匡婧靖，賀艷娟，胡 群，顧 婷，吳珍芳，蔡更元，洪林君

(華南農(nóng)業(yè)大學動物科學學院 國家生豬種業(yè)工程技術研究中心，廣州 510642)

豬妊娠期胚胎死亡率高達30%～50%，其中大部分的妊娠失敗發(fā)生在胚胎附植期[1-2]，因此豬妊娠早期的胚胎附植是影響母豬產(chǎn)仔數(shù)提高的關鍵環(huán)節(jié)。在胚胎附植期，當母胎之間的信息分子交流不足時，則可能導致妊娠失敗[3]。豬胚胎附植期很長，直到妊娠第15天胚胎才開始與母體子宮內(nèi)膜相粘附，在此之前胚胎游離于子宮腔液中，因此，此時期胚胎與母體子宮間的物質交流和信息傳遞主要依賴于子宮腔液中的物質[4-5]，其中包括外泌體[6-8]。

外泌體(exosomes)是細胞向胞外釋放的一種直徑為30～150 nm，電鏡下觀察到形狀為杯口狀的微型囊泡[9]。它可以選擇性裝載蛋白質、脂質、核酸等活性物質，并將攜帶的物質輸送到靶細胞內(nèi)，從而調控靶細胞的生物學功能[10-14]。研究發(fā)現(xiàn)，哺乳動物子宮腔液中富含的外泌體對胚胎附植發(fā)揮重要作用，外泌體中所含的蛋白質等活性分子可作為母胎“對話”的信號分子調控胚胎附植[8,15-17]。Kusama等[18]發(fā)現(xiàn)，牛的子宮腔液外泌體中存在妊娠識別因子IFNT等蛋白調控子宮內(nèi)膜細胞的凋亡和黏附等過程；Greening等[14]發(fā)現(xiàn)，人子宮內(nèi)膜在妊娠期受到激素影響會釋放外泌體，外泌體會被滋養(yǎng)層細胞內(nèi)化并增強其黏附能力。

基質金屬蛋白酶組織抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)是基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的天然抑制物，蛋白TIMP2(tissue inhibitor of metalloproteinases-2，TIMP2)屬于TIMPs中的一種，主要通過影響金屬蛋白酶MMPs的活性來調控細胞外基質組織重構、器官發(fā)生發(fā)育、血管形成、細胞遷移、細胞增殖以及細胞凋亡等生理過程[19-21]。豬胚胎附植過程中，胚胎形態(tài)發(fā)生劇烈變化，從妊娠第9天的球狀胚胎(直徑2～6 mm)迅速變成妊娠第12天的線狀胚胎(長度大于100 mm)，這一過程的發(fā)生主要依賴胚胎細胞的增殖、遷移以及胞外基質組織重構[22]。最近研究發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜來源的外泌體中存在多種基質金屬蛋白酶，且可能會通過外泌體轉移至胚胎細胞促進胚胎附植[14,23]?；|金屬蛋白酶的活性受基質金屬蛋白酶組織抑制物的調控，前期研究發(fā)現(xiàn)，基質金屬蛋白酶組織抑制物TIMP2在豬胚胎附植期子宮腔液外泌體中表達，因此推測，子宮腔液外泌體來源的TIMP2蛋白對豬胚胎附植發(fā)揮調控作用。

本試驗將研究TIMP2蛋白在豬胚胎附植期子宮腔液外泌體中的表達規(guī)律，并通過體外細胞試驗研究外泌體來源TIMP2蛋白對胚胎滋養(yǎng)層細胞增殖和遷移能力的影響，以期闡明豬子宮腔液外泌體來源的TIMP2蛋白對胚胎附植的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

豬滋養(yǎng)層細胞系(porcine trophoblast PTr2)。胎牛血清，DMEM/F12培養(yǎng)基，胰蛋白酶(美國，Gibco)；Lipofectamine 3000 Transfection Reagent，Lipofectamine RNAimax Transfection Reagent，PowerUp SYBR Green Master Mix(美國，Thermo Fisher)；TRIzol，BCA蛋白定量試劑盒(美國，Invitrogen)；重組人胰島素(Insulin human recombinant)，Cell Counting Kit(CCK-8)(中國，翊圣)；BeyoClick EdU-555細胞增殖檢測試劑盒(中國，碧云天)；PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)(日本，TaKaRa)；PVDF膜(美國，Millipore)；β-actin抗體(英國，Abcam)，TIMP2抗體(美國，bio-techne)；TIMP2超表達重組質粒(pcDNA-TIMP2)及對照質粒(pcDNA3.1)，TIMP2小干擾(si-TIMP2)及干擾對照(si-NC)(中國，吉瑪)。

1.2 豬子宮腔液和子宮組織的采集

挑選年齡和遺傳背景相似的健康大白母豬。通過對母豬進行同期發(fā)情處理，觀察到發(fā)情并在當天進行輸精，記為第0天，輸精后1 d記為妊娠第1天，以此類推。取妊娠第9天(n=3)和第12天(n=3)的豬子宮，用PBS沖洗子宮并收集子宮腔液。在子宮內(nèi)側縱向打開收集對應子宮的子宮內(nèi)膜組織。將采集到的子宮腔液和子宮內(nèi)膜組織保存在-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 豬子宮腔液外泌體的分離與鑒定

在4 ℃條件下，豬子宮腔液依次進行2 000×g離心20 min，10 000×g離心30 min，然后取上清液，再用超速冷凍離心機(美國 BECKMAN，Optima XPN-100)，在100 000×g條件下離心2 h后棄上清，用適量PBS重懸沉淀。采用透射電鏡(TEM)分析外泌體形態(tài)結構，將重懸后的PBS滴加到碳膜網(wǎng)格上2 min，用濾紙從網(wǎng)格的一端吸除多余的PBS，將網(wǎng)格板烘干后鈾染2 min，用濾紙吸除多余液體，室溫靜置過夜，再用透射電子顯微鏡系統(tǒng)分析拍照。使用納米粒徑分析儀對懸浮于PBS中的囊泡進行納米顆粒粒徑分析。使用Western blot檢測外泌體的標志蛋白CD9和CD63，方法同“1.8”。

1.4 細胞培養(yǎng)

采用含10%胎牛血清，1%雙抗和0.5%胰島素的DMEM/F12基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)PTr2，細胞置于5% CO2，37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，當細胞生長鋪滿培養(yǎng)皿80%時，用0.25%胰蛋白酶消化并按照1∶3比例傳代。

1.5 外泌體與PTr2細胞共培養(yǎng)

采用妊娠第12天的外泌體對PTr2細胞進行共培養(yǎng)，分為對照(PTr2+PBS)組和外泌體共培養(yǎng)(PTr2+P12-exo)組。首先檢測得到外泌體樣品總蛋白濃度，再將對數(shù)生長期的PTr2細胞接種于6孔板中，過夜培養(yǎng)至細胞匯合度達到60%～70%時，將已知濃度的外泌體加入外泌體共培養(yǎng)(PTr2+P12-exo)組，達到培養(yǎng)基中外泌體濃度為50 μg·mL-1，再將等量的PBS加入對照(PTr2+PBS)組。細胞放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集細胞并提取蛋白及RNA用于后續(xù)試驗。

1.6 PTr2細胞轉染

TIMP2蛋白對PTr2細胞增殖和遷移能力影響試驗分為空載體對照(pcDNA)組(轉染pcDNA3.1質粒)和TIMP2超表達(pcDNA-TIMP2)組(轉染pcDNA-TIMP2質粒)；干擾對照(si-NC)組(轉染si-NC)和TIMP2干擾(si-TIMP2)組(轉染si-TIMP2)。將對數(shù)生長期的PTr2細胞接種于6孔板中，過夜培養(yǎng)至細胞匯合度達到60%～70%時，用Lipofectamine 3000 Transfection Reagent根據(jù)試驗分組將pcDNA 3.1空載體質粒和pcDNA-TIMP2質粒轉染到細胞中；再用Lipofectamine RNAimax Transfection Reagent根據(jù)試驗分組將si-NC和si-TIMP2轉染進細胞中，放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，進行后續(xù)試驗。

1.7 實時定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)檢測TIMP2 mRNA的表達

利用 TRIzol提取轉染24 h后PTr2細胞中的RNA，紫外分光光度計測定RNA濃度后用反轉錄試劑盒PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)逆轉錄成cDNA，再配制成qPCR反應體系：上、下游引物(10 μmol·L-1)各0.2 μL，cDNA 300 ng，PowerUp SYBR Green Master Mix 5 μL，RNAase free ddH2O補至10 μL。所用引物序列見表1。在熒光定量PCR儀(美國，Life)上測定TIMP2 mRNA的相對表達水平，以β-actin作為內(nèi)參，按照2-ΔΔCt公式計算結果。

表1 各基因qPCR引物序列

1.8 Western blot(WB)檢測TIMP2蛋白水平

將轉染48 h的PTr2細胞和與外泌體共培養(yǎng)的PTr2細胞加入RIPA裂解液裂解細胞，外泌體則用超聲波裂解。將裂解液離心取上清液，采用BCA法測定蛋白濃度。之后用SDS-PAGE電泳儀(美國，Biorad)電泳分離蛋白，將蛋白轉移到PVDF膜上，加入5%脫脂牛奶，常溫下?lián)u床封閉2.5 h，TBST洗滌后加入TIMP2抗體(CCL2119021 1∶1 000)和β-actin抗體(ab8226 1∶1 000)4 ℃孵育過夜，再用TBST洗滌，之后用相應的二抗孵育2 h。利用化學發(fā)光液對目的蛋白條帶進行顯色并采用Image J軟件分析蛋白條帶灰度值。

1.9 CCK-8法檢測細胞活性

將PTr2細胞接種于96孔板中，參照“1.6”PTr2細胞轉染方法進行空載體對照(pcDNA)組、TIMP2超表達(pcDNA-TIMP2)組、干擾對照(si-NC)組和TIMP2干擾(si-TIMP2)組轉染，分別在轉染后24、48 h加入CCK-8試劑，37 ℃ 5% CO2條件下孵育2 h后在酶標儀上測定450 nm處的吸光值。試驗重復3次。

1.10 EdU試驗檢測PTr2細胞的增殖

根據(jù)制造商說明書，使用BeyoClick EdU-555細胞增殖檢測試劑盒(中國，碧云天)分析細胞增殖情況。將細胞懸液接種于24孔板，參照“1.6”PTr2細胞轉染方法進行空載體對照(pcDNA)組、TIMP2超表達(pcDNA-TIMP2)組、干擾對照(si-NC)組和TIMP2干擾(si-TIMP2)組轉染，轉染48 h后，保留原有的500 μL培養(yǎng)基，再加入EdU試劑進行孵育(具體步驟參考制造商說明書)，最后進行熒光拍照，參考對照組比較EdU陽性細胞比例。

1.11 劃痕試驗檢測PTr2細胞的遷移能力

參照“1.6”PTr2細胞轉染，進行空載體對照組(pcDNA)、TIMP2超表達組(pcDNA-TIMP2)、干擾對照組(si-NC)和TIMP2干擾組(si-TIMP2)轉染。在細胞轉染48 h后，用牙簽在細胞板上垂直劃出線狀劃痕，并將細胞培養(yǎng)基換為無血清的DMEM/F12基礎培養(yǎng)基。在0、12 和24 h觀察細胞遷移和劃痕愈合情況并拍攝照片。選取3個隨機視野利用Image J軟件計算愈合面積獲得細胞遷移率。

1.12 子宮內(nèi)膜免疫組織化學染色

子宮內(nèi)膜免疫組織化學染色步驟：1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；2)在3%過氧化氫溶液中浸泡30 min；3)PBS中洗滌3次，每次5 min；4)在修復液中微波修復3次，室溫下自然冷卻；5)同步驟3；6)滴加5% BSA，37 ℃孵育20 min；6)滴加一抗(稀釋比例為1∶100)，濕盒中4 ℃孵育過夜，同時添加一組陰性對照(PBS替代一抗)；7)同步驟3；8)滴加二抗，37 ℃孵育25 min；9)同步驟3；10)滴加SABC，37 ℃孵育25 min；11)同步驟3；12)滴加DAB顯色試劑；13)蘇木素染液復染5～10 s，自來水沖洗，烘干，封片，顯微鏡拍照系統(tǒng)(日本 尼康)拍照。

1.13 統(tǒng)計學方法

qRT-PCR、WB等結果以“平均值±標準差(Mean ± SD)”表示，用GraphPad Prism 8.0軟件分析數(shù)據(jù)并作圖，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結 果

2.1 子宮腔液外泌體的分離與鑒定

將超速離心所得妊娠第9天(P9)和第12天(P12)的豬子宮腔液外泌體進行透射電鏡觀察，呈典型杯狀，囊泡外周有膜性結構(圖1A)。根據(jù)納米粒徑分析結果，提取的外泌體粒徑主要分布在30～150 nm之間(圖1B)。WB結果顯示，妊娠第9和第12天外泌體均存在特異性標記蛋白CD9和CD63(圖1C)。

A.妊娠第9(P9)和第12天(P12)的豬子宮腔液外泌體透射電鏡圖，標尺=100 nm；B.妊娠第9(P9)和第12天(P12)的豬子宮腔液外泌體粒徑大小分布圖；C.WB檢測妊娠第9(P9)和第12天(P12)的豬子宮腔液外泌體標志蛋白CD9和CD63

2.2 子宮腔液外泌體來源的TIMP2蛋白能靶向進入胚胎滋養(yǎng)層細胞

通過WB試驗發(fā)現(xiàn)，妊娠第12天的豬子宮腔液外泌體中TIMP2蛋白含量顯著高于妊娠第9天(P<0.05)(圖2A，B)。為了研究子宮腔液外泌體來源的TIMP2蛋白是否能夠進入胚胎滋養(yǎng)層細胞，用妊娠第12天子宮腔液外泌體孵育PTr2細胞，通過WB試驗發(fā)現(xiàn)，外泌體孵育24 h后，PTr2細胞中TIMP2蛋白極顯著增加(P<0.01)(圖2C，D)。為了進一步明確經(jīng)外泌體孵育后PTr2細胞中增加的TIMP2蛋白是由外泌體轉移進細胞的還是細胞自身轉錄翻譯的，通過qPCR檢測了經(jīng)外泌體孵育后PTr2細胞中的TIMP2 mRNA表達水平，結果發(fā)現(xiàn)TIMP2 mRNA相對表達量在外泌體孵育組(PTr2+P12-exo)和對照組(PTr2+PBS)中無顯著差異(P>0.05)(圖2E)。

A、B.WB檢測妊娠第12天(P12)的豬子宮腔液外泌體中TIMP2蛋白的表達量顯著高于妊娠第9天(P9)；C、D.WB檢測妊娠第12天外泌體孵育PTr2細胞(PTr2+P12-exo)相比對照組(PTr2+PBS)中TIMP2蛋白的相對表達水平極顯著升高；E.qRT-PCR技術檢測妊娠第12天外泌體處理PTr2細胞(PTr2+P12-exo)和對照組(PTr2+PBS)中TIMP2 mRNA的相對表達量。ns.P>0.05，*.P<0.05，**.P<0.01，***.P<0.001，下同

2.3 TIMP2蛋白在妊娠早期的豬子宮內(nèi)膜中的表達定位

為了探究子宮腔液外泌體中TIMP2蛋白的來源，在大白豬妊娠第9(P9)和第12天(P12)的子宮內(nèi)膜中開展了免疫組化試驗，結果顯示TIMP2蛋白在大白豬妊娠第9和第12天的子宮內(nèi)膜中均存在，包括子宮內(nèi)膜上皮(endometrial luminal epithelium LE)、腺體(glandular epithelium GE)和基質(endometrial stroma)等(圖3A)。同時該蛋白在妊娠第12天的胚胎(trophoblast Tr)中也大量存在(圖3A)。進一步對TIMP2蛋白的表達量進行光密度檢測，結果發(fā)現(xiàn)相比妊娠第9天，妊娠第12天的子宮內(nèi)膜中TIMP2蛋白的含量極顯著升高(P<0.01)(圖3B)。

A.免疫組化顯示TIMP2蛋白在妊娠第9(P9)和第12天(P12)的子宮內(nèi)膜中均存在，如子宮內(nèi)膜上皮(LE)中，腺體(GE)等，同時該蛋白在妊娠第12天(P12)的胚胎(Tr)中也大量存在；B.TIMP2蛋白在兩個時期子宮內(nèi)膜上的光密度檢測

2.4 TIMP2超表達對PTr2細胞增殖和遷移能力的影響

采用qRT-PCR法對TIMP2的超表達效率進行分析，與空載體對照(pcDNA)組相比，TIMP2超表達(pcDNA-TIMP2)組的PTr2細胞中TIMP2的mRNA相對表達水平極顯著升高(P<0.001)(圖4A)。WB結果顯示，與空載體對照組相比，TIMP2超表達組的PTr2細胞中TIMP2蛋白相對表達水平顯著升高(P<0.05)(圖4B，C)。CCK-8細胞活性檢測發(fā)現(xiàn)，TIMP2超表達組細胞增殖能力極顯著降低(P<0.01，圖4D)，EdU試驗結果也顯示，TIMP2超表達組細胞增殖能力極顯著降低(P<0.01，圖4E，F(xiàn))，與CCK-8試驗結果相一致。通過劃痕試驗發(fā)現(xiàn)，與空載體對照組相比，TIMP2超表達組的PTr2細胞的遷移能力顯著降低(P<0.05，圖4G，H)。

A.超表達后TIMP2 mRNA表達水平；B、C.超表達后TIMP2蛋白表達水平；D、E、F.超表達后PTr2細胞的增殖能力極顯著下降；G、H.超表達后PTr2細胞的遷移能力顯著下降

2.5 干擾TIMP2對PTr2細胞增殖和遷移能力的影響

采用qRT-PCR法對TIMP2的干擾效率進行分析，與干擾對照(si-NC)組相比，TIMP2干擾(si-TIMP2)組的PTr2細胞中TIMP2的mRNA相對表達水平極顯著下降(P<0.001)(圖5A)。WB結果顯示，與對照組相比，干擾組PTr2細胞中TIMP2蛋白相對表達水平極顯著降低(P<0.001)(圖5B，C)。CCK-8細胞活性檢測發(fā)現(xiàn)，干擾組細胞增殖能力極顯著增強(P<0.01，圖5D)，EdU試驗結果也顯示，干擾組細胞增殖能力極顯著增強(P<0.01，圖5E，F(xiàn))，與CCK-8試驗結果相一致。通過劃痕試驗發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，干擾組PTr2細胞的遷移能力顯著增強(P<0.05，圖5G，H)。

A.干擾后TIMP2 mRNA表達水平；B、C.干擾后TIMP2蛋白表達水平；D、E、F.干擾后PTr2細胞的增殖能力極顯著提高；G、H.干擾后PTr2細胞的遷移能力顯著提高

3 討 論

近年來，越來越多的研究表明子宮腔液外泌體能攜帶母體子宮來源的RNA、蛋白等相關活性分子靶向運輸?shù)脚咛ゼ毎瑢ε咛グl(fā)育及胚胎附植發(fā)揮重要調控作用[6,10,14,18,23-24]。但在豬中，目前還未發(fā)現(xiàn)有子宮腔液外泌體蛋白功能相關的研究。本試驗通過分離鑒定豬胚胎附植期子宮腔液外泌體，研究了外泌體蛋白TIMP2的來源及其對胚胎滋養(yǎng)層細胞的功能。

通過超速離心法成功從子宮腔液分離到外泌體，經(jīng)電鏡試驗、粒徑分析以及標志蛋白檢測鑒定了外泌體的質量和純度都符合要求，并與前人的研究結果相吻合[25-26]。通過WB試驗，發(fā)現(xiàn)妊娠第12天子宮腔液外泌體中TIMP2蛋白的含量顯著高于妊娠第9天。妊娠第12天是豬胚胎附植的“窗口期”，此時胚胎開始分泌妊娠識別信號分子——雌激素，在雌激素作用下子宮內(nèi)膜進入“容受態(tài)”，其血管增多，分泌能力增強，從而為胚胎的附植做好準備[3,27]。妊娠第12天子宮腔液外泌體中TIMP2蛋白含量顯著高于妊娠第9天，可能與妊娠第12天子宮內(nèi)膜的分泌能力增強有關。另外，免疫組化試驗結果顯示，TIMP2蛋白在妊娠第12天子宮內(nèi)膜中的表達量顯著高于妊娠第9天，說明子宮腔液外泌體來源的TIMP2蛋白可能是由子宮內(nèi)膜所分泌。近期有研究也表明，小鼠胚胎附植期子宮腔液外泌體來源于子宮內(nèi)膜，且主要由子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮所分泌[28]。

為了進一步研究子宮腔液外泌體來源的TIMP2蛋白能夠通過外泌體靶向運輸?shù)脚咛プ甜B(yǎng)層細胞內(nèi)發(fā)揮功能，用妊娠第12天子宮腔液外泌體孵育胚胎滋養(yǎng)層細胞后提取滋養(yǎng)層細胞的蛋白和RNA，分別檢測TIMP2蛋白及TIMP2 mRNA在外泌體孵育前后的表達量變化，結果發(fā)現(xiàn)，TIMP2蛋白在外泌體孵育滋養(yǎng)層細胞后顯著升高，而TIMP2 mRNA表達量卻未發(fā)生顯著變化，因此，推測滋養(yǎng)層細胞中顯著升高的TIMP2蛋白可能是由外泌體攜帶進入細胞的，而不是由細胞本身轉錄翻譯而來。TIMP2蛋白是金屬蛋白酶抑制劑，已有研究表明，TIMP2蛋白對哺乳動物胚胎附植及妊娠維持發(fā)揮重要調控作用，它能通過抑制基質金屬蛋白酶MMPs的活性來阻止層聯(lián)蛋白和膠原蛋白的降解，從而改變子宮內(nèi)膜細胞以及胚胎滋養(yǎng)層細胞的增殖、遷移和侵襲的能力[29-32]。此外，TIMP2蛋白還能調控子宮內(nèi)膜的容受性[14]，并與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關[33]。為了研究外泌體來源的TIMP2蛋白進入胚胎滋養(yǎng)層細胞后所發(fā)揮的功能，通過在滋養(yǎng)層細胞中過表達和抑制表達TIMP2基因來分析其對滋養(yǎng)層細胞增殖和遷移能力的影響。CCK-8檢測、EdU試驗以及細胞劃痕試驗均表明，TIMP2蛋白能抑制胚胎滋養(yǎng)層細胞的增殖和遷移。這與前人研究發(fā)現(xiàn)的TIMP2能通過抑制金屬蛋白酶MMPs的活性來抑制細胞的增殖和遷移相一致[34]，以上結果表明，在豬胚胎滋養(yǎng)層細胞中TIMP2蛋白可能也是通過抑制金屬蛋白酶的活性來抑制胚胎滋養(yǎng)層細胞增殖和遷移的。妊娠第12天豬胚胎已從球狀變成了絲狀，胚胎滋養(yǎng)層細胞即將與子宮內(nèi)膜腔上皮細胞相粘附并完成胚胎附植[35]，子宮腔液外泌體來源的TIMP2蛋白進入胚胎細胞并抑制胚胎滋養(yǎng)層細胞的增殖和遷移，可能起到避免胚胎形態(tài)進一步發(fā)生巨變的作用，使胚胎處于一種相對穩(wěn)定的狀態(tài)，為接下來與母體子宮內(nèi)膜相粘附并完成附植做好準備。后續(xù)將針對TIMP2蛋白調控胚胎滋養(yǎng)層細胞增殖和遷移的分子機制進行深入研究，并可以小鼠為模型，利用子宮角注射試驗，驗證TIMP2蛋白對小鼠胚胎附植率的影響。

4 結 論

本研究結果表明，子宮腔液外泌體來源的TIMP2蛋白可能由母體子宮所分泌，并能通過外泌體靶向進入胚胎滋養(yǎng)層細胞調控細胞的增殖和遷移，進而對豬胚胎附植發(fā)揮調控作用。