王晴 劉競元 齊曉娟

[摘要]目的探討小檗堿對利血平誘導(dǎo)的抑郁癥模型小鼠行為學(xué)變化的影響。方法將40只實驗動物隨機分為正常對照組、模型組、小檗堿組及氟西汀組，每組各10只。模型組、小檗堿組及氟西汀組小鼠每日腹腔注射利血平200 mg/kg（生理鹽水配制），正常對照組每日腹腔注射等量的生理鹽水，每組小鼠連續(xù)注射4周。造模4周后采用灌胃法給藥，每天1次，共21 d。小檗堿組190 mg/kg灌胃;氟西汀組3 mg/kg灌胃;正常對照組和模型組每天給予同體積蒸餾水灌胃。采用強迫游泳、懸尾及高架十字迷宮實驗法觀察小鼠的行為學(xué)變化。結(jié)果與正常對照組比較，模型組的懸尾不動時間及強迫游泳不動時間均明顯延長（P<0.01）。與正常對照組比較，小檗堿組強迫游泳不動時間縮短（P<0.05）。與模型組比較，小檗堿組的懸尾不動時間及強迫游泳不動時間均縮短（P<0.05）;氟西汀組的懸尾不動時間及強迫游泳不動時間均明顯縮短（P<0.01）。與正常對照組比較，模型組開臂區(qū)進入次數(shù)明顯減少（P<0.05）;與模型組比較，氟西汀組開臂區(qū)進入次數(shù)明顯增多（P<0.01）。與正常對照組比較，模型組開臂區(qū)滯留時間明顯縮短（P<0.05）;與模型組比較，小檗堿組開臂區(qū)滯留時間明顯延長（P<0.01），氟西汀組開臂區(qū)滯留時間明顯延長（P<0.01）。結(jié)論小檗堿具有抗抑郁作用。

[關(guān)鍵詞]小檗堿;抑郁癥;小鼠;行為學(xué)

[中圖分類號]R285.5??? [文獻標(biāo)識碼]A??? [文章編號]2095-0616（2022）05-0023-04

Experimental study of the effect of berberine on behaviors of mice with reserpine-induced depression

WANG Qing??? LIU Jingyuan??? QI Xiaojuan

Staff Room of Physiology，Qiqihar Medical University，Heilongjiang，Qiqihar 161006，China

[Abstract]Objective To investigate the effect of berberine on the behavioral changes in a mouse model of reserpine-induced depression. Methods A total of 40 experimental animals were randomly divided into the normal control group，the model group，the berberine group and the fluoxetine group，with 10 mice in each group. The mice in the model group，the berberine group and the fluoxetine group were intraperitoneally injected with 200 mg/kg reserpine （prepared in normal saline）every day，the normal control group was intraperitoneally injected with the same amount of normal saline every day，and the injection in each group lasted for 4 weeks. After 4 weeks of modeling，the drug was administered by gavage once a day for 21 days. The berberine group was given 190 mg/kg by gavage;the fluoxetine group was given 3 mg/kg by gavage;the normal control group and the model group were given the same volume of distilled water by gavage every day. The behavioral changes of mice were observed by forced swim test （FST），tail suspension test （TST）and elevated plus-maze test. Results Compared with the normal control group，the immobility time in TST and immobility time in FST in the model group were significantly longer （P<0.01）. Compared with the normal control group，the immobility time of forced swimming in the berberine group was shortened （P<0.05）. Compared with the model group，the immobility time in TST and immobility time in FST in the berberine group were shorter （P<0.05）;the immobility time in TST and immobility time in FST in the fluoxetine group were significantly shorter （P<0.01）. Compared with the normal control group，the number of entries into the open arms in the model group was significantly reduced （P<0.05）. Compared with the model group，the number of entries into the open arms in the fluoxetine group increased significantly （P<0.01）. Compared with the normal control group，the time spent in the open arms in the model group was significantly shorter （P<0.05）. Compared with the model group，the time spent in the open arms in the berberine group was significantly longer （P<0.01）;and the time spent in the open arms in the fluoxetine group was significantly longer （P<0.01）. Conclusion Berberine has antidepressant effects.

[Key words] Berberine;Depression;Mouse;Behavior

抑郁癥是一種常見的精神障礙性疾病，以顯著而持久的情緒低落為主要臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者會出現(xiàn)悲觀厭世的情緒和自殺行為，患者自殺率高達12%～14%[1]。近年來由于人們生活和工作壓力的增大，該病發(fā)病率逐年上升且發(fā)病人群越發(fā)廣泛，嚴(yán)重影響人們的身心健康[2]。在臨床上，抑郁癥還會繼發(fā)或伴發(fā)其他疾病，甚至?xí)谝欢ǔ潭壬霞又仄洳∏閇3-4]。因此，人們對抑郁癥的治療越來越重視。西藥治療抑郁癥主要選用丙咪嗪、氟哌噻噸美利曲辛片及新型抗抑郁焦慮藥物鹽酸帕羅西汀等，但存在禁忌證多、成癮性大、副作用明顯、停藥后易復(fù)發(fā)、有效率較低、患者依從性較差等問題[5-6]。因此，研究者將研究重點逐漸聚焦在具有廣闊前景的植物藥領(lǐng)域，特別是我國傳統(tǒng)的中藥領(lǐng)域，當(dāng)前研究并開發(fā)安全且有效的抗抑郁中草藥已成為研究者的共識，是目前一個新的研究熱點[7]。本實驗研究了中藥小檗堿對小鼠抑郁癥模型行為學(xué)改變的影響，為臨床抑郁癥的治療探討新思路并提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)支撐。

1??? 材料與方法

1.1??? 實驗動物

40只清潔級ICR小鼠，購于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實驗動物部，動物許可證號為SCXK（黑）2013-001，雌雄各半，體重（20.45±2.23）g，所有實驗動物均飼養(yǎng)在齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，動物許可證號為SYXK（黑）2016-001。所有小鼠均自由進食和飲水，分籠飼養(yǎng)，每日日光燈照明時間為12 h，溫濕度條件分別為（22.32±2.16）℃和40%～60%，實驗動物的使用嚴(yán)格遵循3R原則。

1.2??? 試劑與儀器

利血平注射液購自天津金耀藥業(yè)有限公司（國藥準(zhǔn)字H12020905），鹽酸小檗堿購自武漢遠成共創(chuàng)科技有限公司，鹽酸氟西汀片購自禮來蘇州制藥有限公司（國藥準(zhǔn)字J20080016），高架十字迷宮為成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

1.3??? 方法

將實驗動物隨機分為正常對照組、模型組、小檗堿組及氟西汀組，每組10只，每組小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后造模，正常對照組小鼠每日腹腔注射等量的生理鹽水，模型組、小檗堿組及氟西汀組小鼠每日腹腔注射利血平200 mg/kg（生理鹽水配制），每組小鼠連續(xù)注射4周。造模4周后采用灌胃法給藥，給藥劑量按動物體重折算系數(shù)公式換算。氟西汀組3 mg/kg灌胃;小檗堿組190 mg/kg灌胃;每天給予模型組及正常對照組同體積的蒸餾水灌胃。每天1次，共21 d。

1.3.1??? 懸尾實驗??? 將膠帶粘住尾巴的小鼠倒掛于水平木棍上，保持小鼠頭部與地面距離為5～6 cm，分別記錄每只小鼠在實驗6 min內(nèi)的后4 min累積不動的時間。

1.3.2??? 強迫游泳實驗??? 將小鼠置于高25 cm、直徑18 cm柱形器皿內(nèi)，內(nèi)裝有清水，溫度保持在（25.00±1.00）℃，分別記錄每只小鼠在實驗6 min 內(nèi)的后4 min累積不動的時間。

1.3.3??? 高架十字迷宮實驗??? 測試前將待測小鼠置于一個鼠籠內(nèi)，先任其自由探索5 min，然后迅速置于高架十字迷宮的中央平臺處，使其頭部正對其中任一開放臂，釋放后即開始測試，每只小鼠測試5 min。取出小鼠后，用酒精棉球徹底擦拭箱底，待酒精完全揮發(fā)后，繼續(xù)下一只小鼠的測試[8]。

1.4??? 統(tǒng)計學(xué)方法

2??? 結(jié)果

2.1??? 懸尾實驗結(jié)果比較

由于實驗過程中部分小鼠死亡，最終各組小鼠數(shù)量見表1所列。與正常對照組比較，模型組、小檗堿組及氟西汀組的懸尾不動時間明顯延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=7.080，P=0.001）;與正常對照組比較，模型組懸尾不動時間明顯延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000），與正常對照組比較，小檗堿組懸尾不動時間延長，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.275），與正常對照組比較，氟西汀組懸尾不動時間延長，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.246）。與模型組比較，小檗堿組懸尾不動時間明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.005）;與模型組比較，氟西汀組懸尾不動時間明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.002）。見表1。

2.2??? 強迫游泳實驗結(jié)果比較

與正常對照組比較，模型組、小檗堿組及氟西汀組的強迫游泳不動時間有明顯改變，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=11.916，P=0.000）;與正常對照組比較，模型組強迫游泳不動時間明顯延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.002），與正常對照組比較，小檗堿組強迫游泳不動時間縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.014），與正常對照組比較，氟西汀組強迫游泳不動時間縮短，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.352）。與模型組比較，小檗堿組強迫游泳不動時間明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）;與模型組比較，氟西汀組強迫游泳不動時間明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）。見表2。

2.3??? 高架十字迷宮實驗結(jié)果比較

與正常對照組比較，模型組、小檗堿組及氟西汀組開臂區(qū)進入次數(shù)有改變，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=3.300，P=0.034）;與正常對照組比較，模型組開臂區(qū)進入次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.023），與正常對照組比較，小檗堿組開臂區(qū)進入次數(shù)減少，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.179），與正常對照組比較，氟西汀組開臂區(qū)進入次數(shù)增多，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.726）。與模型組比較，小檗堿組開臂區(qū)進入次數(shù)增多，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.366）;與模型組比較，氟西汀組開臂區(qū)進入次數(shù)增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.009）。

與正常對照組比較，模型組、小檗堿組及氟西汀組開臂區(qū)滯留時間明顯改變，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=4.528，P=0.010）;與正常對照組比較，模型組開臂區(qū)滯留時間減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.010），與正常對照組比較，小檗堿組開臂區(qū)滯留時間延長，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.648），與正常對照組比較，氟西汀組開臂區(qū)滯留時間延長，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.648）。與模型組比較，小檗堿組開臂區(qū)滯留時間延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.005）;與模型組比較，氟西汀組開臂區(qū)滯留時間延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.003）。見表3。

3??? 討論

抑郁癥是一種常見的精神類疾病，主要癥狀一般表現(xiàn)為長期情緒低落、思維遲鈍、意志力缺乏，嚴(yán)重時可表現(xiàn)為自殺行為[9]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，抑郁癥已經(jīng)成為繼冠心病之后影響人類健康的第二大類疾病，對人類的健康產(chǎn)生極大的危害，嚴(yán)重影響人們的日常生活及工作，因而受到越來越多的關(guān)注[10-11]。

行為學(xué)測試方法有很多種，目前常見且被多數(shù)學(xué)者公認的最標(biāo)準(zhǔn)的行為學(xué)測試方法是強迫游泳實驗和懸尾實驗，由Isingrini等[12]發(fā)明，這兩種測試方法是通過記錄動物在強迫游泳實驗和懸尾實驗中的相對客觀指標(biāo)即不動時間來量化反映動物在實驗過程中的絕望程度[13]，因其實驗操作簡單以及條件容易控制，且多種抗抑郁藥急性給藥后其反應(yīng)較為敏感，故常用于抗抑郁藥物的初篩[11，14-15]。

此外，高架十字迷宮實驗也是一種比較常見的評估動物行為學(xué)的測試方法。通常情況下，正常小鼠在實驗中進入開放臂較進入閉合臂的次數(shù)更多、滯留時間也更長，表示其探索新環(huán)境的行為能力更強，而抑郁模型小鼠進入開放臂的次數(shù)及滯留時間較正常小鼠明顯減少[16-17]。

小檗堿是中草藥如黃連、刺檗、白毛茛等的根莖和皮中的重要成分之一，研究顯示其具有多種藥理作用，如抑菌、抗炎、抗病毒等，且對多種疾病具有較好的治療作用，如腫瘤、糖尿病、心血管疾病、消化道疾病等[18-19]。目前多項研究表明小檗堿可顯著縮短動物在強迫游泳實驗中的不動時間，并具有抗焦慮作用，其作用機制可能與某些神經(jīng)遞質(zhì)如單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及5-羥色胺受體等有關(guān)[7，20-23]。

本研究顯示，小檗堿能明顯縮短動物的強迫游泳及懸尾不動時間，與文獻研究結(jié)果一致[20-22]。高架十字迷宮實驗結(jié)果顯示，與模型組比較，小檗堿組開臂區(qū)滯留時間更長，表明該實驗組小鼠在行為上具有較強的探索新環(huán)境的能力，與文獻研究結(jié)果一致[23]。但模型組與小檗堿組開臂區(qū)進入次數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），可能與本研究觀察的動物數(shù)量有限有關(guān)，今后應(yīng)擴大研究動物數(shù)量，進一步觀察小檗堿的抗抑郁效果。

綜合所述，提示小檗堿在利血平誘導(dǎo)的抑郁模型小鼠中有抗抑郁作用，其作用機制有待進一步研究。

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