魏鵬，陳鵬

1.陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院普外一科，陜西 咸陽(yáng) 712000；2.三原縣醫(yī)院普外二科，陜西 咸陽(yáng) 713800

乳腺癌是一種婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤，常發(fā)生在乳腺上皮以及導(dǎo)管上皮[1]。其發(fā)病率逐年升高，在婦科惡性腫瘤中已達(dá)首位，嚴(yán)重危害女性的生命健康[2]。早期患者可出現(xiàn)乳頭溢液、疼痛、乳頭形狀改變和腫塊等情況。目前臨床上常采用手術(shù)聯(lián)合化學(xué)和放射治療[3]。新輔助化療是一種新型化療方案，常運(yùn)用于中晚期乳腺癌的治療，療效已受到國(guó)內(nèi)外的普遍認(rèn)可。但有研究表明，新輔助化療的臨床總體有效率為65%～90%，對(duì)于部分患者療效較低甚至無(wú)效，并且化療所引起的毒副反應(yīng)也可能導(dǎo)致治療失敗，嚴(yán)重危害患者生命健康[4-5]。因此，迫切需要尋找能夠反映化療效果的指標(biāo)來(lái)判定哪些人群適合接受新輔助化療治療。E-鈣黏附蛋白是鈣粘附蛋白家族中的一種跨膜蛋白的亞型，主要負(fù)責(zé)細(xì)胞的分化、分泌等功能，已被證實(shí)其參與惡性腫瘤的發(fā)展；肌切蛋白是一種重要的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，與腫瘤的發(fā)展與形成密切相關(guān)。近年來(lái)，兩種指標(biāo)已被用于評(píng)估乳腺癌的療效和預(yù)后，但是目前將兩種指標(biāo)運(yùn)用于判定乳腺癌新輔助化療效果的相關(guān)研究較少[6]。本研究旨在探討乳腺癌患者E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白的表達(dá)水平及其與新輔助化療效果間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年4 月至2020 年4 月陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院收治的78 例乳腺癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《乳腺癌綜合診治規(guī)范化手冊(cè)》[7]中乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)者；(2)符合《乳腺癌臨床診治實(shí)用手冊(cè)》[8]中新輔助化療適應(yīng)證者；(3)精神正常者；(4)無(wú)大面積癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移者；(5)生存時(shí)間在治療周期以上者；(6)治療前未接受其他治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在其他血液體統(tǒng)疾病者；(2)存在肺、腦、腎等重要器官障礙者；(3)中途退出或死亡者。根據(jù)治療后的評(píng)價(jià)效果進(jìn)行分組，將臨床完全緩解、病理完全緩解、臨床部分緩解者納入療效較好組，臨床穩(wěn)定、臨床進(jìn)展者納入療效較差組。療效較好組患者51 例，年齡29～71 歲，平均(50.24±10.21)歲；病程9～18 個(gè)月，平均(14.25±2.44)個(gè)月。療效較差組患者27 例，年齡29～70 歲，平均(50.15±10.19)歲；病程9～18 個(gè)月，平均(14.19±2.34)個(gè)月。兩組患者的一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者及其家屬知情且簽署知情同意書(shū)。

1.2 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 參考《乳腺癌綜合診治規(guī)范化手冊(cè)》[8]中評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：臨床完全有效：患者所有病灶均消失；病理完全緩解：患者手術(shù)后大體標(biāo)本中癌殘留或癌成分基本消失；臨床部分緩解：基線病灶長(zhǎng)徑降低30%以上；臨床穩(wěn)定：患者病灶縮小未達(dá)到臨床部分緩解標(biāo)準(zhǔn)；臨床進(jìn)展：基線病灶未見(jiàn)改善或者增加、出現(xiàn)新病灶。

1.3 治療方法 所有患者入院后接受穿刺檢查和影像學(xué)檢查，符合《乳腺癌綜合診治規(guī)范化手冊(cè)》中乳腺浸潤(rùn)性癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，在患者確診隨即進(jìn)行新輔助化療治療。治療前患者均接受鹽酸恩丹西酮注射液(常州蘭陵制藥有限公司國(guó)藥準(zhǔn)字H19980013)8 mg，使用前先將該注射液溶于25～50 mL 0.9%氯化鈉溶液中，然后靜脈注射，以預(yù)防胃腸道不適癥，在治療開(kāi)始時(shí)輔以參芪扶正注射液(麗珠集團(tuán)利民制藥廠國(guó)藥準(zhǔn)字Z19990065)250 mL/d靜脈滴注。治療首日，對(duì)患者靜脈滴注表柔比星(輝瑞制藥有限公司國(guó)藥準(zhǔn)字H20000496) 60 mg/m2，環(huán)磷酰胺注射液(江蘇恒瑞制藥有限公司國(guó)藥準(zhǔn)字H10950292)600 mg/m2；第二天至第五天靜脈滴注5-氟尿嘧啶(北京斯利安藥業(yè)有限公司國(guó)藥準(zhǔn)字H11020223)6～8 h。療程為5 d，每個(gè)患者接受4個(gè)周期化療，隨即進(jìn)行手術(shù)治療。

1.4 組織E-鈣黏附蛋白和肌切蛋白免疫組化檢測(cè) 在患者接受治療前和治療4 個(gè)周期后進(jìn)行檢查，進(jìn)行組織切片制作，將玻片采用生理鹽水清理干凈后烘干，浸泡于二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各15 min，隨后將其浸泡于100%，95%，70%的酒精內(nèi)3 min，隨后再用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗，將切片放于修復(fù)液中，放于水浴箱進(jìn)行抗原修復(fù)，完成后將其取出，冷卻后使用PBS再次清洗，反復(fù)三次，在玻片上加入3%H2O2去離子水，待室溫培養(yǎng)后，采用PBS反復(fù)沖洗，甩干3次，隨后滴入一抗，在4℃中孵育過(guò)夜。復(fù)溫孵育，采用PBS 液進(jìn)行沖洗5 min，反復(fù)3 次后滴入二抗孵育1 h，再進(jìn)行PBS液進(jìn)行沖洗5 min，反復(fù)3次后滴入顯色劑，10 min后通過(guò)顯微鏡觀察。再次染色3 min后使用自來(lái)水進(jìn)行沖洗，通過(guò)1%鹽酸酒精進(jìn)行分化，10 s后，采用自來(lái)水沖洗，再次烘干，滴入中性樹(shù)膠封片，干燥后隨即進(jìn)行讀片。

1.5 E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白陽(yáng)性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)果可見(jiàn)棕黃色顆粒，同時(shí)特異性分布于胞漿或者包膜，則可判定為陽(yáng)性。定量分析采用圖像分析技術(shù)，使用Olympus 公司的圖像采集分析系統(tǒng)，將制作的玻片放于光鏡下進(jìn)行分析，每個(gè)玻片選擇陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行采集，并通過(guò)Image-Pro Plus6.0 軟件對(duì)所獲得的圖像進(jìn)行平均積分光密度計(jì)算。所測(cè)得值為每個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)的平均值。

1.6 觀察指標(biāo) (1)比較兩組患者的臨床特征；(2)比較兩組患者治療前后的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白水平；(3)分析E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達(dá)與新輔助化療療效的相關(guān)性。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)樣本t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達(dá)與新輔助化療療效的相關(guān)性。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的臨床特征比較 兩組患者在絕經(jīng)情況、腫瘤直徑、TNM 分期方面比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；療效較差組患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為88.88%，明顯高于療效較好組的11.76%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組患者的臨床特征比較[例(%)]

2.2 兩組患者治療前后的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白水平比較 治療前，兩組患者的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后，兩組患者的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值明顯低于治療前，且療效較好組患者的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值明顯低于療效較差組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組患者治療前后的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值比較(±s，%)

表2 兩組患者治療前后的E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白平均積分光密度值比較(±s，%)

注：與療效較好組治療后比較，aP＜0.05。

組別療效較好組療效較差組例數(shù)5127時(shí)間治療前治療后t值P值治療前治療后t值P值E-鈣黏附蛋白30.25±5.5221.01±5.158.7410.00130.12±5.4225.58±5.13a 3.1610.003肌切蛋白26.75±5.5915.98±5.1810.0920.00126.82±5.5421.42±5.21a 3.6900.001

2.3 兩組患者治療后的E-鈣黏附蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 治療后，療效較好組患者中E-鈣黏附蛋白陽(yáng)性24 例，陰性27 例，E-鈣黏附蛋白陽(yáng)性率為47.05%(24/51)，陰性率為52.94%(27/51)；療效較差組患者中E-鈣黏附蛋白陽(yáng)性25 例，陰性2 例，E-鈣黏附蛋白陽(yáng)性率為92.59%(25/27)，陰性率為7.41% (2/27)。療效較好組患者的E-鈣黏附蛋白陽(yáng)性率顯著低于療效較差組，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.671，P＜0.01)。

2.4 兩組患者治療后的肌切蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 治療后，療效較好組患者中肌切蛋白陽(yáng)性22 例，陰性29 例，肌切蛋白陽(yáng)性率為43.14%(22/51)，陰性率為56.86%(29/51)；療效較差組患者中肌切蛋白陽(yáng)性26 例，陰性1 例，肌切蛋白陽(yáng)性率為96.30%(26/27)，陰性率為3.70%(1/27)。療效較好組患者的肌切蛋白陽(yáng)性率顯著低于療效較差組，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.077，P＜0.01)。

2.5 E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達(dá)與新輔助化療療效的相關(guān)性 經(jīng)Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，E-鈣黏附蛋白(r=-0.095，P＜0.01)、肌切蛋白(r=-4.27，P=0.031)表達(dá)與新輔助化療療效均呈負(fù)相關(guān)，見(jiàn)圖1。

圖1 E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達(dá)與新輔助化療療效的相關(guān)性

3 討論

在我國(guó)，乳腺癌的發(fā)病率逐年升高，成為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，嚴(yán)重危害女性的生命健康[9]。乳腺癌在早期可表現(xiàn)為全身性病灶，采用單一局部組織切除手術(shù)治療難以進(jìn)行徹底的治療，需要同時(shí)結(jié)合放療、化療的手段[10]。新輔助化療方案已成為乳腺癌規(guī)范化治療的重要部分，能夠有效改善患者的臨床分期，提高乳腺癌根治術(shù)的手術(shù)效果[11-12]。但是新輔助化療也具有一定的局限性，對(duì)于部分效果不佳的患者來(lái)說(shuō)，不但會(huì)帶來(lái)較大的毒副反應(yīng)，還會(huì)耽誤手術(shù)時(shí)間，導(dǎo)致患者錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)間，甚至出現(xiàn)大面積轉(zhuǎn)移的情況。因此探究新輔助化療效果的標(biāo)志物進(jìn)行有效的預(yù)測(cè)是極其重要的[13-14]。

E-鈣黏附蛋白是一種通過(guò)CDHI基因編碼的跨膜糖蛋白物質(zhì)，是上皮細(xì)胞粘附分子，主要分布于上皮細(xì)胞當(dāng)中，胞漿端與細(xì)胞骨架通過(guò)連環(huán)素間接相連，以構(gòu)成復(fù)合體，可以對(duì)細(xì)胞間極性和粘附性進(jìn)行介導(dǎo)，主要參與到各細(xì)胞間的連接中，其表達(dá)的下降能夠使細(xì)胞間的粘附性下降，降低細(xì)胞間的相連，使腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移速度加快[15-16]。

本研究表示，經(jīng)過(guò)新輔助化療治療后，兩組患者的E-鈣黏附蛋白平均積分光密度值降低，療效較好組的E-鈣黏附蛋白平均積分光密度值低于療效較差組，同時(shí)療效較好組中E-鈣黏附蛋白陽(yáng)性率顯著低于療效較差組，陰性率顯著高于療效較差組，可能是由于化療破壞大部分腫瘤組織，使得腫瘤上皮細(xì)胞被破壞，引起E-鈣黏附蛋白水平下降。我們分析了E-鈣黏附蛋白與新輔助化療作用的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)E-鈣黏附蛋白與新輔助化療效果呈負(fù)相關(guān)，在療效較好組中顯著降低，說(shuō)明調(diào)節(jié)E-鈣黏附蛋白在癌細(xì)胞進(jìn)展中的表達(dá)，能夠?qū)π螺o助化療藥物效果進(jìn)行預(yù)測(cè)。

肌切蛋白是一種鈣離子依賴性蛋白，主要負(fù)責(zé)對(duì)分泌細(xì)胞的胞吐功能進(jìn)行調(diào)控，肌切蛋白活化并對(duì)皮層肌動(dòng)蛋白纖維網(wǎng)進(jìn)行切割，對(duì)肌動(dòng)蛋白網(wǎng)障礙進(jìn)行清理[17-18]。同時(shí)肌切蛋白還能夠?qū)ι掀らg質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)行調(diào)控，而上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化能夠直接決定腫瘤細(xì)胞惡性程度。李妤等[19]研究發(fā)現(xiàn)，敏感組肌切蛋白平均積分光密度值較化療前降低，且對(duì)化療效果的預(yù)測(cè)價(jià)值較高。本研究中，經(jīng)過(guò)新輔助化療治療后，兩組患者的肌切蛋白水平均降低，療效較好組的肌切蛋白水平低于療效較差組，同時(shí)療效較好組中肌切蛋白陽(yáng)性率顯著低于療效較差組，陰性率顯著高于療效較差組，這與上述研究結(jié)果一致?？赡苁怯捎诩∏械鞍啄軌蛲ㄟ^(guò)ERK1/2和MAP激酶P38調(diào)節(jié)信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞分化進(jìn)行調(diào)控，在腫瘤的發(fā)展和預(yù)后當(dāng)中起到重要的作用[20]。此外，我們分析了肌切蛋白與新輔助化療療效相關(guān)性，與E-鈣黏附蛋白結(jié)果一致，肌切蛋白與新輔助化療效果呈負(fù)相關(guān)，提示肌切蛋白可作為新輔組化療藥效評(píng)價(jià)的新指標(biāo)。

綜上所述，乳腺癌患者體內(nèi)E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白參與乳腺癌的發(fā)展，經(jīng)過(guò)新輔助化療方案治療后，E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達(dá)顯著降低，且E-鈣黏附蛋白、肌切蛋白表達(dá)與新輔助化療療效均呈負(fù)相關(guān)。