黨國棟，洪新宇，蔡美琴#

1.上海交通大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，上海 200025；2.上海市疾病預(yù)防控制中心，上海 200051

當(dāng)前人口老齡化趨勢日益突出，延緩衰老研究已成為生物醫(yī)學(xué)研究的重要組成部分。衰老過程的特征是機(jī)體功能完整性的漸進(jìn)喪失，伴隨著代謝功能障礙、DNA 不穩(wěn)定、慢性炎癥、機(jī)體損傷等生理變化［1］。煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+）是在營養(yǎng)攝入和細(xì)胞損傷等環(huán)境變化中控制細(xì)胞功能和存活的關(guān)鍵信號分子，NAD+水平隨年齡增長而逐漸下降，導(dǎo)致細(xì)胞和器官功能下降、代謝改變和疾病易感性增加［2］。延緩甚至逆轉(zhuǎn)NAD+水平下降趨勢，可改善肌肉功能、運(yùn)動能力和心臟功能等衰老相關(guān)生理代謝參數(shù)［3］。

煙酰胺單核苷酸（nicotinamide mononucleotide，NMN）作為NAD+的前體，是目前直接有效的NAD+補(bǔ)充物質(zhì)［4］。已有研究證實(shí)，NMN 可以改善衰老的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移受損［5］，促進(jìn)衰老間質(zhì)干細(xì)胞成骨增殖，減少脂肪生成［6］，提高衰老卵母細(xì)胞的受精能力，恢復(fù)線粒體功能，抑制活性氧誘導(dǎo)的衰老卵母細(xì)胞凋亡［7］，改善衰老引起的血管功能障礙［8］以及腎臟損傷［9］。同時(shí)NMN 能糾正炎癥誘導(dǎo)的胰島功能障礙［10］，改變糖尿病模型小鼠的脂質(zhì)譜［11］，改善脂代謝［12］，促進(jìn)肥胖人群中肌肉胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和重塑［13］。這些研究結(jié)果提示NMN對代謝功能障礙的潛在治療作用。然而關(guān)于NMN 對衰老動物的代謝影響，目前鮮有研究涉及。

本研究擬通過D-半乳糖（D-galactose，D-gal）衰老造模法，建立小鼠衰老模型，從能量代謝、糖耐量、胰島素敏感性、抗氧化應(yīng)激能力等方面探索NMN 對衰老小鼠代謝的影響并初步探討其可能的作用機(jī)制，為NMN的實(shí)際應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康3 月齡C57BL/6N 雄性小鼠，無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級，體質(zhì)量（27±2）g，購自浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。動物生產(chǎn)許可證號SCXK （浙） 2019-0001，使用許可證號SYXK（滬）2018-0031。動物飼養(yǎng)在上海市疾病預(yù)防控制中心屏障動物房內(nèi)，單籠常規(guī)飼料喂養(yǎng)，記錄飲食量和飲水量。動物照明模擬自然光照，12 h晝夜更替。本研究于2021年2月份通過上海市疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)動物倫理審查委員會的審查，所有研究操作均遵守《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物管理實(shí)施細(xì)則》的要求。

1.2 試劑和儀器

NMN（純度99.9%，健安喜公司，中國），D-gal（純度≥99.0%，Sigma公司，美國），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒（南京建成生物工程研究所，中國），BCA 蛋白定量試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所，中國），生物合成人胰島素注射液（Novo Nordisk公司，丹麥）；血糖儀、血糖試紙（OneTouch公司，美國），Denley Dragon Wellscan MK 3 酶標(biāo)儀（Thermo公司，美國），CLAMS 實(shí)驗(yàn)動物能量代謝監(jiān)測系統(tǒng)（Columbus公司，美國）。

1.3 衰老模型的建立、分組及干預(yù)措施

運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字表，將實(shí)驗(yàn)動物分為5組：對照組、早衰模型組、衰老模型組、NMN 干預(yù)Ⅰ組、NMN干預(yù)Ⅱ組。每組14 只小鼠。每組實(shí)驗(yàn)動物處理如下：①對照組。頸背部皮下注射生理鹽水150 mg/kg，灌胃給予300 mg/kg 蒸餾水，每日各1 次，持續(xù)6 周。②早衰模型組。頸背部皮下注射D-gal 150 mg/kg，灌胃給予300 mg/kg 蒸餾水，每日各1 次，持續(xù)6 周。③NMN 干預(yù)Ⅰ組。頸背部皮下注射D-gal 150 mg/kg，灌胃給予300 mg/kg的NMN，每日各1次，持續(xù)6周。④衰老模型組。頸背部皮下注射D-gal 150 mg/kg，灌胃給予300 mg/kg 蒸餾水，每日各1 次，持續(xù)12 周。⑤NMN 干預(yù)Ⅱ組。頸背部皮下注射D-gal 150 mg/kg，灌胃給予300 mg/kg 的NMN，每日各1 次，持續(xù)12 周。每日同一時(shí)間段記錄飲水量、攝食量，每周稱體質(zhì)量2 次，每周觀察和記錄小鼠皮毛狀態(tài)、行為表現(xiàn)等。

1.4 檢測方法

對照組、早衰模型組、干預(yù)Ⅰ組在造模6 周后，檢測臟器指數(shù)、能量代謝監(jiān)測指標(biāo)、糖耐量、胰島素敏感性以及抗氧化指標(biāo)。衰老模型組、干預(yù)Ⅱ組在造模12周后檢測上述指標(biāo)。

1.4.1 臟器指數(shù)檢測 取出小鼠胸腺、脾臟、肝臟、雙側(cè)腎臟，稱取臟器質(zhì)量，計(jì)算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)。各臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）。

1.4.2 能量代謝實(shí)驗(yàn) 采用代謝籠，使用CLAMS實(shí)驗(yàn)動物能量代謝綜合監(jiān)測系統(tǒng)進(jìn)行評估。小鼠適應(yīng)代謝籠12 h后，開始實(shí)驗(yàn)。記錄動物72 h內(nèi)氧氣消耗量（O2consumption，VO2）、二氧化碳呼出量（CO2exhalation，VCO2）；利用紅外光電池技術(shù)監(jiān)測動物的活動量（紅外光束每被打斷1 次，則計(jì)數(shù)動物活動1 次）。通過評估代謝過程中的氧氣-二氧化碳交換量來計(jì)算能量消耗（energy expenditure，EE），根據(jù)VO2和VCO2計(jì)算實(shí)驗(yàn)動物所用食物的能量含量，即呼吸商（respiratory exchange ratio，RER）。

1.4.3 葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn) 小鼠禁食14 h 后，腹腔內(nèi)注射10%葡萄糖（1 g/kg）。小鼠尾靜脈采血，分別于0、15、30、60、90 和120 min 測定小鼠血糖水平，并計(jì)算血糖曲線下面積（area under the curve，AUC）。

1.4.4 胰島素耐量實(shí)驗(yàn) 葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)束間隔1 d 后，對小鼠進(jìn)行胰島素耐量實(shí)驗(yàn)。小鼠禁食4 h后，注射生物合成人胰島素注射液（0.75 U/kg）。小鼠尾靜脈采血，分別在0、15、30、60、90 和120 min測定小鼠血糖水平，并計(jì)算血糖AUC。

1.4.5 血清及肝組織中抗氧化指標(biāo)檢測 各組小鼠于末次給予NMN 和生理鹽水，禁食12 h 后，眼眶取血，分離血清。之后脫頸椎法處死小鼠，迅速取出肝臟，制備10%的肝組織勻漿，2 327×g離心10 min，取上清液，置于-80 ℃下保存?zhèn)溆?。用酶?biāo)儀分別測定小鼠血清及肝組織勻漿超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px） 活 性 及 丙 二 醛（malondialdehyde，MDA）含量。測試步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定量數(shù)據(jù)以±s表示。選取單因素方差分析方法比較5 組之間體質(zhì)量、攝食量、能量代謝監(jiān)測指標(biāo)、臟器指數(shù)、抗氧化指標(biāo)的差異；選取兩變量多因素重復(fù)測量方差分析方法比較5 組之間的血糖水平的差異；組間兩兩比較用最小顯著性差異（least-significant difference，LSD） 法。P<0.05 表 示 差 異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NMN對衰老小鼠能量代謝的影響

2.1.1 NMN 對各組小鼠體質(zhì)量及攝食量的影響 實(shí)驗(yàn)第1 周（干預(yù)前）各組動物體質(zhì)量間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1），動物毛色油亮有光澤。造模第4周，早衰模型組和衰老模型組小鼠毛色無光澤，活動量減少；造模第6 周，2 個(gè)模型組小鼠毛色逐漸發(fā)黃，開始掉毛，行動遲緩；造模第12 周，衰老模型組小鼠夾雜白毛，神態(tài)萎靡。僅造模第3 周，干預(yù)Ⅰ組體質(zhì)量較對照組顯著增加（P=0.018），其他各組與對照組間體質(zhì)量間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）（表1）。各組小鼠整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間攝食量之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）（表2）。

表1 各組小鼠不同階段體質(zhì)量變化（g，±s）Tab 1 Body mass of mice at different stages in each group（g，±s）

表1 各組小鼠不同階段體質(zhì)量變化（g，±s）Tab 1 Body mass of mice at different stages in each group（g，±s）

Note: ①P=0.018,compared with the control group.

Group Control group Premature aging model group Intervention group ⅠAging model group Intervention group Ⅱ9th week 12th week-- --- -1st week 28.07±0.29 28.50±0.45 29.14±0.29 28.50±0.23 28.21±0.38 3rd week 28.50±0.39 28.64±0.37 29.71±0.30①29.21±0.33 29.07±0.35 6th week 28.64±0.40 28.57±0.51 29.79±0.39 29.26±0.38 29.07±0.40 31.93±0.46 31.29±0.41 30.79±0.30 30.29±0.30

表2 各組小鼠不同階段每日攝食量變化（g，±s）Tab 2 Food intake of mice at different stages in each group（g，±s）

表2 各組小鼠不同階段每日攝食量變化（g，±s）Tab 2 Food intake of mice at different stages in each group（g，±s）

Group Control group Premature aging model group Intervention group ⅠAging model group Intervention group Ⅱ9th week 12th week-- --- -1st week 4.94±0.14 4.99±0.18 5.31±0.16 5.50±0.11 5.46±0.16 3rd week 4.91±0.15 4.62±0.23 4.91±0.17 4.84±0.22 4.83±0.15 6th week 3.81±0.10 3.47±0.16 3.78±0.10 3.79±0.12 3.12±0.38 4.80±0.11 4.69±0.15 4.69±0.14 4.41±0.16

2.1.2 能量代謝實(shí)驗(yàn)結(jié)果 給藥結(jié)束后，將小鼠放進(jìn)代謝籠，按照要求在適應(yīng)期結(jié)束后開始連續(xù)觀察72 h。代謝籠實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。

各組之間白天VO2與VCO2水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，僅早衰模型組白天VO2水平較對照組降低（P=0.010）。與對照組相比，早衰模型組與衰老模型組夜晚VO2和VCO2水平均顯著下降（VO2：P=0.018，P=0.000。VCO2：P=0.044，P=0.003）；相比衰老模型組，干預(yù)Ⅱ組夜晚VO2和VCO2升高顯著（P=0.045，P=0.030）（圖1A、B）。

與對照組相比，衰老模型組和干預(yù)Ⅱ組白天和夜晚RER水平升高顯著（白天：P=0.000，P=0.002。夜晚：均P=0.000）；相比各模型組，干預(yù)組的RER 水平的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（圖1C）。

白天小鼠活動量，各組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。夜晚小鼠活動量，相比于對照組，早衰模型組、衰老模型組與干預(yù)Ⅱ組均顯著減少（均P=0.000）；與早衰模型組相比，干預(yù)Ⅰ組活動量顯著增大（P=0.022）；與衰老模型組相比，干預(yù)Ⅱ組活動量顯著增大（P=0.049）（圖1D）。

各組EE 檢測結(jié)果與活動量分析結(jié)果相符合。夜晚EE 水平，與對照組相比，早衰模型組和衰老模型組降低明顯（P=0.010，P=0.001）。與衰老模型組相比， 干預(yù)Ⅱ組EE 水平升高顯著（P=0.043）（圖1E）。

圖1 小鼠代謝籠實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig 1 Results of metabolic cage experiment in mice

2.2 NMN對衰老小鼠臟器指數(shù)的影響

小鼠臟器指數(shù)結(jié)果（表3）顯示，相比于對照組，早衰模型組胸腺指數(shù)和腎臟指數(shù)顯著降低（P=0.035，P=0.009），衰老模型組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)均顯著降低（P=0.000，P=0.012，P=0.000，P=0.002）。相比于衰老模型組，干預(yù)Ⅱ組的肝臟指數(shù)顯著提高（P=0.000）。

表3 各組小鼠臟器指數(shù)比較（±s）Tab 3 Comparison of the organ indexes in each group（±s）

表3 各組小鼠臟器指數(shù)比較（±s）Tab 3 Comparison of the organ indexes in each group（±s）

Note: ①P=0.035, ②P=0.000, ③P=0.012, ④P=0.006, ⑤P=0.009, ⑥P=0.002,compared with the control group; ⑦P=0.000,compared with the aging model group.

Kidney index 14.66±0.37 13.37±0.27⑤14.29±0.50 13.10±0.25⑥13.16±0.03⑥Group Control group Premature aging model group Intervention group ⅠAging model group Intervention group Ⅱn 8 8 8 8 8 Thymus index 2.17±0.07 1.89±0.12①2.04±0.12 1.44±0.08②1.36±0.05②Spleen index 2.20±0.11 2.14±0.11 2.03±0.09 1.81±0.11③1.81±0.10③Liver index 43.10±0.73 43.66±0.36 45.69±0.63④37.80±0.64②41.70±0.71⑦

2.3 NMN對衰老小鼠糖耐量的影響

葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖2A）表明，造模6 周時(shí)對照組、早衰模型組、干預(yù)Ⅰ組小鼠在不同時(shí)間點(diǎn)血糖水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在造模12 周時(shí)，相比于對照組，衰老模型組血糖水平明顯升高，干預(yù)Ⅱ組血糖水平相比衰老模型組有所降低，與對照組相比略有升高，3 組血糖水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。其中在60 min 時(shí)間點(diǎn)，衰老模型組血糖水平較對照組顯著升高（P=0.000），干預(yù)Ⅱ組相比衰老模型組顯著降低（P=0.020）。AUC 分析結(jié)果（圖2B）顯示，衰老模型組和干預(yù)Ⅱ組出現(xiàn)糖耐量受損（P=0.020，P=0.030），表明隨著造模時(shí)間的延長，衰老加劇，導(dǎo)致小鼠的糖耐量受損；干預(yù)Ⅱ組AUC 相比于衰老模型組減少了13%（P=0.030），表明糖耐量受損得到改善。

圖2 葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig 2 Results of glucose tolerance test

2.4 NMN對衰老小鼠胰島素敏感性的影響

胰島素耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖3A）表明，在比較相對于0 時(shí)間點(diǎn)血糖水平百分比的變化時(shí)，發(fā)現(xiàn)對照組、衰老模型組和干預(yù)Ⅱ組3 組之間血糖水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。其中在30 min 和120 min 時(shí)間點(diǎn)，衰老模型組血糖水平相比對照組明顯升高（均P=0.001），干預(yù)Ⅱ組相比衰老模型組顯著降低（P=0.046，P=0.025）。同時(shí)AUC 的分析結(jié)果（圖3B）也表明，D-gal 衰老造模導(dǎo)致早衰模型組、衰老模型組和干預(yù)Ⅱ組小鼠，胰島素敏感性降低（P=0.012，P=0.011，P=0.014）；干預(yù)Ⅱ組相比衰老模型組，胰島素敏感性提高（P=0.010）。

圖3 胰島素耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig 3 Results of insulin tolerance test

2.5 NMN對衰老小鼠抗氧化水平的影響

2.5.1 各組小鼠血清SOD、GSH-Px 活性及MDA 含量的比較 小鼠血清抗氧化指標(biāo)檢測結(jié)果（表4）顯示：與對照組相比，早衰模型組和衰老模型組的血清SOD、GSH-Px 活性顯著降低（SOD：P=0.002，P=0.001。GSH-Px：P=0.001，P=0.011），MDA 含量顯著升高（均P=0.000），說明模型組小鼠抗氧化水平降低，衰老模型制備成功；與早衰模型組相比，干預(yù)Ⅰ組血清SOD、GSH-Px 活性升高明顯（P=0.026，P=0.006），MDA 含量顯著降低（P=0.011）；與衰老模型組相比，干預(yù)Ⅱ組SOD 活性升高（P=0.046），MDA含量降低（P=0.000）。

2.5.2 各組小鼠肝組織SOD、GSH-Px 活力及MDA含量的比較 小鼠肝臟抗氧化指標(biāo)分析結(jié)果（表4）顯示：與對照組相比，早衰模型組SOD 活性顯著降低（P=0.032），2 組間MDA 含量、GSH-Px 活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對照組相比，衰老模型組SOD、GSH-Px 活性顯著降低（P=0.029，P=0.001），MDA含量顯著升高（P=0.002）；與各模型組相比，兩干預(yù)組肝組織抗氧化水平均有所改善，但僅干預(yù)Ⅱ組的MDA含量的降低具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。

表4 各組小鼠血清及肝組織SOD、GSH-Px活性及MDA含量比較（±s）Tab 4 Effects of NMN on the activities of SOD，GSH-Px and MDA content in serum and liver tissue of each group（±s）

表4 各組小鼠血清及肝組織SOD、GSH-Px活性及MDA含量比較（±s）Tab 4 Effects of NMN on the activities of SOD，GSH-Px and MDA content in serum and liver tissue of each group（±s）

Note: ①P=0.002, ②P=0.001, ③P=0.000 ,④P=0.032, ⑤P=0.011, ⑥P=0.029, compared with the control group; ⑦P=0.026, ⑧P=0.006, ⑨P=0.011, compared with the premature aging model group; ⑩P=0.046, ?P=0.000,compared with the aging model group.

Serum Liver tissue Group n MDA/（nmol·mL-1）0.74±0.03 0.85±0.03 0.77±0.04 0.94±0.07①0.70±0.04?Control group Premature aging model group Intervention group ⅠAging model group Intervention group Ⅱ14 14 14 14 14 SOD/（U·mL-1）140.60±2.96 128.67±2.03①136.94±3.41⑦126.95±2.51②133.91±1.88⑩GSH-Px/（U·mL-1）743.05±38.44 626.22±12.24②714.85±31.53⑧656.65±7.65⑤696.88±11.23 MDA/（nmol·mL-1）5.38±0.19 6.93±0.22③6.12±0.24⑨7.21±0.16③6.36±0.12?SOD/（U·mL-1）169.20±4.99 158.94±2.49④163.17±3.32 158.71±1.45⑥166.83±2.91 GSH-Px/（U·mL-1）505.60±11.58 484.13±21.50 498.91±7.12 587.65±21.14②628.14±18.25③

3 討論

本研究采用D-gal 亞急性衰老模型。在一定時(shí)間內(nèi)連續(xù)注射D-gal，可導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂和功能障礙，引起機(jī)體衰老［14］。D-gal誘發(fā)的衰老使得小鼠在學(xué)習(xí)記憶能力、行動能力和心臟功能方面呈逐步下降趨勢，與自然衰老過程相似［15］。研究設(shè)計(jì)了連續(xù)給藥6周以及連續(xù)給藥12周2個(gè)階段，試圖通過延長造模時(shí)間，加劇小鼠衰老程度［16］，并通過延長干預(yù)時(shí)間來觀察長期補(bǔ)充NMN 的效果。目前，動物實(shí)驗(yàn)中有限的NMN抗衰老研究均采用自然衰老模型［17］，聚焦于NMN 的短期干預(yù)結(jié)果［18］，同時(shí)在干預(yù)結(jié)束的短時(shí)間內(nèi)，存在治療效果消退的情況［19］。本研究采用人工衰老模型小鼠，模擬衰老過程中補(bǔ)充NMN 的預(yù)防效果，比較了NMN 對不同衰老程度小鼠的干預(yù)結(jié)果，結(jié)果提示長時(shí)間的NMN干預(yù)效果更加顯著。

衰老研究中常用代謝組學(xué)技術(shù)［20］，通過對生物體內(nèi)源性代謝物的分析來反映機(jī)體的代謝表型和生理變化［21］。不同于代謝組學(xué)技術(shù)，本研究利用間接測熱法這一測定能量代謝的黃金標(biāo)準(zhǔn)［22］，通過CLAMS實(shí)驗(yàn)動物能量代謝綜合監(jiān)測系統(tǒng)得到小鼠呼吸代謝量、活動量、EE 等代謝指標(biāo)，其可直觀反映小鼠能量代謝水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組小鼠在白天時(shí)大部分能量代謝水平指標(biāo)之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NMN 干預(yù)對衰老小鼠的能量代謝水平影響主要表現(xiàn)在夜晚小鼠活躍活動期間，其潛在機(jī)制可能與NAD+生物合成的晝夜節(jié)律性變化相關(guān)［23］。UDDIN 等［24］研究已證實(shí)，NMN 能夠增加肌肉和肝臟組織中的NAD+水平，降低肥胖小鼠的三酰甘油含量，升高檸檬酸合酶活性，促進(jìn)脂肪分解代謝。本研究發(fā)現(xiàn)，延長NMN 的干預(yù)時(shí)間，可明顯提高衰老小鼠能量代謝水平，其機(jī)制可能與NMN可能提高小鼠的脂質(zhì)利用率有關(guān)。

隨著年齡的增長，肝臟中的NAD+水平降低，衰老過程中更容易出現(xiàn)葡萄糖不耐受和胰島素抵抗［25］。本研究發(fā)現(xiàn)，造模6 周時(shí)小鼠血糖水平干預(yù)組與模型組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著造模及干預(yù)時(shí)間的延長，造模12 周時(shí)模型組小鼠，衰老程度加劇，糖耐量受損加重，胰島素敏感性降低，而干預(yù)組小鼠的糖耐量受損較輕、胰島素敏感性較模型組有所改善。YOSHINO 等［11］研究證實(shí)，NMN 可改善高脂飲食誘導(dǎo)的2 型糖尿病小鼠的葡萄糖不耐受性。而關(guān)于NMN 對糖尿病前期的血糖受損干預(yù)效果，目前鮮有研究。本研究證實(shí)了NMN 可以有效干預(yù)衰老小鼠的血糖調(diào)節(jié)功能，改善其糖耐量和胰島素敏感性。

氧化損傷發(fā)生在衰老的過程中，抗氧化酶SOD和GSH-Px 對機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用［26］。機(jī)體內(nèi)脂代謝過程中的MDA可間接反映脂質(zhì)過氧化程度，是評價(jià)氧化應(yīng)激水平的重要指標(biāo)［27］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，衰老小鼠氧化應(yīng)激水平增高，抗氧化水平降低，造成氧化損傷；給予NMN 干預(yù)可部分提高小鼠血清和肝組織中的抗氧化水平，改善衰老造成的氧化損傷。研究［28］表明，依賴于NAD+的去乙?；赋聊畔⒄{(diào)節(jié)因子1 （silent information regulator 1，SIRT1）在代謝和氧化應(yīng)激中起著重要作用，其活性的增加可提高機(jī)體的抗氧化能力。NAD+水平的高低影響SIRT1 的活性，提高細(xì)胞內(nèi)NAD+水平可有效激活SIRT1 和線粒體代謝［29］。NMN 作為NAD+生物合成的中間產(chǎn)物，其干預(yù)作用是否是通過增加NAD+水平、激活SIRT1 及其相關(guān)通路、提高機(jī)體的抗氧化能力、改善氧化應(yīng)激，從而促進(jìn)代謝活力、提升代謝水平，還需要進(jìn)一步深入研究探討。

綜上所述，本研究證實(shí)給予衰老小鼠一定劑量的NMN，連續(xù)進(jìn)行6周及12周的干預(yù)，其在能量代謝、糖耐量、胰島素敏感性等方面有一定的改善，表明NMN 能一定程度改善衰老小鼠代謝水平。其作用機(jī)制可能與提高機(jī)體的抗氧化能力有關(guān)。同時(shí)本研究比較了NMN 對不同衰老程度小鼠的干預(yù)效果，發(fā)現(xiàn)NMN 干預(yù)時(shí)間越長，對衰老小鼠代謝能力的改善愈發(fā)顯著。對于NMN 改善衰老小鼠代謝的機(jī)制，后續(xù)尚需通過檢測相關(guān)蛋白通路等方式進(jìn)行進(jìn)一步研究。

致謝 本次實(shí)驗(yàn)所用的NMN純品原料由GNC健安喜提供，特此感謝。