張國福，郭連軍，薛 雯，王紅艷，金 巖*

(1.山東省農(nóng)藥檢定所，山東 濟(jì)南 250100；2. 招遠(yuǎn)市綜合行政執(zhí)法局，山東 招遠(yuǎn) 265400；3.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東 泰安 271018)

姜(Zingiber officinale Rosc.)為姜科多年生宿根植物，通常作一年生栽培，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1-2]。生姜在我國自古以來就有栽培，是傳統(tǒng)的食用和藥用植物，也是古老的香料和化妝工業(yè)的天然原料[3-5]。生姜的食用部分是根狀莖，除含有姜油酮、姜油酚及姜油醇外，還含有蛋白質(zhì)、糖、粗脂肪及豐富的鐵、鈣等，是人們生活中不可缺少的調(diào)味品，深受人們喜愛[6]。

在姜的整個(gè)生育期中，病蟲害種類繁多，其中姜葉枯病是生姜種植主要病害之一，發(fā)病的葉片多從葉尖葉緣開始發(fā)病，病斑近圓形或不規(guī)則形，灰褐色，病斑黃褐色，中央有灰白色，病健交界處有明顯的黃色暈圈，嚴(yán)重時(shí)整個(gè)葉片變褐枯萎[7]。姜葉枯病菌為姜球腔菌(Mycosphaerella zingiberi Shirai et Hara)，屬子囊菌門真菌。病菌以子囊座或菌絲在病殘?bào)w上越冬，借風(fēng)雨、昆蟲或農(nóng)事操作傳播。高溫、高濕有利于發(fā)病，連作地、植株長勢(shì)過密、通風(fēng)不良、氮肥過量情況下發(fā)病重。本研究開展了10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和50%甲基硫菌靈可濕性粉劑防治姜葉枯病的室內(nèi)活性測(cè)定、安全性及田間藥效試驗(yàn)，以期為評(píng)價(jià)防治姜葉枯病有效、安全的農(nóng)藥品種提供相關(guān)的田間防治技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試菌種：姜葉枯病菌從山東省泰安市范鎮(zhèn)大姜田葉枯病發(fā)病病株上分離得到，采用常規(guī) PDA 培養(yǎng)基進(jìn)行純化培養(yǎng)并分離鑒定。

供試植物：魯姜一號(hào)、魯中大姜和山農(nóng)一號(hào)3個(gè)主栽品種進(jìn)行藥劑安全性試驗(yàn)，選擇生長一致的3～4葉期生姜植株。

試驗(yàn)場(chǎng)地：青島市萊西樸木前水口村；湖南省長沙縣高橋鎮(zhèn)試驗(yàn)基地；陜西省漢中市勉縣新街子鎮(zhèn)。

1.2 試驗(yàn)藥劑 95%苯醚甲環(huán)唑原藥，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑，95%甲基硫菌靈原藥，50%甲基硫菌靈可濕性粉劑，97%戊唑醇原藥。將95%苯醚甲環(huán)唑原藥、95%甲基硫菌靈原藥、97%戊唑醇原藥配成1×104mg/L母液，其中溶劑為丙酮，于冰箱中<4℃貯藏備用，使用時(shí)用含有0.1%的吐溫80的水溶液稀釋至適當(dāng)濃度。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 室內(nèi)活性測(cè)定試驗(yàn) 采用菌絲生長速率法測(cè)定3種殺菌劑對(duì)姜葉枯病菌的抑制作用。將姜葉枯病菌接種于PDA培養(yǎng)基上25±1℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)預(yù)培養(yǎng)5 d用直徑0.7cm的打孔器在靠近菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅，接種到含有不同藥劑濃度的培養(yǎng)基平板上(苯醚甲環(huán)唑：0.15、0.3、0.6、1.2、2.4mg/L；甲基硫菌靈：0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mg/L；戊唑醇：1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/L)，每皿一片，置于25±1℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7d，用十字交叉法測(cè)定各處理的菌落生長直徑，以不含藥劑的溶劑為對(duì)照。每濃度處理重復(fù)4次。通過菌絲生長抑制概率值和藥劑濃度對(duì)數(shù)值之間的線性回歸分析，求出各藥劑對(duì)菌株的有效抑制中濃度(EC50值)及置信區(qū)間[9-10]。

1.3.2 作物安全性試驗(yàn) 按照《農(nóng)藥對(duì)作物安全性評(píng)價(jià)準(zhǔn)則》(NY/T 1965.1～2010)要求，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑設(shè)置60、120、240g/667m23個(gè)劑量，50%甲基硫菌靈可濕性粉劑設(shè)置 80、160、320g/667m23個(gè)劑量，以噴施清水為對(duì)照，共4個(gè)處理，每個(gè)處理4次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5盆，每盆播種2個(gè)姜塊，隨機(jī)區(qū)組排列。選擇生長一致的3～4葉期生姜幼苗，采用ASS-4型定量噴霧塔從低劑量到高劑量順序進(jìn)行噴霧處理，以清水處理為空白對(duì)照。將處理后的生姜植株放置在環(huán)境條件為溫度20～30℃、濕度80%的玻璃溫室內(nèi)培養(yǎng)(光暗比為14：10)。根據(jù)需要定量澆水，觀察試驗(yàn)結(jié)果。于施藥后7、14、21d調(diào)查生姜植株株高以及葉片數(shù)，同時(shí)觀察生姜植株形態(tài)、葉片顏色等有無變化。

1.3.3 田間藥效試驗(yàn) 采用新加坡利農(nóng)HD-400型背負(fù)式手動(dòng)噴霧器進(jìn)行全株莖葉均勻噴霧處理。試驗(yàn)藥液濃度(表1)，小區(qū)面積為15～20m2，重復(fù)4次，隨機(jī)區(qū)組排列。于姜葉枯病發(fā)病前或發(fā)病初期開始施藥，每次施藥間隔7～10d，共施藥3次。

表1 試驗(yàn)處理設(shè)計(jì)

于藥前調(diào)查病情指數(shù)，末次施藥后7～14d調(diào)查防治效果，共計(jì)調(diào)查2次。每小區(qū)采用5點(diǎn)取樣，每點(diǎn)調(diào)查3株，每株調(diào)查5個(gè)葉片，并根據(jù)以下方法分別予以記錄。

分級(jí)方法：

0級(jí)：無??；

1級(jí)：單葉片有病斑3個(gè)；

3級(jí)：單葉片有病斑4～6個(gè)；

5級(jí)：單葉片有病斑7～10個(gè)；

7級(jí)：單葉片有病斑11～20個(gè)，部分密集成片；

9級(jí)：單葉片有病斑密集占葉面積>1/4。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 調(diào)查結(jié)果按下列公式進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

公式(1)：

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均由Microsoft Excel 2010、DPS數(shù)據(jù)處理工作平臺(tái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算毒力回歸式、EC50值及相關(guān)系數(shù)。

公式(2)：

公式(3)：

公式(4)：

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)活性測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果

室內(nèi)活性試驗(yàn)結(jié)果表明(表2)：苯醚甲環(huán)唑和甲基硫菌靈對(duì)姜葉枯病菌均具有較高的生物活性，其中3種藥劑對(duì)姜葉枯病菌的EC50值分別為1.15、1.20和4.52 mg/L，說明3種藥劑對(duì)姜葉枯病菌的活性從高到低依次為苯醚甲環(huán)唑、甲基硫菌靈、戊唑醇。苯醚甲環(huán)唑和甲基硫菌靈能夠有效的抑制姜葉枯病菌的菌絲生長，可以作為田間防治姜葉枯病的藥劑。

表2 苯醚甲環(huán)唑和甲基硫菌靈對(duì)姜葉枯病菌的生物活性測(cè)定結(jié)果

2.1 作物安全性試驗(yàn)結(jié)果

安全性試驗(yàn)結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑(60、120、240g/667m2)、50%甲基硫菌靈可濕性粉劑(80、160、320g/667m2)在田間最大推薦劑量的1倍、2倍、4倍劑量下，常規(guī)噴霧處理生姜苗期植株，對(duì)3種生姜的葉片數(shù)、株高、生長速率以及生長速率抑制率均無明顯影響。在試驗(yàn)中觀察可知各處理均無藥害癥狀出現(xiàn)。2種藥劑對(duì)生姜的安全系數(shù)為4.0。

表3 10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和50%甲基硫菌靈可濕性粉劑對(duì)生姜安全性系數(shù)測(cè)定結(jié)果

2.3 田間藥效試驗(yàn)結(jié)果 10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑防治姜葉枯病田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明(表4)：3個(gè)試驗(yàn)地中10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對(duì)姜葉枯病均有較好的防治效果，末次藥后7～14d防效在58.36%～92.12%，隨著施藥劑量的增加，防治效果不斷提高。藥劑中、高劑量處理的防效較對(duì)照處理防效高。3地試驗(yàn)結(jié)果中山東試驗(yàn)點(diǎn)防效最高，平均90%左右，其次是陜西試驗(yàn)點(diǎn)，平均防效80%左右，湖南試驗(yàn)點(diǎn)防效最低，平均防效75%左右。

表4 10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和50%甲基硫菌靈可濕性粉劑防治姜葉枯病田間藥效試驗(yàn)結(jié)果

50%甲基硫菌靈可濕性粉劑防治姜葉枯病田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明(表4)：3個(gè)試驗(yàn)地中50%甲基硫菌靈可濕性粉劑對(duì)姜葉枯病均有較好的防治效果，末次藥后7～14d防效在61.16%～91.31%，隨著施藥劑量的增加，防治效果不斷提高。藥劑中、高劑量處理的防效較對(duì)照處理防效高。3地試驗(yàn)結(jié)果中陜西試驗(yàn)點(diǎn)防效最高，平均85%左右，其次是山東試驗(yàn)點(diǎn)，平均防效75%左右，湖南試驗(yàn)點(diǎn)防效最低，平均防效70%左右。

3 結(jié)論與討論

苯醚甲環(huán)唑是三唑類內(nèi)吸性殺菌劑，具有保護(hù)和治療作用，對(duì)子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌及某些種傳病原菌具有較好的活性，甲基硫菌靈是一種廣譜性內(nèi)吸低毒殺菌劑，屬于苯并咪唑類殺菌劑，在植物體內(nèi)能轉(zhuǎn)化成多菌靈，對(duì)半知菌、子囊菌等真菌引起的多種病害具有保護(hù)和治療作用，可見2種藥劑用于防治姜葉枯病理論依據(jù)十分充足。在本研究中室內(nèi)活性測(cè)定結(jié)果顯示，苯醚甲環(huán)唑、甲基硫菌靈對(duì)姜葉枯病菌具有較高的活性，EC50值(7d)分別為1.15、1.20mg/L，說明苯醚甲環(huán)唑、甲基硫菌靈用于防治姜葉枯病具有較好的潛力。安全性試驗(yàn)結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑、甲基硫菌靈制劑在高劑量下對(duì)姜苗均十分安全，未見藥害現(xiàn)象出現(xiàn)。田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑30～60g/667m2處理下防效在85%左右，50%甲基硫菌靈可濕性粉劑40～80g/667m2處理下防效在80%左右，在田間推薦劑量下均能達(dá)到較好的防治效果。綜上各項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和50%甲基硫菌靈可濕性粉劑在田間生產(chǎn)中用于防治姜葉枯病具有較高的有效性和安全性。因此，生產(chǎn)中推薦在姜葉枯病發(fā)病前或初期使用10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑30～60g/667m2或者50%甲基硫菌靈可濕性粉劑40～80g/667m2，間隔7～10d左右施藥一次，連續(xù)施藥2～3次，可有效防治姜葉枯病的危害。

姜葉枯病在全國分散發(fā)生，病情發(fā)展快，防治不及時(shí)、防治不當(dāng)可嚴(yán)重影響姜的產(chǎn)量、品質(zhì)和商業(yè)價(jià)值。因此，在姜種植期應(yīng)注重農(nóng)業(yè)防治、物理防治和藥劑防治相結(jié)合的方法綜合治理姜葉枯病。由于目前已取得國家登記的可用于防治姜葉枯病的農(nóng)藥品種較少，在田間防治中不乏“濫用、亂用”農(nóng)藥的現(xiàn)象，不僅影響姜的質(zhì)量安全，而且也會(huì)加劇病害抗藥性的發(fā)生，因此，鼓勵(lì)農(nóng)藥企業(yè)積極研發(fā)防治姜葉枯病的農(nóng)藥產(chǎn)品，有序開展農(nóng)藥登記工作，不斷增加有效合法的農(nóng)藥產(chǎn)品數(shù)量，可以有效解決姜葉枯病防治“無藥可用”“藥不夠用”的狀態(tài)。本研究通過開展10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和50%甲基硫菌靈可濕性粉劑防治姜葉枯病的各項(xiàng)試驗(yàn)研究，證明了2種藥劑防治姜葉枯病是安全有效的，可為指導(dǎo)農(nóng)業(yè)田間生產(chǎn)提供一定科學(xué)依據(jù)。