王 哲 韓前河 程傳宇 鄭州人民醫(yī)院泌尿外科，河南省鄭州市 450000

腎細胞癌(Renal cell carcinoma, RCC)是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，而腎透明細胞癌(Clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)是其最常見的病理類型，占腎癌的70%～80%[1]。目前早期RCC的首選治療方式為外科手術(shù)治療，而晚期則以化療或分子靶向治療為主，但療效均不夠理想，總體生存率較低[2]。因此，篩選特異性高的RCC生物學(xué)腫瘤標記物，可為臨床治療提供有力幫助，同時對于提高患者預(yù)后生存也具有重要意義。近年來，miR-150的表達失調(diào)已被證實與多種惡性腫瘤密切相關(guān)[3]。目前，關(guān)于miR-150在RCC中的臨床意義還有待進一步確認。本研究擬通過實時熒光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)檢測ccRCC組織中miR-150的表達水平，探討其在ccRCC中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016年8月—2018年8月在我院泌尿外科行腎臟切除術(shù)的68例ccRCC患者的ccRCC組織及其配對的癌旁組織(距離RCC組織邊緣≥1cm)。納入標準：(1)病理診斷為原發(fā)性ccRCC；(2)均行手術(shù)治療，術(shù)前未接受過放化療及靶向治療等；(3)臨床資料完整。排除標準：(1)有其他惡性腫瘤史；(2)有自身免疫性疾病史。68例ccRCC患者中，男53例，女15例；年齡42～76歲，平均年齡(61.38±8.18)歲；腫瘤位于左腎35例，右腎33例；TNM分期Ⅰ期36例，Ⅱ期18例，Ⅲ期10例，Ⅳ期4例；Fuhrman分級Ⅰ級16例，Ⅱ級22例，Ⅲ級20例，Ⅳ級10例。所有患者對本研究知情同意，本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理會審批通過。所有患者隨訪截至2021年8月。

1.2 RT-qPCR 術(shù)中組織標本離體后，迅速置于液氮中凍存。檢測時取適量液氮中凍存的組織標本研磨成粉末，而后加入1ml Trizol試劑進行勻漿。采用酚—氯仿法提取組織總RNA。采用分光光度計測定總RNA的濃度和純度，總RNA的純度在1.8～2.0之間可用于后續(xù)實驗。參照TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit試劑盒說明書步驟進行操作，將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，置于-20℃條件下備用。以cDNA為模板，參照TaqMan MicroRNA Assay試劑盒(ABI，美國)說明書進行操作，在ABI Prism 7500型熒光定量PCR儀上進行RT-qPCR，檢測miR-150的表達水平。以U6 snRNA為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt方法計算miR-150的相對表達水平。

2 結(jié)果

2.1 miR-150在ccRCC組織中的表達 RT-qPCR檢測ccRCC組織中miR-150的相對表達量為2.07±0.34，明顯高于癌旁組織中的1.05±0.13，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 miR-150在ccRCC組織中的相對表達水平

2.2 ccRCC組織中miR-150的表達與臨床病理特征的相關(guān)性 以ccRCC組織中miR-150相對表達量的均值(2.10)為界限，將ccRCC患者分為高表達組(n=38)和低表達組(n=30)。比較兩組患者臨床病理特征的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組間的性別、年齡及腫瘤部位無統(tǒng)計學(xué)差異，但高表達組中腫瘤大小≥7cm、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、Fuhrman分級為Ⅲ～Ⅳ級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的患者比例顯著高于低表達組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同miR-150表達組中患者臨床病理特征比較[n(%)]

2.3 ccRCC組織中miR-150表達與患者預(yù)后關(guān)系 Kaplam-Meier生存分析結(jié)果如圖2所示。高表達組患者的無進展生存期和總生存期均明顯低于低表達組，經(jīng)Log-rank檢驗發(fā)現(xiàn)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.057，P=0.008；χ2=11.539，P=0.001)。

圖2 ccRCC患者的Kaplan-Meier生存曲線

2.4 影響ccRCC患者預(yù)后的Cox回歸分析 采用單因素及多因素Cox回歸分析影響患者無進展生存和總生存的預(yù)后因素，結(jié)果顯示腫瘤大小、TNM分期、Fuhrman分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及miR-150的表達均為ccRCC患者無進展生存和總生存期的影響因素；多因素Cox回歸分析進一步發(fā)現(xiàn)，TNM分期是影響ccRCC患者無進展生存期的獨立預(yù)后因素，TNM分期及miR-150是影響ccRCC患者總生存期的獨立預(yù)后因素。見表2和表3。

表2 影響患者無進展生存期的單因素和多因素Cox回歸分析

表3 影響患者總生存期的單因素和多因素Cox回歸分析

3 討論

目前，關(guān)于miR-150在多種腫瘤中的表達及臨床意義已得到廣泛研究，但關(guān)于其功能的結(jié)論尚未達成一致。如miR-150在非小細胞肺癌中高表達，作為促癌基因參與非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后[4]。在宮頸癌中，miR-150也呈現(xiàn)高表達并作為促癌基因調(diào)控宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展[5]。但miR-150在結(jié)直腸癌中表達下調(diào)，與患者臨床病理特征有一定相關(guān)性，在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起抑癌作用[6]。同時，miR-150在甲狀腺乳頭狀癌組織中也呈低表達，作為抑癌基因在甲狀腺乳溝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用[7]。因此，miR-150在不同腫瘤中的臨床意義及其促癌或抑癌作用不同，還有待進一步闡明。

目前，國內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于miR-150在RCC中的表達意義的相關(guān)研究。在國外研究中，Chanudet E等[8]進行了大規(guī)模的全基因組篩查發(fā)現(xiàn)miR-150在ccRCC患者血漿中高表達，與RCC患者的預(yù)后有關(guān)；Lokeshwar SD等[9]采用qPCR分析同樣發(fā)現(xiàn)miR-150和miR-155等6個miRNA的表達在RCC組織中顯著上調(diào)，并可能與RCC亞型和臨床結(jié)局有關(guān)。在本文中，采用RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)miR-150在ccRCC組織中的表達顯著高于癌旁組織，且可能與ccRCC的腫瘤大小、TNM分期、Fuhrman分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有關(guān)。同時Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，miR-150高表達組患者的無進展生存期和總生存期較低表達組更差。為進一步分析miR-150在ccRCC患者預(yù)后中的作用，采用單因素和多因素Cox回歸分析對患者的無進展生存和總生存預(yù)后進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腫瘤大小、TNM分期、Fuhrman分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及miR-150是影響ccRCC患者無進展生存和總生存的預(yù)后因素，同時TNM分期是影響ccRCC患者無進展生存和總生存的獨立預(yù)后因素。而miR-150可作為獨立預(yù)后因子預(yù)測ccRCC患者的術(shù)后總生存期，但不能夠用于獨立預(yù)測ccRCC患者的術(shù)后無進展生存情況，這可能是因為miR-150的作用機制尚未完全明確、其作用受其他因素的影響，也可能與本研究樣本量較小有關(guān)。

綜上所述，本研究認為miR-150在ccRCC中呈高表達，與患者的臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)，在ccRCC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮促癌基因的作，有望成為ccRCC患者診斷及預(yù)后評估的新型標志物及分子治療的靶點。