陳瀟飛，譚德俊，林先明，李 蓉，謝駿輝，艾倫強(qiáng)，王國(guó)貴，馬 進(jìn)，向極釬，朱云芬

（1.恩施土家族苗族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北恩施 445000；2.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所，湖北恩施 445000）

抗生素在養(yǎng)殖過程中起到重要的作用，可以有效防治病菌感染，對(duì)微生物病原菌有高效的抑制作用［1］。養(yǎng)殖過程中抗生素被濫用的情況較為常見，較多的抗生素被用來促進(jìn)飼料轉(zhuǎn)化率的提升，致使畜禽產(chǎn)品中抗生素含量超標(biāo)，危害人類健康。從2020 年1 月1 日起，國(guó)家明令禁止在飼料中添加抗生素，對(duì)于動(dòng)物性食品安全的改善起到關(guān)鍵的推進(jìn)作用。國(guó)內(nèi)畜禽養(yǎng)殖抗生素替代品的研究處于初步階段，尋求能控制成本、效果穩(wěn)定、易于實(shí)施的替代抗生素新品，是畜牧從業(yè)者所關(guān)注的問題。中國(guó)傳統(tǒng)的中草藥在提升免疫、抗病殺菌等方面有著獨(dú)到的作用。中草藥具有減少病菌耐藥性、改善腸道菌群的特點(diǎn)［2，3］。作為天然植物源藥用資源，中草藥有效含量較低、作用機(jī)制復(fù)雜，制約著中草藥在無抗養(yǎng)殖中的研究應(yīng)用。益生菌對(duì)于改善腸道菌群，提高微生物菌群多樣性，增強(qiáng)畜禽抗病能力也較為顯著［4］。本研究利用中草藥和益生菌在提升動(dòng)物機(jī)體免疫方面的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，結(jié)合不同的調(diào)控機(jī)制，對(duì)景陽雞實(shí)施無抗干涉試驗(yàn)，為應(yīng)用中草藥益生菌復(fù)合物促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體免疫能力的提升提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

枯草芽孢桿菌（1010CFU/100g）由恩施清江生物工程有限公司提供，土霉素和試驗(yàn)所需的中草藥由湖北元昌藥業(yè)有限公司提供。

景陽雞由湖北恩施建始縣景陽雞保種場(chǎng)提供，雞大小一致，30 日齡，共計(jì)180 羽。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)分為3 組，每組60 羽，分別為空白對(duì)照組、抗生素組和中草藥益生菌復(fù)合組（中益組）。中草藥、益生菌復(fù)合比例分組見表1。飼養(yǎng)方式為平養(yǎng)，飼養(yǎng)至180 日齡，每組隨機(jī)挑取6 羽，使用肝素鈉抗凝真空采血管頸靜脈采血，隨后進(jìn)行血常規(guī)測(cè)定，同時(shí)分離出血清，進(jìn)行免疫球蛋白G（IgG）、白細(xì)胞介素1（IL-1）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）等抗炎因子測(cè)定；采集胸腺、脾臟、法氏囊進(jìn)行器官免疫指數(shù)測(cè)定。器官免疫指數(shù)為免疫器官的重量占體重的比例［5］。試驗(yàn)期間所有試驗(yàn)雞苗做好程序免疫，并進(jìn)行系統(tǒng)飼養(yǎng)記錄。

表1 各組添加成分及比例

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS18.0 軟件進(jìn)行One-way ANOVA 顯著性分析，采用LSD 法進(jìn)行多重比較。統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”（Mean±SD）的形式表示，以P<0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，P<0.01 作為差異極顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 組間成活率的比較

根據(jù)飼養(yǎng)記錄，飼養(yǎng)180 d 后成活率如圖1 所示，中益組88.33%>抗生素組83.33%>空白對(duì)照組78.33%。

圖1 組間成活率的比較

2.2 器官免疫指數(shù)的比較

中草藥益生菌復(fù)合物對(duì)景陽雞免疫器官的發(fā)育起一定作用（表2），主要表現(xiàn)在法氏囊指數(shù)上，中益組和抗生素組法氏囊指數(shù)均高于對(duì)照組，中益組與抗生素組無顯著性差異（P>0.05）；在脾臟指數(shù)上，中益組與對(duì)照組存在顯著性差異（P<0.05）；三者在胸腺指數(shù)上無顯著性差異（P>0.05）。

表2 各組免疫器官的重量及免疫指數(shù)

2.3 血常規(guī)指標(biāo)的比較

血常規(guī)指標(biāo)見表3，中益組、抗生素組與對(duì)照組間白細(xì)胞數(shù)無明顯差異（P>0.05）；中益組、抗生素組均與對(duì)照組紅細(xì)胞數(shù)存在顯著差異（P<0.05）；中益組與抗生素組、對(duì)照組血紅蛋白差異顯著（P<0.05）；三者間血小板數(shù)無顯著性差異（P>0.05）。

表3 各組血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

2.4 抗炎因子及抗氧化性能的比較

抗炎因子及抗氧化性能的比較見表4，組間差異極顯著（P<0.01），抗炎因子檢測(cè)結(jié)果顯示，中益組含量均顯著高于抗生素組（P<0.01）。圖2 直觀地顯示出該種差異。

圖2 IgG、IL-1、SOD、GSH-px 含量測(cè)定結(jié)果

表4 各組血清抗炎因子測(cè)定結(jié)果 （單位：μg/mL）

3 小結(jié)與討論

中草藥益生菌復(fù)合物作為飼料添加劑應(yīng)用在景陽雞無抗養(yǎng)殖中，能不同程度地提高景陽雞成活率，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)其抗炎和抗氧化能力，可以全面提升景陽雞的免疫能力。

3.1 中草藥益生菌復(fù)合物對(duì)景陽雞成活率的影響

中草藥提高動(dòng)物機(jī)體抗病能力的研究較多，其作用機(jī)理主要集中在抗病毒、殺菌、增強(qiáng)自身體液免疫和細(xì)胞免疫［6］，直接反映的結(jié)果就是動(dòng)物成活率的提高。益生菌對(duì)改善動(dòng)物腸道健康，提升動(dòng)物免疫能力效果較為顯著。本研究中，飼喂中草藥益生菌復(fù)合組景陽雞的成活率高于抗生素組和對(duì)照組，吳詩樵等［7］在對(duì)揚(yáng)州鵝飼喂研究中使用中草藥飼料添加劑，顯著提高了揚(yáng)州鵝的成活率，本研究的結(jié)果與之相符。中草藥益生菌的配合組方在本試驗(yàn)中對(duì)提升景陽雞的成活效果顯著。

3.2 中草藥益生菌復(fù)合物對(duì)景陽雞器官免疫指數(shù)的影響

脾臟是最大的外周免疫器官，當(dāng)動(dòng)物機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答時(shí)，能夠參與吞噬病原菌，同時(shí)脾臟還是體液免疫和細(xì)胞免疫的應(yīng)答場(chǎng)所［8］。胸腺和法氏囊是重要的中樞免疫器官，而法氏囊屬于禽類特有器官，能夠分化產(chǎn)生淋巴細(xì)胞［9，10］。脾臟、胸腺和法氏囊的發(fā)育狀況能夠直接反映出動(dòng)物機(jī)體免疫狀況，免疫器官指數(shù)的高低決定了淋巴細(xì)胞的增值能力，機(jī)體免疫功能在一定范圍內(nèi)與器官指數(shù)呈正相關(guān)［11］。本研究中，中益組法氏囊指數(shù)高于對(duì)照組，與抗生素組相當(dāng)（P<0.05），表明中草藥和益生菌復(fù)合能夠誘導(dǎo)禽類法氏囊發(fā)育，增強(qiáng)景陽雞的免疫能力。

3.3 中草藥益生菌復(fù)合物對(duì)景陽雞血常規(guī)指標(biāo)的影響

血常規(guī)指標(biāo)反映了血液中細(xì)胞水平的變化。當(dāng)抗原入侵后，抗原通過組織黏膜表面的M 細(xì)胞以胞飲方式進(jìn)入細(xì)胞后對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行分解破壞，致使紅細(xì)胞數(shù)量減少［12］，機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答，刺激白細(xì)胞數(shù)急劇增多，吞噬病原菌維護(hù)機(jī)體的免疫平衡。趙德建［13］在研究小鼠沙門氏菌攻毒試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，攻毒后小鼠紅細(xì)胞數(shù)減少，白細(xì)胞數(shù)增多，進(jìn)行中藥復(fù)方干涉后，紅細(xì)胞數(shù)量逐漸恢復(fù)。這與本試驗(yàn)結(jié)果相似，景陽雞疫苗免疫后發(fā)生炎癥反應(yīng)，白細(xì)胞數(shù)增多，通過中草藥益生菌調(diào)節(jié)，細(xì)胞免疫應(yīng)答，抑制抗原激增，防止紅細(xì)胞數(shù)下降。

3.4 中草藥益生菌復(fù)合物對(duì)景陽雞抗炎因子及酶活性的影響

機(jī)體在代謝過程中會(huì)生成多種自由基，誘發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，致使細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷［14］。而動(dòng)物機(jī)體內(nèi)存在的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶可以清除體內(nèi)過多的自由基，維持自由基代謝平衡，修復(fù)氧化損傷。免疫球蛋白是受抗原刺激后由B 細(xì)胞分泌的能與對(duì)應(yīng)抗原結(jié)合的球蛋白，是參與體液調(diào)節(jié)的重要成分［15］。白細(xì)胞介素1 參與免疫調(diào)節(jié)，刺激T 細(xì)胞活化促進(jìn)B 細(xì)胞增殖并促使抗體產(chǎn)生，反映了機(jī)體的抗炎能力［16］。研究顯示，中益組IgG、IL-1、SOD、GSH-px 含量均極顯著高于對(duì)照組和抗生素組（P<0.01）。研究表明，添加中草藥和益生菌的復(fù)合物后，景陽雞的抗氧化能力顯著增強(qiáng)，體液免疫水平顯著升高，機(jī)體抗炎能力得到明顯加強(qiáng)。