苗春雷，孫啟星，李學(xué)偉，李巧連，朱新貴，2*

（1.李錦記（新會(huì)）食品有限公司，廣東 江門(mén) 529100；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院，廣東 廣州 510642）

醬油是以豆谷類(lèi)及其副產(chǎn)物為主要原料，經(jīng)潤(rùn)水、蒸料、制曲、發(fā)酵等工藝制成的具有獨(dú)特風(fēng)味的液體調(diào)味品[1]，是亞洲最受消費(fèi)者歡迎的烹飪及佐餐調(diào)味品之一。根據(jù)生產(chǎn)工藝的不同，我國(guó)釀造醬油可分為低鹽固態(tài)發(fā)酵醬油與高鹽稀態(tài)發(fā)酵醬油。低鹽固態(tài)發(fā)酵使用較低濃度（約10%～13%）的鹽水將曲料制成醬醅后置于較高溫度條件下進(jìn)行發(fā)酵，該工藝的發(fā)酵時(shí)間短、生產(chǎn)投入低，是20世紀(jì)70～80年代普遍采用的醬油發(fā)酵技術(shù)[2-3]。但低鹽固態(tài)發(fā)酵工藝存在著原料利用率低、產(chǎn)品風(fēng)味不足等缺點(diǎn)，目前已逐步被高鹽稀態(tài)發(fā)酵法所替代。高鹽稀態(tài)發(fā)酵法采用較高濃度（約17%～20%）的鹽水將曲料制成醬醪后進(jìn)行稀態(tài)發(fā)酵，生產(chǎn)周期一般在3～6個(gè)月。發(fā)酵過(guò)程中，以米曲霉（Aspergillus oryzae）為主的微生物分泌出多種酶類(lèi)將曲料中的大分子有機(jī)物酶解為小分子的可溶性氮及可溶性糖，在長(zhǎng)時(shí)間的發(fā)酵過(guò)程中通過(guò)一系列復(fù)雜的氧化反應(yīng)、美拉德反應(yīng)等化學(xué)反應(yīng)最終得到鮮咸適口、香氣濃郁的液體調(diào)味品[4]。

醬醪中的微生物對(duì)原料的蛋白質(zhì)和碳水化合物等主要營(yíng)養(yǎng)成分緩慢的分解與代謝形成了醬油獨(dú)特的風(fēng)味[5]，發(fā)酵過(guò)程中添加的食鹽則構(gòu)成了醬油的基味。通常條件下成品醬油的含鹽量約為16%～18%，這在發(fā)酵過(guò)程中也起到抑制醬醪中有害微生物繁殖的作用，同時(shí)鈉離子與氨基酸形成的鈉鹽也貢獻(xiàn)著醬油的鮮味[6-7]。根據(jù)《中國(guó)居民膳食指南》，居民日均食鹽攝入量應(yīng)不高于6 g，但受飲食文化的影響，導(dǎo)致國(guó)民實(shí)際生活中的食鹽攝入水平遠(yuǎn)高于健康標(biāo)準(zhǔn)的上限[8]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，較高的鈉攝入量會(huì)極大增加人體腎臟負(fù)擔(dān)，同時(shí)增加患高血壓等心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)[9-10]。因此為滿足人們?nèi)罕妼?duì)生活品質(zhì)及食品健康的雙重需求，調(diào)味品低鹽化已成為未來(lái)調(diào)味品行業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)。醬油作為國(guó)內(nèi)銷(xiāo)量及使用量最高的調(diào)味品，其脫鹽工藝已成為近年研究的熱點(diǎn)問(wèn)題，并以電滲析、納濾以及離子交換法作為主要的研究方向[11-12]。其中電滲析脫鹽技術(shù)的原理是在電勢(shì)差的驅(qū)動(dòng)下，醬油中的離子朝著電場(chǎng)兩側(cè)的陰陽(yáng)離子交換膜運(yùn)動(dòng)，利用膜的選擇透過(guò)性使離子在膜的另一側(cè)富集以達(dá)到脫鹽的目的[13]。如今電滲析脫鹽技術(shù)經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展和完善其工藝已趨于成熟，可以滿足一定規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。但在脫鹽處理過(guò)程中，醬油的部分氨基酸、揮發(fā)性物質(zhì)及有色物等主要成分會(huì)遷移進(jìn)入鹽液，因此這些副產(chǎn)的鹽液略帶有鮮味及醬油香氣。脫鹽過(guò)程中產(chǎn)生的鹽液體積通常為醬油原液體積的50%～100%，其較高的鹽分無(wú)法直接排放，且進(jìn)行廢水處理成本較高，因此隨著未來(lái)對(duì)醬油脫鹽產(chǎn)能的擴(kuò)大，應(yīng)實(shí)現(xiàn)合理回收及利用加工過(guò)程中分離的鹽液以達(dá)到經(jīng)濟(jì)效益最大化。

本研究采用電滲析法對(duì)醬油進(jìn)行脫鹽處理，試驗(yàn)醬油中各組分在不同電滲析參數(shù)下的遷移率以及在鹽液中的回收情況以確定最佳試驗(yàn)參數(shù)，并對(duì)回收到的鹽液進(jìn)行理化指標(biāo)的檢測(cè)，確定鹽液的呈味物質(zhì)以及風(fēng)味物質(zhì)構(gòu)成。分析各組分在電滲析過(guò)程中的遷移情況，以期為醬油脫鹽過(guò)程中回收鹽液的再利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

醬油樣品：李錦記（新會(huì)）食品有限公司；甲醛、氫氧化鈉、氯化鈉（均為分析純）：廣州化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

GCM-E-10電滲析系統(tǒng)：國(guó)初科技（廈門(mén)）有限公司；7820A-5977B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometer，GC-MS）分析系統(tǒng)、DBWA×U2色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）：美國(guó)安捷倫公司；794自動(dòng)電位滴定儀：瑞士萬(wàn)通公司；L-8900全自動(dòng)氨基酸分析儀：日本日立公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理方法

量取1 000 mL醬油與等體積的三級(jí)水分別置于三角瓶中并與電滲析設(shè)備連通，配制3%NaCl溶液500 mL置于三角瓶中與設(shè)備連通作為電解液。試驗(yàn)溫度為25 ℃，循環(huán)流量為1.0 L/min，醬油NaCl目標(biāo)含量降低至13%以下?？疾祀姖B析電壓對(duì)醬油主要成分遷移情況的影響時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期研究數(shù)據(jù)及設(shè)備極限參數(shù)將電壓依次設(shè)置為10 V、11 V、12 V、13 V、14 V對(duì)醬油進(jìn)行脫鹽處理，電滲析時(shí)間為20 min?？疾祀姖B析時(shí)間對(duì)醬油主要成分遷移情況的影響時(shí)，將電滲析電壓固定為13 V，其他試驗(yàn)條件不變，并于15～35 min每5 min進(jìn)行取樣并測(cè)定。

1.3.2 樣品理化指標(biāo)的測(cè)定

樣品氨基酸態(tài)氮（amino acid nitrogen，AAN）、總酸（total acid，TA）、氯化鈉的含量參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18186—2000《釀造醬油》中的方法進(jìn)行測(cè)定[14]。

AAN（TA）損失率、鹽分脫除率計(jì)算公式如下：

1.3.3 游離氨基酸組成的測(cè)定

參照《實(shí)用食物營(yíng)養(yǎng)成分分析手冊(cè)》使用全自動(dòng)氨基酸分析儀進(jìn)行測(cè)定[15]。

游離氨基酸遷移率計(jì)算公式如下：

1.3.4 風(fēng)味物質(zhì)的測(cè)定

使用GC-MS進(jìn)行分析，參照鄒謀勇等[16]的方法，并對(duì)樣品預(yù)處理方式進(jìn)行改進(jìn)。取2 mL樣品置于樣品瓶中，加入1 g NaCl使溶液飽和后置于50 ℃水浴中萃取30 min。氣相色譜條件：以氦氣（He）為載氣，流速1.0 mL/min，固相微萃取小柱進(jìn)樣時(shí)間為2 min，不分流，吹掃流量15 mL/min，吹掃2 min，色譜柱升溫程序?yàn)?0 ℃保持5 min；2 ℃/min升至150 ℃，保留0 min；再以5 ℃/min升至240 ℃，保留10 min。質(zhì)譜條件：采用電子電離（electron ionization，EI）源，電子能量為70 eV，檢測(cè)器電壓為857 V，掃描速度為2.00 scans/s，掃描范圍為20～350 m/z；進(jìn)樣口和離子源溫度分別為250 ℃和230 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同電滲析電壓條件下醬油主要成分遷移情況

在脫鹽過(guò)程中，采用不同的電壓對(duì)醬油進(jìn)行電滲析處理，試驗(yàn)20 min后電滲析電壓對(duì)醬油樣品NaCl脫除率、AAN損失率、TA損失率見(jiàn)圖1，電滲析電壓對(duì)鹽液中NaCl、AAN、TA含量的影響見(jiàn)圖2。由圖1可知，醬油的NaCl脫除率隨著電滲析電壓的升高逐漸增大，但增加至13 V后脫鹽的速率明顯放緩。在電滲析電壓為14 V時(shí)，處理后醬油的NaCl脫除率為31.67%；隨著電滲析電壓的升高，醬油樣品的AAN及TA損失率變化不大，僅呈現(xiàn)略微下降趨勢(shì)，基本維持在15%～17%。由圖2可知，在不同的試驗(yàn)電壓條件下，鹽液的AAN及TA同樣并未隨NaCl含量的增加同步得到積累，電滲析電壓13 V、14 V的試驗(yàn)組得到的鹽液中測(cè)得NaCl含量分別為4.91 g/100 mL、5.04 g/100 mL，AAN含量差別不大，分別為0.089 g/100 mL、0.083 g/100 mL，總酸含量同樣差異較小，分別為0.119 g/100 mL、0.116 g/100 mL。這可能是由于電滲析所用的離子交換膜具有的選擇透過(guò)性，使離子水和半徑小、帶電量較低的Na+和Cl-比AAN及TA更易通過(guò)[17]。所以此范圍內(nèi)的電壓變化對(duì)醬油中NaCl產(chǎn)生的影響較大。同時(shí)觀察到在電滲析電壓增大至13 V后NaCl的積累速率開(kāi)始放緩，且在損失率未發(fā)生明顯變化時(shí)AAN及TA積累量略微降低，這可能是由于接近極限電流，電壓導(dǎo)致醬油中的肽類(lèi)發(fā)生鹽析沉積導(dǎo)致[18]，或因過(guò)高的電壓導(dǎo)致膜表面產(chǎn)生濃差極化現(xiàn)象導(dǎo)致膜電導(dǎo)率下降使電滲析效率降低[19]。因此，綜合考慮到醬油中主要成分的遷移速率以及高電壓對(duì)膜可能造成的不利影響，將電滲析脫鹽的運(yùn)行電壓選取在13 V進(jìn)行。

圖1 不同電滲析電壓對(duì)醬油NaCl脫除率及氨基酸態(tài)氮、總酸損失率的影響Fig.1 Effect of different electrodialysis voltages on the removal rate of NaCl and the loss rate of amino acid nitrogen and total acid of soy sauce

圖2 不同電滲析電壓對(duì)鹽液中NaCl、氨基酸態(tài)氮、總酸含量的影響Fig.2 Effect of different electrodialysis voltages on contents of NaCl,amino acid nitrogen and total acid in salt solution

2.2 不同電滲析時(shí)間條件下醬油主要成分遷移情況

在13V的電滲析電壓條件下對(duì)醬油進(jìn)行電滲析脫鹽處理，電滲析時(shí)間對(duì)醬油NaCl脫除率及ANN、TA損失率的影響見(jiàn)圖3，電滲析時(shí)間對(duì)鹽液中NaCl、AAN、TA含量的影響見(jiàn)圖4。由圖3可知，隨著電滲析時(shí)間的增加，醬油各主要組分持續(xù)向鹽液遷移，NaCl和AAN的遷移速率隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸放緩，但TA的遷移率持續(xù)增加并在20 min后其損失率顯著高于ANN。在電滲析30 min后，醬油的NaCl脫除率達(dá)到41.97%，已達(dá)到減鹽目標(biāo)，繼續(xù)脫鹽則可能導(dǎo)致滲透壓過(guò)低不利于對(duì)腐敗菌的抑制。由圖4可知，隨著電滲析時(shí)間的增加，鹽液中NaCl、ANN、TA含量均逐漸增加，在電滲析30 min后，鹽液中的NaCl和ANN含量增加放緩。本研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)時(shí)間的電滲析處理雖可大幅度降低醬油中的NaCl含量至40%以上，但是同時(shí)伴隨著部分風(fēng)味物質(zhì)的遷移，因此回收得到的鹽液具有一定的醬油風(fēng)味并略帶鮮味。最終回收的鹽液為淡黃色的澄清液體，表明少量有色物質(zhì)也隨水分的遷移進(jìn)入了鹽液。因此，綜合考慮到醬油防腐效果及風(fēng)味，將電滲析脫鹽的運(yùn)行時(shí)間選取在30 min。

圖3 不同電滲析時(shí)間對(duì)醬油NaCl脫除率及氨基酸態(tài)氮、總酸損失率的影響Fig.3 Effect of different electrodialysis time on removal rate of NaCl and loss rate of amino acid nitrogen and total acid in soy sauce

圖4 不同電滲析時(shí)間對(duì)鹽液中NaCl、氨基酸態(tài)氮、總酸含量的影響Fig.4 Effect of different electrodialysis time on contents of NaCl,amino acid nitrogen and total acid in salt solution

在電滲析電壓13 V、電滲析時(shí)間30 min條件下，原醬油樣品、減鹽醬油及鹽液中NaCl、AAN、TA含量見(jiàn)表1。由表1可知，原醬油樣品中NaCl含量由18.54 g/100 mL減少至12.51 g/100 mL，鹽液中NaCl含量積累至6.60 g/100 mL，同時(shí)有較多的風(fēng)味物質(zhì)一同遷移進(jìn)入鹽液，鹽液中AAN和TA含量分別為0.135 g/100 mL、0.208 g/100 mL。

表1 醬油及鹽液中各主要組分含量Table 1 Contents of major components in soy sauce and salt solution

2.3 鹽液中游離氨基酸組成及回收率分析

在研究得到的較優(yōu)試驗(yàn)條件：電滲析電壓13 V、電滲析時(shí)間30 min的脫鹽處理后，檢測(cè)回收到的鹽液中游離氨基酸組成并與原醬油樣品進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 醬油及鹽液中游離氨基酸組成及遷移率Table 2 Composition and mobility of free amino acids in soy sauce and salt solution

由表2可知，原醬油中谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸及賴(lài)氨酸含量較高，總體風(fēng)味協(xié)調(diào)，鮮咸適口，總游離氨基酸含量為4.080%。由于在電滲析過(guò)程中氨基酸的分子質(zhì)量以及結(jié)構(gòu)的不同會(huì)導(dǎo)致其在電場(chǎng)作用下的運(yùn)動(dòng)特性存在差異[20]，因此鹽液中的游離氨基酸組成和原醬油樣品相比較存在較大差異。由表2亦可看出，在醬油脫鹽過(guò)程中遷移至鹽液中的總游離氨基酸的含量為0.305%，總遷移率為7.77%，其中鮮味氨基酸谷氨酸、天冬氨酸的遷移率較低，而呈甜味及苦味氨基酸甘氨酸、組氨酸、精氨酸和賴(lài)氨酸等遷移率較高，這可能是由于這些氨基酸的等電點(diǎn)與醬油pH值相差較遠(yuǎn)，在醬油中以帶電的形式存在從而在電滲析過(guò)程中由于電場(chǎng)的作用下遷移速度較快[21]；最終鹽液中回收到的游離氨基酸中，丙氨酸、亮氨酸和賴(lài)氨酸含量較高，由于亮氨酸和賴(lài)氨酸為具有苦味的氨基酸[22]，因此鹽液除略帶鮮味還呈現(xiàn)出了一定的淡苦味及厚味。

2.4 鹽液中風(fēng)味物質(zhì)組成

使用GC-MS對(duì)原醬油樣品以及電滲析后回收到鹽液中的風(fēng)味物質(zhì)進(jìn)行定性分析，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 原醬油及鹽液中風(fēng)味物質(zhì)構(gòu)成Table 3 Composition of flavor compounds in original soy sauce and salt solution

由表3可知，原醬油樣品中共檢測(cè)到25種風(fēng)味物質(zhì)，其中有17種風(fēng)味物質(zhì)在電滲析脫鹽處理后的鹽液中被檢出。這表明在脫鹽過(guò)程中大部分風(fēng)味物質(zhì)也發(fā)生了遷移。原醬油樣品中存在的13種醇類(lèi)物質(zhì)中，有10種在電滲析過(guò)程中發(fā)生了遷移，其中包括傳統(tǒng)高鹽稀態(tài)發(fā)酵醬油中所含有的關(guān)鍵性風(fēng)味物質(zhì)糠醇以及苯乙醇[23]。其他風(fēng)味物質(zhì)如酯類(lèi)、酚類(lèi)、醛類(lèi)等也在電滲析的過(guò)程中存在不同程度的遷移，但原醬油樣品中檢測(cè)到的酸類(lèi)物質(zhì)在回收到的鹽液中未檢測(cè)到，這可能是由于其透過(guò)率較低或在電場(chǎng)的作用下發(fā)生了分解。鹽液中還檢出了較多對(duì)于醬油風(fēng)味構(gòu)成具有較大影響的醬油特征性風(fēng)味物質(zhì)，如3-甲硫基丙醇、3-甲基-1-丁醇、4-乙基愈創(chuàng)木酚、羥基丙酮等，其中苯乙醇和4-乙基愈創(chuàng)木酚均是由醬醪中的生香酵母在發(fā)酵后期合成的具有高沸點(diǎn)的香氣成分，苯乙醇為具有玫瑰花香氣的風(fēng)味物質(zhì)[24]、4-乙基愈創(chuàng)木酚為具有煙熏及辛香的風(fēng)味物質(zhì)[25]，二者的風(fēng)味閾值較低并對(duì)醬油的特征性風(fēng)味構(gòu)成占有較關(guān)鍵的主導(dǎo)作用。因此電滲析后回收到的鹽液在感官上呈現(xiàn)有一定的醬油特征風(fēng)味，具有淡豉香、醇香并略帶有醬香。

3 結(jié)論

在使用電滲析法對(duì)醬油進(jìn)行脫鹽處理的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)部分氨基酸等呈味物質(zhì)以及揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)在電場(chǎng)作用下會(huì)與NaCl一同遷移進(jìn)入鹽液并逐步積累。脫鹽過(guò)程中，雖電壓對(duì)醬油中鹽分遷移率的影響較大而對(duì)風(fēng)味組分的影響相對(duì)于較小，但AAN及TA仍會(huì)隨著時(shí)間在鹽液中得到積累，且TA的遷移率較高。在電滲析電壓13 V、處理時(shí)間30 min條件下，醬油的氨基酸態(tài)氮（AAN）及總酸（TA）的損失率較低，且NaCl脫除率達(dá)41.97%。此時(shí)鹽液中NaCl、AAN、TA含量分別為6.60 g/100 mL、0.135 g/100 mL、0.208 g/100 mL。在氨基酸的遷移過(guò)程中，鮮味氨基酸的遷移率遠(yuǎn)低于甜味及苦味氨基酸，因此印證了鹽液在感官上除略呈現(xiàn)鮮味外還存在寡淡后苦味的原因。部分揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)在脫鹽過(guò)程中也存在著遷移，這使得鹽液口感及風(fēng)味上均呈現(xiàn)出一定的醬油感官。本研究在不同電滲析條件下對(duì)醬油進(jìn)行脫鹽處理，研究得到了較優(yōu)的試驗(yàn)條件，并分析了醬油中主要風(fēng)味組分的遷移率、回收鹽液游離氨基酸與揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的構(gòu)成，為醬油電滲析脫鹽條件設(shè)計(jì)及回收鹽液的再利用提供了理論基礎(chǔ)。