多種非生物脅迫應(yīng)答[15-17]，但ERF與濕害脅迫的關(guān)系和分子機(jī)制尚不清楚。Kim等[18]研究發(fā)現(xiàn)CRISPR/Cas9編輯TaERF3和TaDREB2可以顯著提高小麥的耐干旱能力；Xu等[15]研究發(fā)現(xiàn)小麥TaERF2基因參與干旱、高鹽和低溫等非生物脅迫應(yīng)答反應(yīng)，可增強(qiáng)小麥多種脅迫的抗性；Makhloufi等[19]通過篩選硬質(zhì)小麥(TriticumturgidumL.subsp.durum)的BAC文庫獲得TdERF1基因，并發(fā)現(xiàn)TdERF1與TaERF2、TaERF1有較高的同源性，同樣參與鹽脅迫、低溫等非生物脅迫應(yīng)答。因此，本研究分析TaERF2的結(jié)構(gòu)域，以及與耐濕相關(guān)基因AtRAP2.12、AtRAP2.2和AtRAP2.3等的同源性，以期明確TaERF2的耐濕機(jī)制，對小麥耐濕性的遺傳改良提供重要科學(xué)意義和應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 ERF系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建和分組

參照Licausi 等[11]和Hess等[12]已報道的擬南芥AP2/ERF蛋白序列，采用BLAST query工具檢索普通小麥品種中國春IWGSCv1.0注釋蛋白序列(參數(shù)為E<1e-10，Identity>50)，獲得小麥AP2/ERF序列(圖1)。將獲取的小麥ERF序列與擬南芥耐濕相關(guān)的ERF成員進(jìn)行Clustal X[20]序列比對分析，由特征序列分離出小麥耐濕相關(guān)的ERF基因。根據(jù)NCBI注冊號下載已克隆小麥相關(guān)ERF蛋白序列，利用Clustal X軟件對擬南芥、水稻、大豆和玉米耐濕ERF基因與小麥ERFs氨基酸序列進(jìn)行多重序列比對分析，并用MEGA 6.0軟件[21]通過鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。所有基因ID詳見圖2。根據(jù)進(jìn)化樹及擬南芥AP2/ERF分組確定小麥中ERF基因的分組。

1.2 TaERFs基因組織表達(dá)差異分析

耐濕品種寧麥9號(江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所選育，耐濕品種[22])、不耐濕品種鄭麥1354(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供，不耐濕品種)，用于濕害處理和反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)試驗。將長勢一致的三葉一心小麥幼苗進(jìn)行盆缽濕害脅迫處理，待水沒過幼苗土表以上部分2 cm，于不同時間點(diǎn)(0、2、4、8、12、24、48、72、96 h和處理后第48小時)對根系和葉片進(jìn)行取樣，液氮速凍，-80℃冰箱中保存用于提取RNA。用R6827-01RNA提取試劑盒(Omegabio-Tek, 廣州)提取樣品總RNA，使反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa，日本)將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。2×SYBR Green Realtime PCR Master Mix試劑盒(大連寶生物有限公司)進(jìn)行RT-PCR試驗，Actin(登錄號AB181991)為內(nèi)參基因，所有引物列于表1。每個反應(yīng)重復(fù)3次，所得結(jié)果采用2-△△CT方法計算分析[23]。

表1 RT-qPCR引物序列

1.3 TaERF2蛋白結(jié)構(gòu)域和同源性比對分析

采用在線軟件MEME4.9對TaERF2蛋白序列進(jìn)行保守基序分析，搜索motif值為16，基序長度范圍為5～200個氨基酸殘基，基序最小為10，其他值設(shè)為默認(rèn)參數(shù)。TaERF2蛋白結(jié)構(gòu)域通過SMART(http://smart.embl-heidelberg.de)數(shù)據(jù)庫分析確定。NCBI中下載水稻和擬南芥已報道的耐濕ERF與小麥ERF蛋白序列，利用MNAMAN5.0進(jìn)行同源性比對分析。

1.4 TaERF2基因結(jié)構(gòu)和啟動子順式元件分析

利用GSDS在線軟件分析TaERF2基因是否含有內(nèi)含子及內(nèi)含子的數(shù)量、TaERF2外顯子和內(nèi)含子位置信息，并繪制TaERF2基因的結(jié)構(gòu)。利用PlantCARE數(shù)據(jù)庫(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/)對TaERF2基因起始密碼子前2 000 bp的基因組序列進(jìn)行啟動子元件分析。

1.5 TaERF2的原核表達(dá)分析

根據(jù)BioXM2.6.0(http://home.njau.edu.cn/～bioxm)軟件對TaERF2基因ORF的酶切位點(diǎn)分析，設(shè)計用于擴(kuò)增TaERF2基因ORF的引物對pGEX-TaE2-F：5′-C C G C T C G A G A T G T G C G G C G G C G C C A T C C T-3′與pGEX-TaE2-R：5′-G A C G T C G A C G T A G A A A C C A G C A G A C A A G G G-3′，上述引物對包含XhoI和SalI酶切位點(diǎn)。以TaERF2-T1 質(zhì)粒為模板，PCR擴(kuò)增引入酶切位點(diǎn)，50 μL擴(kuò)增體系：TaERF2-T1質(zhì)粒模板(100 ng·μL-1)1 μL，2×Phanta Max Master Mix 25 μL，上下游引物(10 μmol·L-1)各 2 μL，ddH2O 20 μL，擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性3 min；95℃變性10 s，58℃退火15 s，72℃延伸50 s，32個循環(huán)；終72℃延伸5 min。電泳檢測PCR產(chǎn)物，切膠回收目的片段，獲得純化的目的片段。將純化的目的片段與pGEX-4T-1質(zhì)粒雙酶切后進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α，轉(zhuǎn)化DH5α涂于培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，挑單克隆搖菌，菌液PCR檢測，測序，獲得正確的含有雙切位點(diǎn)質(zhì)粒。采用熱激法將重組質(zhì)粒載體pGEX-TaERF2導(dǎo)入大腸桿菌BL21，對轉(zhuǎn)化后的BL21菌株進(jìn)行平板篩選，并挑單克隆擴(kuò)繁，于-80℃菌液中保存?zhèn)溆谩?/p>

將pGEX-TaERF2的BL21菌液接種于新鮮的100 mL 含有氨芐的LB培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)至生長期OD600=0.8，然后從10 mL擴(kuò)大培養(yǎng)物中取2 mL菌液作為空白對照，其余8 mL菌液加入80 μL 0.1 mol·L-1異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopranoside, IPTG)至終濃度達(dá)到1 mmol·L-1。37℃誘導(dǎo)培養(yǎng)，分別于2、4、6、12和24 h吸取1 mL菌液，8 000 r·min-1離心8 min收集菌體。將收集的菌體加入100 μL 2×十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate, SDS)上樣緩沖液，使沉淀溶解懸浮，煮沸10 min，10 000 r·min-1離心10 min，取上清液，用5%濃縮膠、10%分離膠進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)，分析目的蛋白的表達(dá)情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 TaERF2蛋白結(jié)構(gòu)的分析

對TaERF2的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，TaERF2含有典型的AP2/ERF結(jié)構(gòu)域(圖1-A橢圓框)，典型的YRG和RAYD元件(圖1-B)，并且含有3個堿性的核定位信號區(qū)和1個酸性激活區(qū)，1個磷酸化位點(diǎn)和4個潛在的糖基化位點(diǎn)(圖1-A)。同源比對發(fā)現(xiàn)，TaERF2與擬南芥(ArabidopsisthalianaL.)RAP2.2、RAP2.12、RAP2.3、HRE1、HRE2[11,21]和水稻(OryzasativaL.)SNORKEL1、SNORKEL2[6]的耐漬基因同源性較高。

注：A：TaERF2保守域：黑色下劃線表示堿性的核定位信號區(qū)，長方形方框表示酸性激活區(qū)，橢圓方框表示ERF結(jié)構(gòu)域，旗幟陰影區(qū)表示磷酸化位點(diǎn)，星號區(qū)表示N端潛在的糖基化位；B：TaERF2與其他物種氨基酸序列的多重比對：YRG和RAYD是組成AP2/ERF結(jié)構(gòu)域的兩個主要基序。

2.2 TaERF2在AP2/ERF家族中類別的分析

為探究小麥TaERF2與其他物種ERF耐濕基因的同源進(jìn)化關(guān)系和分組情況，將擬南芥[24-25]、水稻、大豆(GlycinemaxL.)、玉米(ZeamaysL.)AP2/ERF家族中耐濕ERF[26]與小麥TaERF2及已報道的多種脅迫抗性TaERF1[15]、抗旱和耐鹽TaERF3[17,27]構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。由圖2可以看出，TaERF2(AAP32468.1)屬于ERF亞族的B2組，與擬南芥ATRAP2.2(AT3G14230.1)、ATRAP2.12(AT1G53910)、ATRAP2.3(AT3G16770)[11]和水稻OsEREBP1(AAF23899.1)[6]屬于同一亞族。

圖2 AP2/ERF基因家族的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

2.3 小麥ERFs在根葉中的表達(dá)

為進(jìn)一步驗證TaERF2與小麥耐濕的關(guān)系，在寧麥9號根和葉組織中，將已經(jīng)報道的小麥抗逆相關(guān)ERF基因TaERF3(GenBank: EF570122.1)、TaERF6(GenBank: JN681188.1)、TaERFBP(GenBank: AF542184.1)、TaERF4a(GenBank: JN681189.1)、TaERF4b(GenBank: JN681190.1)、TaERF5a(GenBank: JN681191.1)、TaERF5b(GenBank: JN681192.1)與TaERF2(GenBank: AAP32468.1)進(jìn)行表達(dá)分析。由圖3可知，受濕害脅迫條件下，小麥葉中TaERF2的表達(dá)情況為：2 h時其表達(dá)量與其他7個ERF基因有顯著差異(圖3-A)，4 h時其表達(dá)量與TaERF6、TaERF5b有顯著差異(圖3-C)，12、24、48 h時其表達(dá)量與其他7個ERF基因均無顯著差異(圖3-E、G、I)；小麥根中TaERF2的表達(dá)情況為：漬水處理2、4、12、24、48 h 時其表達(dá)量與其他7個ERF基因有顯著差異(圖3-B、D、F、H、J)，且漬水處理2、4 h時其表達(dá)量最高；TaERF2在小麥根中的表達(dá)量高于葉片中的表達(dá)量，而其他7個ERF基因在小麥根和葉中表達(dá)量差異均不顯著。

注：A、C、E、G、Ⅰ: 濕害處理2、4、12、24、48 h，TaERF2、TaERF3、TaERF6、TaERFBP、TaERF4a、TaERF4b、TaERF5a和TaERF5b在葉中表達(dá)；B、D、F、H、J：濕害處理2、4、12、24、48 h，TaERF2、TaERF3、TaERF6、TaERFBP、TaERF4a、TaERF4b、TaERF5a和TaERF5b在根中表達(dá)。不同小寫字母表示在P<0.05水平差異顯著。

2.4 TaERF2基因結(jié)構(gòu)和啟動子區(qū)域分析

將TaERF2的mRNA全長序列與小麥基因組數(shù)據(jù)庫Blast比對分析，結(jié)果如圖4-A所示，TaERF2基因含有2個外顯子和1個內(nèi)含子，第1個外顯子長度為262 bp，第2個外顯子長度806 bp，內(nèi)含子長度為874 bp。采用plantCARE對TaERF2基因上游2 000 bp區(qū)域的順式元件分析發(fā)現(xiàn)，啟動子區(qū)域含有3個缺氧誘導(dǎo)和厭氧誘導(dǎo)的順式元件，1個ARE為缺氧誘導(dǎo)的順式元件，2個GC-motif為厭氧誘導(dǎo)的順式元件(圖4-B)。另外，還有4個ABRE參與ABA響應(yīng)的順式元件，1個TATC-box參與GA響應(yīng)的順式元件，1個TCA-element參與SA響應(yīng)的順式元件。由上述結(jié)果推測，TaERF2可能受低氧或缺氧誘導(dǎo)參與小麥耐濕調(diào)控。

注：B：ABER：參與脫落酸反應(yīng)的順式作用元件；ARE：無氧誘導(dǎo)的重要順式作用調(diào)節(jié)元件；CAT-box：與分生組織表達(dá)相關(guān)的順式作用調(diào)節(jié)元件；CGTCA-motif: 參與茉莉酸反應(yīng)的順式作用調(diào)節(jié)元件；EIRE：激發(fā)子反應(yīng)元件；GC-motif：參與缺氧特異性誘導(dǎo)的增強(qiáng)子元件；MBS：參與干旱誘導(dǎo)的MYB結(jié)合位點(diǎn)；TATC-box：參與赤霉素反應(yīng)的順式作用元件；TCA-element：參與水楊酸反應(yīng)的順式作用元件。

2.5 不同耐濕性小麥品種中TaERF2基因的表達(dá)差異分析

由圖5可知，小麥葉片中，濕害脅迫處理2、4 h時，TaERF2在耐濕品種寧麥9號和不耐濕品種鄭麥1354葉片中的表達(dá)量最高，除2、24、72和96 h外，TaERF2在耐濕和不耐濕品種葉片中的表達(dá)量間無顯著差異；小麥根系中，TaERF2在寧麥9號根中的表達(dá)顯著高于鄭麥1354，且在2和4 h時表達(dá)量較高，顯著高于其他時間點(diǎn)的表達(dá)量；漬水處理2和4 h時，寧麥9號根中TaERF2的表達(dá)顯著高于葉片，其他處理時間點(diǎn)無顯著差異，漬水處理4～96 h時，TaERF2在鄭麥1354葉片中的表達(dá)量均顯著高于根；停止?jié)n水處理后48 h，寧麥9號和鄭麥1354根和葉中TaERF2的表達(dá)均無顯著差異。

圖5 TaERF2在寧麥9號和鄭麥1354葉、根的表達(dá)

2.6 小麥TaERF2基因原核表達(dá)

以空載PGEX-4T-1轉(zhuǎn)入感受態(tài)BL21為對照，在1 mmol·L-1IPTG、28℃誘導(dǎo)24 h條件下觀察重組融合蛋白的表達(dá)。將重組表達(dá)菌株破碎裂解后的上清液SDS-PAGE電泳檢測，如圖6所示，在32～48 kDa之間有特異條帶；由于表達(dá)的TaERF2蛋白預(yù)測大小為39.25 kDa，該特異條帶與預(yù)測的大小基本吻合，說明該重組蛋白可以按照試驗設(shè)計正確表達(dá)目的蛋白，并且由條帶的寬度與染色程度可看出，重組蛋白在2 h開始大量表達(dá)，2 h后表達(dá)量明顯降低。

注：M: 蛋白Marker；1: IPTG誘導(dǎo)的pGEX-4T-1空載；2: pGEX-TaERF2誘導(dǎo)2 h；3: pGEX-TaERF2誘導(dǎo)4 h；4: pGEX-TaERF2誘導(dǎo)6 h；5: pGEX-TaERF2誘導(dǎo)12 h；6: pGEX-TaERF2誘導(dǎo)24 h。

3 討論

濕害是影響小麥生產(chǎn)的世界性自然災(zāi)害[4]。長江中下游稻麥輪作麥區(qū)是我國的濕害重災(zāi)區(qū)，特別是小麥拔節(jié)到成熟期，降雨造成的濕害可導(dǎo)致小麥減產(chǎn)[13,28]。研究表明，小麥的耐濕性受相關(guān)基因的調(diào)控，特別是一些調(diào)控非生物脅迫的ERF基因[29]。小麥TaERF1基因含有典型AP2/ERF結(jié)構(gòu)域，參與干旱、高鹽和低溫等非生物脅迫應(yīng)答[15]；二粒小麥TdERF1基因同樣含有AP2/ERF結(jié)構(gòu)域，并發(fā)現(xiàn)該基因與TaERF1具有相似的功能，且同樣參與上述非生物脅迫應(yīng)答[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，TaERF2氨基酸序列含有1個典型的AP2/ERF結(jié)構(gòu)域(圖1)，其磷酸化位點(diǎn)、核定位信號區(qū)和酸性激活區(qū)與AtRAP2.12的結(jié)構(gòu)特征相同[25]。TaERF2與擬南芥RAP2.3、RAP2.12和RAP2.2及TdERF1、TaERF1OsSNORKEL1等有較高的同源性，同屬于AP2/ERF家族的B2組(圖2)。上述結(jié)果表明，TaERF2可能具有與擬南芥AtRAP2.12、AtHRE1[11,25]、水稻OsSNORKEL1[6]等基因相似的功能，參與小麥濕害脅迫應(yīng)答。

通過對小麥葉和根中TaERF2、TaERF3、TaERF6、TaERF4a、TaERF4b、TaERF5a和TaERF5b的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)(圖3)，漬水脅迫后TaERF2在小麥根中的表達(dá)顯著高于其他小麥ERFs基因的表達(dá)，并且在根中特異表達(dá)，表達(dá)量遠(yuǎn)高于葉片。雖然Xu等[15]和Rong等[17]研究發(fā)現(xiàn)TaERF1和TaERF3參與小麥多種非生物脅迫應(yīng)答，但未明確其參與耐濕應(yīng)答，且本研究并未發(fā)現(xiàn)濕害脅迫下TaERF3在根、葉中的表達(dá)有差異(如圖3)，且表達(dá)量低于TaERF2，因此其參與小麥耐濕應(yīng)答的機(jī)制仍需進(jìn)一步證實。

研究表明，小麥ERFs基因可能存在功能特異性，參與不同的非生物脅迫應(yīng)答。對TaERF2基因結(jié)構(gòu)和啟動子區(qū)域進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，TaERF2含有2個外顯子和1個內(nèi)含子，其上游啟動子區(qū)域含有ABA、GA和SA等激素、缺氧厭氧順式元件(圖4)，表明TaERF2參與濕害脅迫的響應(yīng)。TaERF2在耐濕品種寧麥9號和不耐濕品種鄭麥1354中的表達(dá)模式不同，TaERF2在寧麥9號根中的表達(dá)量顯著高于鄭麥1354，此外受濕害脅迫2 h后TaERF2在寧麥9號根系中大量表達(dá)，可能與寧麥9號具有較高耐濕性有關(guān)。原核表達(dá)的結(jié)果表明，TaERF2受誘導(dǎo)2和4 h后可快速啟動表達(dá)，這與在寧麥9號根中的表達(dá)模式相似，推測TaERF2可能參與了濕害脅迫應(yīng)答，并且受到脅迫后可快速應(yīng)答。

4 結(jié)論

本研究對TaERF2蛋白結(jié)構(gòu)、基因結(jié)構(gòu)、啟動子區(qū)域及表達(dá)進(jìn)行了探究，結(jié)果表明，TaERF2與擬南芥AtRAP2.12、AtHRE1和水稻OsSNORKEL1、OsSNORKEL1有較高的同源性，且啟動子區(qū)域含有缺氧厭氧順式元件，推測TaERF2可能為小麥濕害脅迫響應(yīng)基因。受濕害脅迫后，TaERF2在小麥根系中特異表達(dá)，在耐濕小麥品種寧麥9號根系中顯著上調(diào)表達(dá)，而在不耐濕小麥品種鄭麥1354根系中無明顯變化。原核表達(dá)結(jié)果顯示TaERF2可以快速響應(yīng)pGEX-TaERF2誘導(dǎo)，與寧麥9號根中的表達(dá)模式相似。本研究證實TaERF2在小麥耐濕中具有一定的調(diào)節(jié)作用，為進(jìn)一步明確AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子對小麥耐濕的分子調(diào)控作用提供了重要理論依據(jù)。