張秀秀，黃淑芳，鄭應(yīng)婕，劉龍海，應(yīng)志豪，龔利洋

(杭州動(dòng)物園，浙江 杭州 310008)

隨著獸醫(yī)臨床檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的檢測(cè)儀器被用于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，大大豐富了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段，但方法、儀器的多樣性必然導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的差異[1]，給圈養(yǎng)野生動(dòng)物檢測(cè)結(jié)果的解釋、臨床診斷及病情分析帶來(lái)了諸多不便。目前國(guó)內(nèi)很多的醫(yī)院都同時(shí)擁有干濕化學(xué)分析儀[2-5]，干化學(xué)分析儀操作簡(jiǎn)便 、試劑穩(wěn)定[6]深受廣大動(dòng)物園的歡迎。干化學(xué)法[7-8]是指將樣品(血清、血漿、尿液、腦脊液等)直接加入到固定的特定干載體的干試劑上，并以樣品中的水作為溶劑使樣品中的待測(cè)成分與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，從而進(jìn)行分析的方法；濕化學(xué)法[9-10]即普通的化學(xué)反應(yīng)則是在反應(yīng)容器中加入液態(tài)試劑和樣品，混合后發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)。

杭州動(dòng)物園于2020年2月購(gòu)入愛(ài)德仕生化儀一臺(tái)，此前圈養(yǎng)野生動(dòng)物生化檢測(cè)均送醫(yī)院用貝克曼濕式生化儀檢測(cè)，為了進(jìn)一步了解和探究?jī)煞N檢測(cè)體系生化檢測(cè)結(jié)果的差異性和相關(guān)性，采集杭州動(dòng)物園5種圈養(yǎng)野生動(dòng)物的43個(gè)血清標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行干式和濕式生化檢測(cè)，對(duì)部分檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行差異性和相關(guān)性比較分析，探究?jī)煞N檢測(cè)結(jié)果的可比性，積累杭州園圈養(yǎng)野生動(dòng)物干式生化檢測(cè)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1儀器與試劑 IDEXX Catalyst One生化分析儀(干式)，化學(xué)紙片由愛(ài)德士緬因生物制品貿(mào)易(上海)有限公司指定代理商上海華澍生物科技有限公司提供。BACKMAN Coulter AU5800生化分析儀(濕式)，化學(xué)試劑由上?？迫A生化技術(shù)股份有限公司提供。

1.2研究對(duì)象 采集杭州動(dòng)物園亞洲象、羊駝、黑猩猩、梅花鹿、小熊貓等5種圈養(yǎng)野生動(dòng)物的新鮮血清樣本43份，分別在IDEXX Catalyst One生化分析儀和BACKMAN Coulter AU5800生化分析儀上測(cè)定ACT、AST、GGT、AKP、LDH、GLU、TP、ALB、TBIL、UREA、CREA、CK、CA、PHOS、MG、K、Na、CL等18項(xiàng)生化指標(biāo)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。對(duì)43個(gè)血清樣本用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行差異性分析，以干式生化檢測(cè)結(jié)果(y)和濕式檢測(cè)結(jié)果(x)為雙變量得出相關(guān)系數(shù)并進(jìn)行相關(guān)分析，用直線回歸方法得出回歸系數(shù)及回歸方程。

2 結(jié)果

2.1小熊貓血清樣本比較 對(duì)6只小熊貓11個(gè)血清樣本進(jìn)行了分析比較，除LDH、ALB、GLOB、FRU、CREA、MG、K、NA等8項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果顯著差異(P<0.05)或極顯著差異(P<0.001)外，其余10項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均無(wú)顯著差異(表1)。相關(guān)性分析中LDH、GLOB、NA、CL等4項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著相關(guān)，其余14項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果在0.01水平(雙側(cè))或0.05水平(雙側(cè))極顯著相關(guān)(表2)，ALT、AST、ALB、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS等8項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果線性擬合度較高(R2>0.90)；ALT、AST、CK、TP、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS等9項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異并且顯著相關(guān)。

表1 小熊貓血清樣本兩種不同檢測(cè)方法的差異性比較

表2 小熊貓血清樣本兩種不同檢測(cè)方法的相關(guān)及回歸分析

2.2黑猩猩血清樣本比較 4只黑猩猩7個(gè)血清樣本的分析比較，除GGT、CK顯著差異(P<0.05)外，其余18項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均無(wú)顯著差異(表3)；相關(guān)性比較中可見(jiàn)CK、CA、ALB、TBIL、CA、ALT、AST等7項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著相關(guān)，其中ALT、AST呈負(fù)相關(guān)且不顯著，其余13項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均顯著相關(guān)(表4)；AKP、K線性擬合度較高；AKP、TP、GLOB、HDL、GLU、CREA、TRIG、CA、PHOS、MG、K、NA等13項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異并且顯著相關(guān)。

表3 黑猩猩血清樣本兩種不同檢測(cè)方法的差異性比較

2.3亞洲象血清樣本比較 1頭亞洲象7個(gè)血清樣本的分析比較，16項(xiàng)生化檢測(cè)結(jié)果差異性分析中GGT、ALB、GLOB、TBIL等4項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果顯著或極顯著差異，其余12項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均為無(wú)顯著差異(表5)；相關(guān)分析中TBIL、CREA無(wú)顯著相關(guān)，其余14項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均顯著或極顯著相關(guān)(表6)；AKP、TP、ALB、GLU、UREA、CA、MG等7項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果線性擬合度較好；AKP、TP、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS、MG、K、NA、CL等11項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異并且顯著相關(guān)。

表4 黑猩猩血清樣本兩種不同檢測(cè)方法的相關(guān)性分析

表5 亞洲象血清樣本兩種不同檢測(cè)方法的差異性比較

表6 亞洲象血清樣本兩種不同檢測(cè)方法相關(guān)性分析

2.4羊駝血清樣本比較 對(duì)3只羊駝9個(gè)血清樣本16個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果分析，差異性比較中除LDH顯著差異外，其余15項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均無(wú)顯著差異(表7)；相關(guān)比較中TP、GLOB、CA、MG、NA、CL等6項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著相關(guān)外，其余10項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均顯著相關(guān)(表8)；AST、AKP、GLU、UREA、PHOS等5項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果線性擬合度較好；AST、GGT、AKP、ALB、GLU、CREA、UREA、PHOS、K等9項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異并且顯著相關(guān)。

表7 羊駝血清樣本兩種不同檢測(cè)方法的差異性比較

表8 羊駝血清樣本兩種不同檢測(cè)方法相關(guān)性分析

2.5梅花鹿血清樣本比較 7只梅花鹿9個(gè)血清樣本15項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果中，差異性比較可見(jiàn)CREA、NA、CL檢測(cè)結(jié)果差異極顯著，其余12項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異(表9)；相關(guān)分析中ALT、ALB、CREA、CA、NA、CL等6項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著相關(guān)，其余9項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均為極顯著相關(guān)(表10)；GGT、AKP、TP、GLOB、GLU、UREA、PHOS等7項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果線性擬合度較好；GGT、AKP、TP、GLOB、HDL、GLU、UREA、PHOS、K等9項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異并且顯著相關(guān)。

表9 梅花鹿血清樣本兩種不同檢測(cè)方法的差異性比較

表10 梅花鹿血清樣本兩種不同檢測(cè)方法相關(guān)性分析

3 討論

本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明：同種動(dòng)物同一血清樣本的干式和濕式生化檢測(cè)結(jié)果半數(shù)及以上檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異并且顯著相關(guān)，其中GLU、UREA、PHOS在5種動(dòng)物的干濕生化比較中均無(wú)顯著差異并且顯著相關(guān)。這與有關(guān)報(bào)道關(guān)于人的干、濕化學(xué)法生化檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著相關(guān)性[11-12]有所差異，與豬的血清干、濕式生化12項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果中有6項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果間無(wú)顯著差異[13]一致。

本次實(shí)驗(yàn)的生化檢測(cè)結(jié)果顯示干、濕生化檢測(cè)體系的部分檢測(cè)結(jié)果具有可比性，小熊貓的檢測(cè)結(jié)果中ALT、AST、CK、TP、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS等9項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果具有可比性，黑猩猩的檢測(cè)結(jié)果中AKP、TP、GLOB、HDL、GLU、CREA、TRIG、CA、PHOS、MG、K、NA等13項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果具有可比性，亞洲象的檢測(cè)結(jié)果中AKP、TP、HDL、GLU、UREA、CA、PHOS、MG、K、NA、CL等11項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果具有可比性，羊駝的檢測(cè)結(jié)果中AST、GGT、AKP、ALB、GLU、CREA、UREA、PHOS、K等9項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果具有可比性，梅花鹿的檢測(cè)結(jié)果中GGT、AKP、TP、GLOB、HDL、GLU、UREA、PHOS、K等9項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果具有可比性， GLU、UREA、PHOS此三項(xiàng)的干濕生化結(jié)果在亞洲象、羊駝、黑猩猩、梅花鹿、小熊貓5種動(dòng)物之間均具有可比性。在進(jìn)行病情分析和疾病診斷時(shí)可參考具有可比性生化指標(biāo)，但為了準(zhǔn)確分析生化檢測(cè)結(jié)果，建議使用動(dòng)物用生化儀進(jìn)行生化檢測(cè)，同時(shí)建立干、濕生化檢測(cè)結(jié)果參考范圍，以便應(yīng)用于臨床診斷和疾病的治療。

部分檢測(cè)項(xiàng)目差異顯著，無(wú)顯著相關(guān)，分析原因可能是：一是本次實(shí)驗(yàn)僅采集到了43個(gè)血清樣本，同種動(dòng)物的血清樣本量依然偏少，少量的樣本量不足以反映總體的真實(shí)情況；二是干式生化結(jié)果是在動(dòng)物園內(nèi)完成生化檢測(cè)，而濕式生化結(jié)果則是在醫(yī)院內(nèi)完成，兩臺(tái)儀器所處的環(huán)境不同，可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不同，有研究顯示不同溫度和濕度會(huì)造成生化檢驗(yàn)結(jié)果的差異[14-15]；三是干式生化儀與濕式生化儀的各檢測(cè)項(xiàng)目的工作原理及方法不同[16]，動(dòng)物的血清樣本與人的血清樣本之間存在某些差異，部分野生動(dòng)物的血清生化檢測(cè)項(xiàng)目需要進(jìn)一步探討完善。

在以后的工作中要進(jìn)一步做針對(duì)性的探究，通過(guò)增加同種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血清樣本數(shù)量、評(píng)估兩種分析系統(tǒng)常規(guī)生化項(xiàng)目批內(nèi)及批間精密度、對(duì)比參考動(dòng)物血清干濕生化分析結(jié)果、改變統(tǒng)計(jì)方法等方式，減少實(shí)驗(yàn)誤差和系統(tǒng)誤差，盡可能反映樣本的真實(shí)情況。