時(shí)紅萍，劉洪敬，葛欣，黃姝，陳友山，時(shí)黎明

1.菏澤市立醫(yī)院腫瘤科，山東菏澤 274000；2.菏澤市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東菏澤 274000

非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要類型，由于早期缺少典型的癥狀表現(xiàn)， 部分患者僅表現(xiàn)為咳嗽、胸部悶痛、低熱等癥狀，所以約75%的患者確診時(shí)已步入疾病的中晚期，生存時(shí)間較短[1-2]。 因此，盡早診斷與積極治療NSCLS 對(duì)于改善患者的預(yù)后具有至關(guān)重要的作用。 高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是存在于真核生物細(xì)胞中的非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，可以增強(qiáng)腫瘤抗原與樹(shù)突狀細(xì)胞的傳遞，促進(jìn)腫瘤新生血管形成，減慢腫瘤細(xì)胞的凋亡速度[3]。一些研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1 與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4-5]。 該研究通過(guò)回顧性分析2020年1月—2021年1月期間菏澤市立醫(yī)院97 例NSCLC 患者的臨床資料，探討HMGB1 在NSCLC 患者中的表達(dá)與臨床意義， 旨在為該病的診療方案提供可靠的參考與借鑒。 現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析菏澤市立醫(yī)院97 例NSCLC 患者的臨床資料，其中男58 例，女39 例；年齡42～79 歲，平均（60.54±7.52）歲；腫瘤直徑0.5～6.8 cm，平均（3.20±1.52）cm；組織學(xué)類型為鱗癌52 例，腺癌45 例；分化程度為低分化32 例，中分化35 例，高分化30 例；原發(fā)腫瘤局部-淋巴結(jié)-遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（TNM） 分期為Ⅰ期20 例，Ⅱ期27 例，Ⅲ期39 例，Ⅳ期11 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52 例，有血管浸潤(rùn)53 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南(2019 版)》[6]中對(duì)于NSCLC的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)病理檢查證實(shí)；肺癌術(shù)中切除的肺癌組織與癌旁組織完整；首次診斷為NSCLC；預(yù)計(jì)生存期>3 個(gè)月。 排除標(biāo)準(zhǔn)：有放化療治療史；合并其他惡性腫瘤； 嚴(yán)重心腦血管疾病與其他器官功能性障礙；免疫系統(tǒng)與血液系統(tǒng)疾??；患有急性或慢性感染性疾病；資料不全。 此外，所有患者或其家屬對(duì)該次研究知情同意； 該次研究方案取得菏澤市立醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 方法

選取患者術(shù)中切除的肺癌組織與癌旁組織，采用免疫組化法檢測(cè)HMGB1 的表達(dá)情況， 具體方法如下：①免疫組化。通過(guò)福爾馬林對(duì)患者的腫瘤組織進(jìn)行固定，以梯度乙醇脫水，并在石蠟中包埋，蠟處理后形成連續(xù)切片。 選取切片，烘烤60 min 后由二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟，用100%、95%、80%、70%梯度酒精水化，再經(jīng)自來(lái)沖洗5 min，上述操作重復(fù)2 次。滴加3%醫(yī)用雙氧水，避光孵育10 min，由磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3 次，30 min/次。 在枸櫞酸鈉緩沖液中浸泡， 以高壓鍋給予抗原熱修復(fù)。 封閉在山羊血清中15 min。 通過(guò)濾紙將血清吸除， 滴加已稀釋完的一抗，在4℃環(huán)境中過(guò)夜，室溫下放置60 min，經(jīng)PBS沖洗操作2 次，5 min/次，加入生物素化二抗，環(huán)境溫度37℃，反應(yīng)20 min，經(jīng)PBS 沖洗操作2 次，5 min/次，滴加辣根酶標(biāo)記生物素試劑+鏈霉卵白素，在環(huán)境溫度37℃下靜置20 min，PBS 沖洗操作2 次，5 min/次。 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素溶液復(fù)染，時(shí)間為10 min， 予以酒精分化處理。 用80%、95%、100%、100%梯度酒精脫水，經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明處理，適量加入中性樹(shù)膠，封片晾干。②評(píng)價(jià)結(jié)果。由兩名病理學(xué)專家進(jìn)行結(jié)果評(píng)價(jià)， 以隨機(jī)方式在每個(gè)切片中選取8 個(gè)視野，400 倍高倍鏡下觀察，HMGB1通常在腫瘤細(xì)胞中著色為褐色細(xì)顆粒。 陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率[7]≥30%為陽(yáng)性，<30%為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1 表達(dá)情況與陽(yáng)性率； ②分析NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達(dá)與臨床病理特征 （性別、年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)類型、分化程度、TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、血管浸潤(rùn)）的關(guān)系；③針對(duì)NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽(yáng)性表達(dá)的臨床病理特征進(jìn)行Logistic 回歸分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用[n(%)]表示，組間比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，影響因素進(jìn)行多因素Logistic 回歸分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1表達(dá)情況對(duì)比

NSCLC 患者肺癌組織的HMGB1 陽(yáng)性率高于癌旁組織陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見(jiàn)表1。

表1 NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1 表達(dá)情況對(duì)比[n（%）]

2.2 HMGB1 在肺癌組織與癌旁組織中的表達(dá)情況

HMGB1 主要在NSCLC 患者細(xì)胞的胞核與胞質(zhì)中表達(dá)，呈淡黃色或褐色，少量表達(dá)于癌旁細(xì)胞中，見(jiàn)圖1。

圖1 HMGB1 在肺癌組織與癌旁組織中的表達(dá)

2.3 NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

該組NSCLC 患者中分化程度為低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的HMGB1 陽(yáng)性率顯著高于分化程度為中高分化、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 不同性別、年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)類型與血管浸潤(rùn)患者的HMGB1 陽(yáng)性率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]

2.4 影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽(yáng)性表達(dá)的臨床病理特征Logistic 回歸分析

經(jīng)多因素Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽(yáng)性表達(dá)的臨床病理特征Logistic 回歸分析

3 討論

NSCLC 是肺癌的主要類型，約占所有肺癌患者的80%，包括大細(xì)胞癌、腺癌、鱗癌，其癌細(xì)胞較小細(xì)胞癌生長(zhǎng)分裂更為緩慢[8-9]。 然而，早期NSCLC 缺少典型性，往往在出現(xiàn)浸潤(rùn)、局部生長(zhǎng)，壓迫組織引起特異性癥狀后才被發(fā)現(xiàn)， 此時(shí)多數(shù)患者已步入中晚期，失去了最佳治療機(jī)會(huì)[10]。 目前，生物學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，腫瘤分子標(biāo)志物對(duì)于NSCLC 的診斷價(jià)值也得到了臨床的廣泛關(guān)注[11]。 探尋一種與NSCLC 相關(guān)的分子標(biāo)志物，及時(shí)且準(zhǔn)確診斷患者的病情，對(duì)于改善預(yù)后具有重要的意義。

HMGB1 是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中廣泛分布的高度保守核蛋白， 同時(shí)也是高遷移率族蛋白家族中的重要成員，當(dāng)細(xì)胞核中HMGB1 結(jié)合于DNA 后可以參與DNA 的修飾與轉(zhuǎn)錄， 而由單核-巨噬細(xì)胞、 粒細(xì)胞、 淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞形成的HMGB1 能夠參與炎癥反應(yīng)[12]。 有研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1 結(jié)合于特異性細(xì)胞膜受體后利于腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、增殖與轉(zhuǎn)移[13]。 目前，臨床已發(fā)現(xiàn)HMGB1 在甲狀腺癌、結(jié)腸癌與前列腺癌組織中呈過(guò)表達(dá)現(xiàn)象[14]。 馮為[15]對(duì)90 例肺癌患者應(yīng)用免疫組化HMGB1 檢測(cè)， 發(fā)現(xiàn)肺癌組織HMGB1 陽(yáng)性表達(dá)率63.33%顯著高于癌旁組織的30.00%（P＜0.05）。該文研究結(jié)果與上述結(jié)果相近，該組NSCLC 患者肺癌組織的HMGB1 陽(yáng)性率（81.44%）高于癌旁組織陽(yáng)性率 （25.77%）（P＜0.001）。 同時(shí)，HMGB1 主要在NSCLC 患者細(xì)胞的胞核與胞質(zhì)中表達(dá)，呈淡黃色或褐色，少量表達(dá)于癌旁細(xì)胞中。結(jié)果說(shuō)明，HMGB1 在NSCLC 患者肺癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，究其原因可能與NSCLC 細(xì)胞轉(zhuǎn)移與進(jìn)展時(shí)血管生長(zhǎng)迅速， 而在血管生長(zhǎng)期間能夠與正常細(xì)胞產(chǎn)生營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)，正常細(xì)胞因缺少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而死亡，細(xì)胞死亡后被動(dòng)分泌出HMGB1 有關(guān)，繼而導(dǎo)致肺癌組織內(nèi)HMGB1 明顯升高，而癌旁細(xì)胞中呈少量表達(dá)[16]。孔麗蕊等[17]對(duì)確診的81 例NSCLC 患者進(jìn)行HMGB1檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，TNM 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中HMGB1 陽(yáng)性率93.18%、89.80%高于Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的64.86%、31.25%。 該文研究發(fā)現(xiàn)，該組NSCLC 患者中分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的HMGB1 陽(yáng)性率為93.75%、94.00%、96.15%，顯著高于分化程度為中高分化、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、 無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的75.38%、68.09%、64.44%（P＜0.05）。 同時(shí)， 經(jīng)多因素Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)， 分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。結(jié)果說(shuō)明，HMGB1 與NSCLC 患者的病理特征及預(yù)后具有密切的相關(guān)性， 即患者病情越重，HMGB1 陽(yáng)性率越高， 究其原因可能為HMGB1 可以提高組織纖溶原激活物活性，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，同時(shí)HMGB1 結(jié)合于相關(guān)配體糖基化終產(chǎn)物受體后進(jìn)一步增強(qiáng)了細(xì)胞外基質(zhì)降解作用， 繼而促進(jìn)腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移[18]。

綜上所述，HMGB1 在NSCLC 中呈高表達(dá)，在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、TNM 分期、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，對(duì)于NSCLC 診斷與預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義。