李文貴 周清瑤 劉微微

[摘要]目的建立健胃消食片中總黃酮含量測定方法，為提高該產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供方法依據(jù)。方法采用無水乙醇提取，聚酰胺粉吸附，甲醇洗脫，利用紫外分光光度法在360 nm波長處測定健胃消食片中總黃酮含量。結(jié)果蘆丁對照品質(zhì)量濃度在5.821～29.106 μg/ml范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好，回歸方程為Y =31.51 649X-0.0 191（r=0.9 999），平均加樣回收率為96.9%，RSD=0.7%（n=9），健胃消食片中總黃酮含量測定方法可行。結(jié)論該方法操作簡便、靈敏度和準(zhǔn)確度符合要求，適用于健胃消食片中總黃酮含量測定。

[關(guān)鍵詞]健胃消食片;總黃酮;紫外分光光度法;含量測定

[中圖分類號]R286.0??? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A??? [文章編號]2095-0616（2022）05-0082-05

Determination of total flavonoids in Jianwei Xiaoshi Tablets

LI Wengui??? ZHOU Qingyao??? LIU Weiwei

Quality Inspection Center，Jiangzhong Pharmaceutical Co.，Ltd，Jiangxi，Nanchang 330004，China

[Abstract] Objective To establish a method for the determination of total flavonoids in Jianwei Xiaoshi Tablets，and to provide a method basis for improving the quality standard of the product. Methods Absolute ethanol extraction，polyamide powder adsorption and methanol elution were used. The content of total flavonoids in Jianwei Xiaoshi Tablets was determined by UV spectrophotometry at 360 nm. Results The mass concentration of rutin was 5.821-29.106 μg/ml. There was a good linear relationship with absorbance in the range of the regression equation was Y =31.51 649X-0.0 191 （r=0.9 999）. The average recovery was 96.9%，RSD=0.7% （n=9）. The method for the determination of total flavonoids in Jianwei Xiaoshi Tablets was feasible. Conclusion The method is simple to operate，sensitive and accurate，and suitable for the determination of total flavonoids in Jianwei Xiaoshi Tablets.

[Key words] Jianwei Xiaoshi Tablet;Total flavonoids;Ultraviolet spectrophotometry;Content determination

健胃消食片由太子參、炒麥芽、山楂、山藥、陳皮五味中藥組成，具有健胃消食的功能[1]。該產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國藥典（2020年版）1部收載，標(biāo)準(zhǔn)中對橙皮昔的含量進(jìn)行了測定。橙皮苷是健胃消食片中陳皮的主要有效成分，僅測定橙皮苷顯得比較單一，對太子參、炒麥芽、山楂、山藥藥材的質(zhì)量控制有待加強(qiáng)，以更好地控制健胃消食片的產(chǎn)品質(zhì)量。

橙皮昔是黃酮類化合物[2]，并發(fā)現(xiàn)太子參、炒麥芽、山楂、山藥中均含有黃酮類化合物[3-6]。黃酮類化合物是廣泛存在于植物界的一大類天然產(chǎn)物，種類繁多，是目前備受關(guān)注的天然活性物質(zhì)之一[7-9]。黃酮類成分具有止咳、祛痰、平喘、助消化、護(hù)肝、抗真菌等作用[10]，在醫(yī)藥、保健食品等方面已被廣泛應(yīng)用[11]。以總黃酮作為指標(biāo)性成分，根據(jù)所含黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)類型、理化及光譜性質(zhì)，對其進(jìn)行含量測定，是中藥及其他制劑質(zhì)量控制的重要研究內(nèi)容[12-16]。本研究旨在建立健胃消食片中總黃酮的含量測定方法，為提高健胃消食片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供方法依據(jù)。

1??? 儀器與試藥

UV-2550型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）;MS204S型天子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）;HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州億通分析儀器制造有限公司）。

蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，純度為91.7%，批號：100080-20181）;乙醇（分析純，西隴科學(xué)）;甲醇（分析純，廣東光華科技股份有限公司）;石油醚（分析純，30～60℃，廣東光華科技股份有限公司）;聚酰胺粉（分析純，浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠）;水為蒸餾水;健胃消食片（江中藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20013220）。

2??? 方法與結(jié)果

2.1??? 溶液的配制

2.1.1??? 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制??? 取蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1 ml含50 μg的溶液。分別精密吸取上述溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻既得。

2.1.2??? 供試品溶液的制備??? 取健胃消食片10片，研細(xì)，精密稱取約1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml 無水乙醇溶解，稱重。超聲提取20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得。

2.2??? 測定方法

以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為X坐標(biāo)，對應(yīng)吸光度為Y坐標(biāo)，求線性回歸方程，將測得的供試品溶液吸光度代人回歸方程，計(jì)算供試品中總黃酮的含量。

2.3??? 影響因素試驗(yàn)

2.3.1??? 波長的選擇??? 取健胃消食片粉末適量，精密稱取約1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml無水乙醇溶解，稱重。超聲提取20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得。將收集液置于1 cm石英比色皿中，在200～400 nm波長范圍進(jìn)行測定，以甲醇做基線掃描。結(jié)果顯示甲醇洗脫液在360 nm處有最大吸收。見圖1。

2.3.2??? 乙醇濃度的考察??? 取健胃消食片粉末6份，各精密稱取1.5 g至錐形瓶中，分別精密加入25 ml 的50%、60%、70%、80%、95%乙醇、無水乙醇溶解，稱重。超聲提取20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，力口1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得。結(jié)果顯示無水乙醇作為提取溶劑時(shí)，總黃酮含量已達(dá)最佳。見圖2。

2.3.3??? 超聲時(shí)間的考察??? 取健胃消食片粉末6份，各精密稱取1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml無水乙醇溶解，稱重。分別超聲5、10、15、20、25、30 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得。結(jié)果顯示超聲20 min，總黃酮含量已達(dá)最佳。見圖3。

2.3.4??? 聚酰胺粉用量的考察??? 取健胃消食片粉末6份，各精密稱取1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml 無水乙醇溶解，稱重。超聲20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，分別加入0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得。結(jié)果顯示聚酰胺粉用量為1.0 g時(shí)，總黃酮含量已達(dá)最佳。見圖4。

2.3.5??? 洗脫液流出速度的考察??? 取健胃消食片粉末6份，各精密稱取1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml無水乙醇溶解，稱重。超聲20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，加入1.0 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫，分別以6、5、4、3、2、1 s/滴的速度洗脫至25 ml容量瓶中，收集液至刻度，搖勻既得。結(jié)果顯示洗脫速度為4 s/滴時(shí)，總黃酮含量已達(dá)最佳。見圖5。

2.3.6??? 收集液體積的考察??? 取健胃消食片粉末6份，各精密稱取1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml無水乙醇溶解，稱重。超聲20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，加入1.0 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫以4 s/滴的速度洗脫至25 ml容量瓶中，收集液分別收集至5、10、25、50、100 ml，搖勻既得。結(jié)果顯示收集液收集至25 ml時(shí)，總黃酮含量已達(dá)最佳。見圖6。

2.4??? 方法學(xué)考察

2.4.1??? 線性關(guān)系考察??? 取蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1 ml含50μg的溶液。分別精密吸取上述溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml 于10 ml 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻既得。以吸光度Y為縱坐標(biāo)，測定濃度X為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得蘆丁的回歸方程為Y=31.51 649X-0.0 191 （r=0.9 999）;表明蘆丁含量在5.821～29.106μg/ml范圍內(nèi)其質(zhì)量濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.4.2??? 日內(nèi)精密度試驗(yàn)??? 取健胃消食片10片，研細(xì)，精密稱取約1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml 無水乙醇溶解，稱重。超聲提取20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得，連續(xù)測定6次。見表1。

2.4.3??? 日間精密度試驗(yàn)??? 取健胃消食片10片，研細(xì)，精密稱取約1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml 無水乙醇溶解，稱重。超聲提取20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得，分別于第0、4、8、16、24、36、48、60、72 小時(shí)進(jìn)行測定。見表2。

2.4.4??? 重復(fù)性試驗(yàn)??? 取健胃消食片粉末6份，各精密稱取1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml無水乙醇溶解，稱重。超聲20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得，分別重復(fù)測定六次。見表3。

2.4.5??? 回收率試驗(yàn)??? 精密稱取已知總黃酮含量的健胃消食片粉末約0.6 g，共9份，分別加入21.2、26.5、31.8 mg 3個不同質(zhì)量的蘆丁對照品，每個濃度平分3份，分別至錐形瓶中，精密加入25 ml無水乙醇溶解，稱重。超聲20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，力口1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得。見表4。

2.4.6??? 樣品測定??? 取10批次的健胃消食片樣品，分別研細(xì)，分別精密稱取約1.5 g至錐形瓶中，精密加入25 ml無水乙醇溶解，稱重。超聲提取20 min，補(bǔ)足減失的重量。過濾，精密移取續(xù)濾液10 ml于蒸發(fā)皿中，力口1 g聚酰胺粉充分吸附完全后，于水浴上揮發(fā)聚酰胺粉表面乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱，先用20 ml石油醚（30～60℃）洗滌，棄去洗滌液，然后用甲醇洗脫至25 ml容量瓶中，洗脫速度為4 s/滴，收集液至刻度，搖勻既得。見表5。

2.5??? 結(jié)果

通過對健胃消食片總黃酮含量測定的各影響因素研究（包括波長的選擇、乙醇濃度的考察、超聲時(shí)間的考察、聚酰胺粉用量的考察、洗脫液流出速度的考察、收集液體積的考察），建立了健胃消食片總黃酮含量測定方法。該方法的精密度、重復(fù)性、線性關(guān)系、回收率均符合要求，證明該方法穩(wěn)定可靠，可用于健胃消食片中總黃酮的含量測定。

3??? 討論

江中牌健胃消食片是由太子參、山楂、炒麥芽、山藥、陳皮藥材提取而成的中藥制劑，功效顯著，口碑良好，在市場上屬于暢銷產(chǎn)品。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究建立了總黃酮含量測定方法。

蘆丁是典型的黃酮類化合物，在測定總黃酮時(shí)，通常以蘆丁作為對照品[17-19]。在考察洗脫液流速時(shí)，實(shí)際操作中由于樣品雜質(zhì)的影響，易出現(xiàn)洗脫液流出越來越慢的現(xiàn)象，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)節(jié)層析柱的閥門開關(guān)。聚酰胺粉在吸附樣品溶液時(shí)需充分吸附完全，同時(shí)在轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿時(shí)應(yīng)盡可能轉(zhuǎn)移完全，必要時(shí)使用甲醇潤洗，潤洗液在石油醚洗脫后、甲醇洗脫前加入層析柱。本研究還比較了甲醇與乙醇作為提取溶劑時(shí)，它們的提取效果是否存在差異。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，二者提取效果無顯著性差異，考慮到安全及方便易取，因此選擇乙醇作為提取溶劑。

從樣品測定結(jié)果中可以看出，10批次測定結(jié)果比較穩(wěn)定，總黃酮在25.4～27.9 mg/100 g范圍內(nèi)波動，具有一定的特征范圍。由于本研究未對市場上不同廠家的健胃消食片進(jìn)行研究，因此下一步將繼續(xù)研究。

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