侯娟，陳煥文，陳建麗，陳文青

（廈門(mén)大學(xué)附屬第一醫(yī)院杏林分院檢驗(yàn)科，福建 廈門(mén) 361000）

臨床上，系統(tǒng)性紅斑狼瘡屬于一種常見(jiàn)的免疫系統(tǒng)疾病，好發(fā)于青年女性群體，其具體發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確，通常認(rèn)為與環(huán)境因素、免疫異常、感染、內(nèi)分泌及遺傳等因素密切相關(guān)[1-2]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的機(jī)體免疫功能低下，且可能會(huì)出現(xiàn)多種自身抗體功能異常及B、T 淋巴細(xì)胞異常等情況，因該病的臨床表現(xiàn)多樣，易出現(xiàn)誤診情況[3]。基于此，本研究選取2016年6月至2019年3月本院收治的128 例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者作為研究對(duì)象，均測(cè)定免疫球蛋白G（immunoglobulin-G，IgG）、免疫球蛋白A（immunoglobulin-A，IgA）、免疫球蛋白M（immunoglobulin-M，IgM）及補(bǔ)體β1C-球蛋白（C3）、β1E-球蛋白（C4），并行可提取核抗原（extractable nucler antigen，ENA）檢測(cè)、抗雙鏈脫氧核糖核酸抗體（double-stranded DNA，ds-DNA）抗體檢測(cè)與抗核抗體譜（anti-nuclear antibody spectra，ANAS）檢測(cè)，旨在探究系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中免疫學(xué)檢驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016 年6 月至2019 年3 月本院收治的128 例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者作為甲組，另選取同期120 例健康體檢者作為乙組。甲組男70例，女58 例；年齡21～58 歲，平均（46.28±6.38）歲；活動(dòng)期54例作為活動(dòng)組，非活動(dòng)期74例，作為非活動(dòng)組。乙組男68 名，女52 名，年齡23～59 歲，平均（46.19±6.35）歲。兩組臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：均對(duì)本研究知情同意并自愿簽署知情同意書(shū)；無(wú)精神障礙者；能正常交流與溝通者。排除標(biāo)準(zhǔn)：拒絕參與本研究者；依從性低者。

1.2 方法 所有研究對(duì)象均行免疫學(xué)聯(lián)合檢測(cè)，采集其5 ml清晨空腹靜脈血，以3 500 r/min離心15 min，獲取150 μl以上血清，置于-20 ℃的冰箱中保存待檢。

IgG、IgA、IgM 及補(bǔ)體C3、C4 測(cè)定方式：均采用散射速率免疫比濁法進(jìn)行測(cè)定，于同一膜片上固化相應(yīng)特異性抗原，充分利用微孔濾膜的滲透、凝集及濃縮作用，捕捉被檢樣品中的特異性IgG抗體，在固相膜上，抗原抗體以極快的速度形成復(fù)合物，并與IgG免疫金試劑發(fā)生反應(yīng)，固相膜上有紅色斑點(diǎn)出現(xiàn)。

ENA、ds-DNA 抗體與ANAS 測(cè)定方式。①試劑與儀器：顯微鏡（日本尼康公司）；ENA、抗ds-DNA 試劑（廣州萬(wàn)孚生物公司）；ANAS 試劑（歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司）。②測(cè)定方式：ENA 采用免疫印跡法測(cè)定，ANAS采用間接免疫熒光法測(cè)定，采用識(shí)別儀對(duì)圖像進(jìn)行采集，分析不同點(diǎn)陣灰度值，判定測(cè)定結(jié)果；采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定抗ds-DNA抗體，采用樣本緩沖液稀釋待檢血清，在樣本槽中分別加入稀釋后的血清、標(biāo)準(zhǔn)品及陰陽(yáng)性對(duì)照，在室溫條件下進(jìn)行溫育與洗板，加入酶結(jié)合物后，再次進(jìn)行溫育、洗板，將底物液加入，滴入終止液，將450 nm 作為比色，波長(zhǎng)參考620～650 nm。測(cè)定ANA 時(shí)，采用間接免疫熒光法，采用PBS 吐溫緩沖液稀釋血清標(biāo)本，一直加到反應(yīng)區(qū)，采用陰陽(yáng)血清進(jìn)行對(duì)照；經(jīng)溫室溫育、沖洗、浸泡，加入抗人球蛋白，再次溫浴、浸泡，采用PBS 封片。以猴肝細(xì)胞、人喉癌細(xì)胞Hep-2作為ANA基質(zhì)，采用熒光鏡進(jìn)行觀察，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)為效價(jià)＞1∶100。

IgG 測(cè)定方式：人血清中抗線(xiàn)粒體抗體M2 型（antimitochon-drial antibody M2，AMA-M2）、抗核糖體P蛋白（anti-ribosomal P-protein antibody，APRA）、抗組蛋白（histone）、抗核小體（anti-nucleosome anti-body，AnuA）、抗增殖細(xì)胞核抗原（proliferatingcelnuclearantigen，PCNA）、抗著絲點(diǎn)B、抗Jo-1、抗PM-Scl、抗Scl-70、抗Ro-52、抗SS-B、抗SS-A、抗Sm、抗nRNP/Sm均可采用線(xiàn)性免疫測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)，顯色結(jié)果灰度值采用EUROLineScan軟件進(jìn)行掃描分析，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)為灰度值≥11，弱陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)為灰度值6～10，陰性判定標(biāo)準(zhǔn)為灰度值≤5。

1.3 觀察指標(biāo) 比較各組IgG、IgA、IgM 及其補(bǔ)體C3、C4測(cè)定值，并比較ENA檢測(cè)、ds-DNA抗體檢測(cè)與ANAS檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以“±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組檢測(cè)指標(biāo)比較 活動(dòng)組IgA、IgG、IgM 均高于乙組，C3、C4 均低于乙組（P＜0.05）；非活動(dòng)組C3低于乙組，IgA、IgG高于乙組（P＜0.05），IgM、C4與乙組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 各組檢測(cè)指標(biāo)比較（±s，mg/L）

表1 各組檢測(cè)指標(biāo)比較（±s，mg/L）

注：IgG，免疫球蛋白-G；IgA，免疫球蛋白-A；IgM，免疫球蛋白-M；C3，β1C-球蛋白；C4，β1E-球蛋白。與乙組比較，aP＜0.05

組別活動(dòng)組（n=54）非活動(dòng)組（n=74）乙組（n=120）F值P值IgA 3.93±0.52a 2.15±0.58a 1.21±0.16 56.639＜0.05 IgG 22.15±3.63a 19.63±2.96a 11.62±1.58 128.963＜0.05 IgM 2.56±0.88a 1.28±0.63 1.25±0.16 225.632＜0.05 C3 0.43±0.12a 0.95±0.16a 1.15±0.63 196.357＜0.05 C4 0.11±0.02a 0.29±0.06 0.30±0.05 296.357＜0.05

2.2 甲組、乙組陽(yáng)性測(cè)定結(jié)果比較 甲組ENA、ds-DNA 抗體與ANAS 各項(xiàng)測(cè)定指標(biāo)的陽(yáng)性率均高于乙組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 甲組、乙組陽(yáng)性測(cè)定結(jié)果比較[n（%）]

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡屬于自身免疫系統(tǒng)疾病之一，其病變會(huì)累及多器官與組織，同時(shí)，患者體內(nèi)會(huì)出現(xiàn)各種針對(duì)正常細(xì)胞的自身抗體[4-5]，且抗體含量大，親和力強(qiáng)，若不及時(shí)采取有效治療措施，會(huì)進(jìn)一步加重病情[6-7]。該病的免疫學(xué)異常主要表現(xiàn)為血清中出現(xiàn)以ANA為代表的各種自身抗體譜，細(xì)胞核成分為ANA 的靶抗原，包括抗核仁抗體、抗非組蛋白抗體、抗組蛋白抗體及抗DNA抗體[8]。本研究結(jié)果顯示，活動(dòng)組IgA、IgG、IgM 均高于乙組，C3、C4均低于乙組（P＜0.05）；非活動(dòng)組IgA、IgG、C3 均低于乙組（P＜0.05），IgM、C4 與乙組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。甲組ENA、ds-DNA 抗體與ANAS 各項(xiàng)測(cè)定指標(biāo)的陽(yáng)性率均高于乙組（P＜0.05），提示補(bǔ)體系統(tǒng)被激活后，補(bǔ)體成分被消耗，免疫球蛋白水平及其補(bǔ)體與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的活動(dòng)程度存在一定相關(guān)性。與其他補(bǔ)體成分相比，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的C4補(bǔ)體水平降低時(shí)間更早，回升更晚，可在預(yù)后、療效與病情診斷中發(fā)揮一定作用?，F(xiàn)階段，Sm 抗體、抗ds-DNA 是臨床公認(rèn)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡標(biāo)志性抗體，其中抗ds-DNA 陽(yáng)性率為60%～90%，滴度與活動(dòng)性呈正向相關(guān)，當(dāng)其持續(xù)升高時(shí)，提示腎臟嚴(yán)重受損[9-10]。其次，u1RNP、Sm 均具有較高特異度，且不受臨床治療、病情活動(dòng)等因素影響，但其陽(yáng)性率相對(duì)較低。本研究中，ulRNP、Sm 均陽(yáng)性率為18.75%，與普遍研究相似。SS-B、SS-A陽(yáng)性者和新生兒紅斑狼瘡、亞急性皮膚型紅斑狼瘡存在密切相關(guān)性，所以對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)利于疾病預(yù)后判斷與分型。間接免疫熒光法是臨床用來(lái)測(cè)定ANAS 的經(jīng)典方式，從理論上來(lái)說(shuō)，抗ds-DNA抗體或ENA為陽(yáng)性時(shí)，ANAS也為陽(yáng)性。但從臨床實(shí)踐來(lái)看，部分患者ANAS仍漏檢。

綜上所述，系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中免疫學(xué)檢驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值較高，可輔助判斷患者病情嚴(yán)重程度與預(yù)后情況。