崔延華，李 林，楊 洋，程 睿，萬正平，畢建啟，陳 鋒，梁銀銓，張志明

（1.廣西大藤峽水利樞紐開發(fā)有限責(zé)任公司，南寧 530000；2.水利部中國科學(xué)院水工程生態(tài)研究所，水利部水工程生態(tài)效應(yīng)與生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北省水生態(tài)保護(hù)與修復(fù)工程技術(shù)研究中心，武漢 430079；3.廣州珠江水資源保護(hù)科技發(fā)展有限公司，廣州 510000）

廣西壯族自治區(qū)江河梯級水利開發(fā)導(dǎo)致江河阻隔、水質(zhì)污染，加上過度捕撈等，使江河魚類資源遭到嚴(yán)重破壞。多線盤自然資源十分匱乏，亟待保護(hù)。2020 年開始對多線盤馴化和人工繁殖進(jìn)行研究，旨在為多線盤的資源保護(hù)和人工增養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.2 親魚馴化培育

1.2.1 培育池條件 使用室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)進(jìn)行培育。培育池為直徑3 m 的圓柱形室內(nèi)塑料桶，水深1.5 m。具有獨(dú)立的進(jìn)水、排水、增氧和控溫設(shè)施。室內(nèi)通風(fēng)、避光、墻體保溫。放養(yǎng)前將培育池刷洗干凈，使用聚維酮碘溶液浸泡消毒，3 d 后注入循環(huán)水，培育池上罩2 指密網(wǎng)，謹(jǐn)防多線盤親魚頂水跳出缸外。

1.2.2 親魚馴化及投喂 使用2 個培育池，每個培育池放養(yǎng)300～500 尾多線盤親魚。野生多線盤使用食鹽浸泡5 min 后放入培育池（提前調(diào)節(jié)培育池水溫與運(yùn)輸水溫相差不超過1 ℃）。前3 d 及時觀察親魚情況，不進(jìn)行投喂。第4 天使用甲魚料和破碎鯉魚料加水捏團(tuán)沉入培育池（甲魚料∶破碎鯉魚料=1∶1），每天8：00 和18：00 進(jìn)行投喂，每天9：00 和19：00 吸出殘餌和糞便。在投喂第2 天親魚開始攝食，投喂第5 天親魚正常攝食。第15 天開始替換為蛋白質(zhì)含量為30.0%～35.0%的鯉魚配合飼料，第20 天替換完成，多線盤親魚正常攝食。投喂時做到“五定原則”，即定時、定點(diǎn)、定質(zhì)、定量、定人，同時注意觀察水色、魚情和天氣。不定期在餌料中添加維生素C 增強(qiáng)親魚免疫力。

1.2.3 強(qiáng)化培育 每年2 月開始，使用黃粉蟲、水蚯蚓替代半數(shù)人工配合飼料。人工繁殖前一個月每天沖水一次，每次沖水2 h，刺激多線盤性腺發(fā)育。

1.2.4 水質(zhì)管理 培育用水均為紅水河江水，首先抽至蓄水池，黑暗沉淀后進(jìn)入循環(huán)水系統(tǒng)。在循環(huán)水系統(tǒng)中經(jīng)過轉(zhuǎn)盤式微孔過濾、集成式生物過濾和紫外消毒后進(jìn)入培育池，每3 d 更換約1/5 下層水，每7 d 消毒一次，每天清洗消毒投喂和排污工具。

1.3 人工繁殖

1.3.2 親魚挑選 用于人工催產(chǎn)的親魚必須達(dá)性成熟，選擇游動能力強(qiáng)、體質(zhì)健壯、體表光滑、鰭條完整、無病無傷、腹部膨脹、下腹松軟、泄殖孔紅潤的雌性多線盤。選擇游動活躍、輕壓下腹時有入水即散的乳白色精液流出的雄性多線盤。

1.3.3 人工催產(chǎn) 對選定催產(chǎn)的親魚，進(jìn)行1 次性注射催產(chǎn)，促進(jìn)親魚發(fā)情、產(chǎn)卵和產(chǎn)精。催產(chǎn)劑配方為絨毛膜促性腺激素，4 IU/g，促黃體素釋放激素A2，0.05 μg/g，地歐酮，0.2 mg/尾，均為寧波第二激素廠生產(chǎn)。采用注射器從親魚胸鰭基部凹陷處沿體側(cè)線向頭部方向傾斜45°注入親魚腹腔內(nèi)，使用套管控制針尖刺入親魚體內(nèi)0.3 cm。雌性親魚催產(chǎn)劑注射劑量為0.1～0.2 ml/尾，雄性親魚催產(chǎn)劑注射劑量為雌性一半。將催產(chǎn)后的親魚放入催產(chǎn)池中，水深為30～40 cm，水質(zhì)清澈透明，沖水使催產(chǎn)池形成水流，效應(yīng)時間為6～7 h。

1.3.4 人工授精 在親魚開始相互追逐達(dá)到發(fā)情高潮時，進(jìn)行采卵和采精。用移液槍插入雄魚生殖孔，邊輕壓腹部邊吸取精液，置于燒杯中暫存。輕壓雌魚腹部將卵子擠出，用羽毛將卵子撥至容器中暫存。首先將精卵分開存放在不同的容器中，待精子、卵子全部收集完成后放入同一容器內(nèi)，加入少量0.45%NaCl 溶液激活精子，輕拌完成授精，形成受精卵。1 min 后在流水下反復(fù)沖洗受精卵4～5 次，洗去雜物及受精卵表面的黏液。成熟多線盤卵子白色偏黃，卵徑（0.22±0.05）mm，吸水膨脹時間約為10 min，膨脹后卵徑（0.35±0.08）mm。

1.3.5 人工孵化 將洗凈的受精卵放入尤先科孵化器孵化，每平方水面放入不大于1 萬粒受精卵。孵化過程中根據(jù)受精率發(fā)育情況調(diào)節(jié)水流大小，孵化前期可調(diào)大水流流速，隨著受精卵發(fā)育逐步降低流速，在出膜高峰期可適當(dāng)停止水流悶卵，出膜末期可挑出未出膜活卵置于燒杯內(nèi)輔助出膜，出膜完成后可逐漸增加流速。孵化過程中注意及時挑出死卵和雜物。孵化用水溶氧大于等于7 mg/L、水溫保持為18～22 ℃且溫差不超過2 ℃，符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（GB11607）規(guī)定，孵化時間為84～120 h。

1.4 魚苗培育

為提高成活率，魚苗選擇在直徑2 m、水深1 m的室內(nèi)塑料缸使用循環(huán)水養(yǎng)殖，水溫控制在18～25 ℃。出膜3 d 后的仔魚開始攝食，分階段投喂蛋黃、豐年蟲、微囊料及蛋白質(zhì)含量為30%～35%的鯉魚配合飼料。魚苗在出膜后3 d 開始投喂蛋黃，每天投喂6～8 次；5 d 用蛋黃和豐年蟲混合投喂，并逐步減少蛋黃使用量，每天投喂6～8 次；7 d 開始完全用豐年蟲投喂，每天投喂3～4 次；10 d 轉(zhuǎn)移至室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖，放養(yǎng)密度為100 尾/m2；20 d 開始用豐年蟲和微囊料混合投喂，并逐步減少豐年蟲使用量，每天投喂3～4 次；30 d 后完全用S1 至S5 規(guī)格微囊料，早晚各投喂1 次；投喂結(jié)束0.5 h 后及時吸出殘餌及糞便，避免水質(zhì)污染，魚苗培育過程中水溫控制在18～25 ℃；體長達(dá)3 cm 后投喂蛋白含量為30%～35%鯉魚配合飼料，投喂量為體重3%～5%，早晚各投喂1 次。

2 結(jié)果與分析

2.1 馴化

2.2 人工繁殖結(jié)果

2021 年共進(jìn)行3 次催產(chǎn)試驗(yàn)，結(jié)果見表1，合計獲得4 萬粒成熟受精卵。

表1 2021 年多線盤人工繁殖結(jié)果

表1 2021 年多線盤人工繁殖結(jié)果

時間2021-02-06 2021-02-28 2021-03-02合計人工授精尾52 26 26 104水溫℃20.3 21.2 20.8效應(yīng)時間h 6.5 6.5 6.5催產(chǎn)率%69.23 76.92 76.92獲成熟卵萬粒2 1 1 4

2.3 人工孵化結(jié)果

在人工授精完成后將受精卵放入孵化器淋水孵化，在18～22 ℃的水溫下，經(jīng)過84～120 h 孵化出膜，結(jié)果見表2。由表2 可知，第一批受精率和孵化率均較低，第二、三批受精率和孵化率顯著提高，共計獲得1.24 萬尾多線盤魚苗。

表2 2021 年多線盤人工孵化結(jié)果

表2 2021 年多線盤人工孵化結(jié)果

時間2021-02-06 2021-02-28 2021-03-02合計水溫℃19～21 20～22 18～22受精率%40 65 72孵化時間h 92～120 84～110 88～120孵化率%12.5 76.9 88.8獲魚苗數(shù)萬尾0.10 0.50 0.64 1.24

2.4 魚苗培育結(jié)果

3 小結(jié)

3.1 馴化

3.2 人工繁殖

受精卵的孵化會受到水溫、水質(zhì)和病害等各方面因素的影響［13］。研究發(fā)現(xiàn)，在一定溫度范圍內(nèi)孵化時間與水溫呈正相關(guān)，但較大的溫差會導(dǎo)致受精卵的死亡［14］。多線盤受精卵在孵化過程中應(yīng)控制水溫保持在18～22 ℃且溫差不超過2 ℃。2021年2 月6 日第1 批多線盤未將精卵分開收集，使用自來水激活，導(dǎo)致受精率低；受精卵使用孵化桶孵化，錐形孵化桶水流由底部垂直向上，在孵化桶壁上存在循環(huán)死角，導(dǎo)致水霉嚴(yán)重。在第2、3 批試驗(yàn)中使用移液槍收集精子后再與卵子混合并使用0.45%NaCl 溶液激活，受精率高；使用尤先科孵化器，同時參考張厚冰［15］的研究結(jié)果，及時手工使用膠頭滴管挑出死卵，使用0.3%的鹽水每天消毒2次，降低了水霉的發(fā)生，提高了孵化率。

3.3 魚苗培育