李 軍

(呂梁學(xué)院 生命科學(xué)系，山西 離石 033001)

近年來，溫室中病蟲害發(fā)生日益嚴重，化學(xué)農(nóng)藥的使用也越來越多，化學(xué)農(nóng)藥所產(chǎn)生的負面效應(yīng)也越來越嚴重[1].黃瓜是溫室中種植比較廣泛的一種蔬菜，病蟲害發(fā)生也非常嚴重，已有報道大量使用化學(xué)農(nóng)藥會對植物造成階段性傷害，使植物的抗性減弱[2].玫煙色棒束孢(Isariafumosorosea)又稱玫煙色擬青霉，是農(nóng)業(yè)害蟲防治中常用且分布廣泛的昆蟲致病真菌[3].玫煙色棒束孢可用來防治溫室黃瓜上的煙粉虱等害蟲，但在使用過程中是否會像化學(xué)農(nóng)藥一樣對寄主植物產(chǎn)生影響就不得而知.因此本文研究了不同濃度的玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗生長及生理特性的影響，進而推測出玫煙色棒束孢在防治害蟲時對寄主植物無影響，為該菌株的廣泛應(yīng)用提供理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1 不同濃度玫煙色棒束孢孢子懸浮液的配制

本實驗所需的玫煙色棒束孢IF-1106菌株原存于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生物防治實驗室.PDA培養(yǎng)基準備好后，將試管斜面上保存的玫煙色棒束孢IF-1106菌株在無菌的超凈工作臺上接種到PDA培養(yǎng)基上，然后放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d.菌絲長滿培養(yǎng)皿后，加含吐溫-80的無菌水，然后用接種針輕刮菌絲及孢子，并將其連同菌液倒入燒杯中，再用磁力攪拌器將其打散，過濾，即可獲得玫煙色棒束孢孢子懸浮液[4].用血球計數(shù)板計數(shù)，先將孢子懸浮液稀釋到1.0×108cfu/mL，再分別稀釋為1.0×107cfu/mL，1.0×106cfu/mL，1.0×105cfu/mL，1.0×104cfu/mL備用.

1.2 黃瓜幼苗的培育及處理

幼苗培育采用穴盤育苗法[5].采用5×10的育苗盤，規(guī)格為每穴孔徑為5 cm×5 cm，深度5.5 cm，穴底通水孔直徑約1 cm.將育土先填滿育苗盤的每個穴位，然后在育苗盤的每個帶孔方格填土并在其深度的三分之二處挖開一個小孔放入1到2顆種子，最后將孔洞輕拍壓緊.每間隔1-2 d對其噴灑清水以保持土壤濕潤，待黃瓜幼苗發(fā)芽出土后，長出兩片真葉時，從中選擇18株生長狀態(tài)相近且良好的黃瓜幼苗，均分為6大組，移栽到6個育苗盆，并編號.

1.3 供試儀器及試劑

電子天平(BSA224S)：賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；手提式壓力蒸汽滅菌器(YX-24LDJ)：江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；超凈工作臺(ZHJH-C1112B)：上海智城分析儀器制造有限公司；數(shù)顯電子恒溫水浴鍋(723N)：常州郎越儀器制造有限公司；可見分光光度計(DZKW-D-1)：上海菁華儀器制造有限公司；高速離心機(TG16G)：天津廠豐科技發(fā)展有限公司；生化培養(yǎng)箱(SPX-250：上海躍進醫(yī)療器械有限公司.分析純脯氨酸、牛血清白蛋白、磺基水楊酸、茚三酮、考馬斯亮藍G250等.

1.4 試驗方法

六組黃瓜幼苗盆栽一段時間，生長情況穩(wěn)定后即可進行試驗；將A組黃瓜幼苗設(shè)為空白對照，以一定量的清水噴灑植株，B、C、D、E、F五組黃瓜幼苗分別用配制好的5種不同濃度的玫煙色棒束孢孢子懸浮液進行等量噴灑，做好標記；重復(fù)3次；黃瓜幼苗接受孢子懸浮液噴灑繼續(xù)生長20 d后，對六組黃瓜幼苗的生長狀況即6個代表性的指標分別進行測定并記錄數(shù)據(jù).

1.5 指標測定

1.5.1 黃瓜幼苗生長指標的測定

用卷尺，直尺，細線，游標卡尺等工具分別測定各組黃瓜幼苗的株高(莖基部至生長點處)、莖粗(距根莖以上1 cm處)、根長(莖基部以下至根尖伸展處)并及時記錄[6].

1.5.2 黃瓜幼苗生理指標的測定

生理指標的測定參考相關(guān)文獻，脯氨酸含量測定采用磺基水楊酸法[7]，糖含量測定采用蒽酮比色法[8]，蛋白質(zhì)含量測定采用考馬斯亮藍G-250法[9].

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗生長特性的影響

2.1.1 不同濃度玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗株高的影響

黃瓜幼苗株高隨著孢子懸浮液濃度的增加整體呈上升趨勢(如表1所示)，但是與對照組比差異不顯著(P=0.112).以對照組為參照，可發(fā)現(xiàn)濃度為1.0×107cfu/mL的玫煙色棒束孢孢子懸浮液對黃瓜幼苗的株高生長有一定的促進作用；其余濃度對黃瓜幼苗作用不明顯.

表1 不同濃度的玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗株高的影響

2.1.2 不同濃度玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗根長的影響

不同濃度的孢子懸浮液處理后黃瓜幼苗根長有不同的變化(如表2所示)，但整體上看實驗組處理過的黃瓜幼苗的根長是在對照組黃瓜幼苗的根長周圍上下波動，差異不顯著(P=0.185).以對照組為參照，可以發(fā)現(xiàn)1.0×106cfu/mL、1.0×107cfu/mL、1.0×108cfu/mL的玫煙色棒束孢孢子懸浮液處理后，黃瓜幼苗的根長有所增加；1.0×104cfu/mL、1.0×105cfu/mL的玫煙色棒束孢孢子懸浮液處理后的黃瓜幼苗的根長與對照組相比有微小的下降.但總體而言，玫煙色棒束孢孢子懸浮液處理后的黃瓜幼苗根長與對照組無顯著差異.

表2 不同濃度的玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗根長的影響

2.1.3 不同濃度玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗莖粗的影響

黃瓜幼苗莖粗變化的趨勢同株高的變化趨勢類似，莖粗隨著孢子懸浮液濃度的增加整體上呈上升趨勢(如表3所示)，1.0×108cfu/mL的玫煙色棒束孢孢子懸浮液處理對黃瓜幼苗莖粗的影響最大，但是與對照相比，差異不顯著(P=0.121).

表3 不同濃度的玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗

2.2 玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗生理特性的影響

2.2.1 不同濃度玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗脯氨酸含量的影響

黃瓜幼苗脯氨酸含量隨著孢子懸浮液濃度的增加有所增加(如表4所示)，但與對照組比差異不顯著(P=0.358).1.0×108cfu/mL的孢子懸浮液處理下的脯氨酸含量最高.

表4 不同濃度的玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗中

2.2.2 不同濃度玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗可溶性糖含量的影響

隨著孢子懸浮液濃度濃度的升高，黃瓜幼苗可溶性糖大體上呈升高趨勢(如表5所示)，但與對照組比差異不顯著(P=0.114).

表5 不同濃度的玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗中

2.2.3 不同濃度玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗可溶性蛋白含量的影響

隨著玫煙色棒束孢孢子懸浮液濃度的升高，黃瓜幼苗中的可溶性蛋白含量增加(如表6所示)，但與對照組比，差異不顯著(P=0.088).

表6 不同濃度的玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗中

3 結(jié)論與討論

株高是植物形態(tài)學(xué)最基本的指標之一，通過株高的大小可以直觀地看出黃瓜的長勢.根是植物的營養(yǎng)器官，根長的大小顯示了植物吸收水分能力的強弱.莖是植物的支柱和運輸線.本實驗選擇了株高、根長、莖粗三個有代表性的生長指標進行測量，通過測定不同濃度的玫煙色棒束孢孢子懸浮液對黃瓜幼苗生理特性的影響，可以發(fā)現(xiàn)玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗生理指標雖然有影響，但都是極其輕微的，與其作為生物農(nóng)藥防治害蟲的功效相比，其影響可以忽略不計；還可以發(fā)現(xiàn)適宜的較高濃度的玫煙色棒束孢孢子懸浮液在一定程度上促進了黃瓜幼苗的生長.本實驗研究結(jié)果與前人研究也基本符合[10].蟲生真菌玫煙色棒束孢對黃瓜幼苗基本無影響，可作為生物農(nóng)藥廣泛使用，是一種性價比比較好的生物農(nóng)藥.