袁曉文 袁詩(shī)韻 梁景星 吳國(guó)新 吳智鑫 張 欣 關(guān)紫云▲

1.廣東省佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東佛山 528200；2.廣東省佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院急診科，廣東佛山 528200；3.廣東省人民醫(yī)院南海醫(yī)院病案統(tǒng)計(jì)科，廣東佛山 528251；4.廣東省佛山市中醫(yī)院ICU，廣東佛山 528200；5.廣東省佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院婦科，廣東佛山 528200

近年來(lái)，女性不孕不育癥的發(fā)病率逐年上升，在門(mén)診流產(chǎn)患者統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)胚胎停止發(fā)育的比例不斷增高，已高度引起社會(huì)以及醫(yī)務(wù)工作者的關(guān)注。在一些環(huán)境污染嚴(yán)重的地方，女性不孕不育的發(fā)病率更高，不少學(xué)者針對(duì)何種因素導(dǎo)致女性不孕不育發(fā)病率的增加進(jìn)行研究。女性不孕不育癥的影響因素有很多，可分為內(nèi)分泌、陰道、宮頸、輸卵管和盆腔-腹膜等[1]。其中感染因素作為影響女性不孕不育的一個(gè)重要因素引起了學(xué)者們的高度關(guān)注[2-3]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，8%～12%的育齡夫婦出現(xiàn)不孕不育，其中生殖道感染的占20%～60%，導(dǎo)致不孕不育癥的一個(gè)關(guān)鍵原因是女性生殖道急性和慢性感染，而生殖道支原體（Mycoplasma genitalium，Mg）和沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis，CT）是引起生殖道炎癥的重要病原體[4]。近年以來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)自身免疫失調(diào)也可能導(dǎo)致不孕不育，抗子宮內(nèi)膜抗體（anti endometrial antibodies，EmAb）就是引起不孕不育的一個(gè)重要免疫性抗體[5]。基于此，本研究探討CT 和Mg 與女性不孕不育的相關(guān)性，為治療女性不孕不育提供理論基礎(chǔ)和指導(dǎo)意見(jiàn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年3月佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院收治的165 例不育不孕患者作為病例組，選取同期100 例正常生育女性為對(duì)照組。病例組患者年齡21～45 歲，平均（29.92±4.63）歲；原發(fā)性不孕不育78 例，繼發(fā)性不孕不育87 例。對(duì)照組患者年齡23～46歲，平均（30.90±4.49）歲。兩組患者的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病例組患者符合《婦產(chǎn)科學(xué)》中關(guān)于不孕不育的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②患者染色體正常；③有1年正常性生活，未采取任何避孕措施，而未懷孕者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在精神障礙者、內(nèi)分泌失調(diào)、排卵障礙等引起不孕者；②生殖器畸形者；③合并嚴(yán)重器質(zhì)病變者。所有患者及其家屬均知情同意；本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 用醫(yī)用棉拭子深入女性宮頸口中旋轉(zhuǎn)1 周，停留10 s 后取出陰道分泌物，將拭子頭置于1 ml 生理鹽水中浸泡，選取500 μl 浸泡液與500 μl尿樣保存液混合，該樣本為待測(cè)樣本。空腹抽兩組患者靜脈血液，離心后留取血清，將血清放在-20℃冰箱中保存待測(cè)EmAb。

1.2.2 儀器與試劑 ABIPrism 7500 型熒光定量PCR儀，Mg 和CT 檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自上海仁度生物科技有限公司。FC 型酶標(biāo)儀，抗子宮內(nèi)膜抗體免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）抗體檢測(cè)試劑購(gòu)自濰坊市康華生物技術(shù)有限公司。

1.2.3 樣本檢測(cè) Mg 和CT 檢測(cè)：進(jìn)行實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照試劑盒以及儀器操作說(shuō)明書(shū)，同時(shí)設(shè)置陰性、陽(yáng)性和內(nèi)標(biāo)對(duì)照。采用實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)（simultaneous amplification and testing，SAT） 進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為42℃1 min，40 個(gè)循環(huán)，熒光素通道設(shè)定為F1（FAM）和F2（HEX 或者VIC），熒光信號(hào)收集每分鐘進(jìn)行一次。陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的dt 值應(yīng)滿足以下條件，否則，實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效，需重新進(jìn)行。①陽(yáng)性對(duì)照，F(xiàn)1 通道： 陽(yáng)性對(duì)照dt≤臨界弱陽(yáng)性對(duì)照dt≤35，同時(shí)熔解曲線在68±5℃區(qū)間有吸收峰，F(xiàn)2 通道有或者無(wú)數(shù)值；②陰性對(duì)照，F(xiàn)1 通道：dt 無(wú)數(shù)值或?yàn)?0，熔解曲線在68±5℃區(qū)間無(wú)吸收峰，同時(shí)F2 通道：dt<35?？棺訉m內(nèi)膜抗體IgG 抗體檢測(cè)：采用免疫酶聯(lián)法測(cè)定患者血清抗子宮內(nèi)膜IgG 抗體，試劑盒購(gòu)于濰坊市康華生物技術(shù)有限公司，操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。EmAb 結(jié)果判斷：Cut-off value（COV）參考值計(jì)算：COV=NC×3； 若NC<0.100，則按0.100 計(jì)算，NC>0.100 時(shí)，按實(shí)際值計(jì)算。陽(yáng)性判定：樣品吸光度（optical density，OD）值（S）COV≥1.0，說(shuō)明該待測(cè)樣本EmAb IgG 結(jié)果為陽(yáng)性；陰性判定：樣品OD 值（s）CO<10，說(shuō)明該待測(cè)樣本EmAb IgG 結(jié)果為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組患者M(jìn)g 及CT 的陽(yáng)性檢出率、 病例組中Mg 或CT 陽(yáng)性患者與陰性患者的EmAb 陽(yáng)性率、生殖道CT 及Mg 感染與女性不孕不育的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者生殖道CT 及Mg 陽(yáng)性檢出率的比較

病例組患者M(jìn)g 和CT 陽(yáng)性檢出率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），Mg 和CT 合并感染有8 例，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 兩組患者生殖道CT及Mg 陽(yáng)性檢出率的比較[n（%）]

2.2 病例組中Mg 或CT 陽(yáng)性患者與陰性患者EmAb陽(yáng)性率的比較

病例組165 例不孕不育患者中EmAb 陽(yáng)性13例，EmAb 陰性152 例；Mg 和CT 陽(yáng)性患者的EmAb 陽(yáng)性率高于Mg 和CT 陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

表2 病例組中Mg 或CT 陽(yáng)性患者與陰性患者EmAb 陽(yáng)性率的比較[n（%）]

2.3 CT、Mg 和EmAb 與女性不孕不育的相關(guān)性分析

Spearman 相關(guān)性分析顯示生殖道CT 及Mg 感染與女性不孕不育成正相關(guān)（P<0.05）（表3）。

表3 CT、Mg 和EmAb 與女性不孕不育的相關(guān)性分析

3 討論

隨著社會(huì)的高速發(fā)展，人們交往頻繁，性觀念不斷變化，泌尿道生殖道疾病由于不潔性行而不斷蔓延，而人們?nèi)狈ΡＷo(hù)意識(shí)，嚴(yán)重缺乏性衛(wèi)生相關(guān)知識(shí)，泌尿道生殖道感染疾病不斷增多，對(duì)人類身體健康造成嚴(yán)重威脅[6]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，8%～12%的育齡夫婦會(huì)出現(xiàn)不孕不育，其中生殖道感染有關(guān)的占20%～60%，導(dǎo)致不孕不育的一個(gè)重要原因是女性生殖道急性和慢性感染，而Mg、CT 是誘發(fā)泌尿道生殖道炎癥的重要病原體[4]。

Mg 能在無(wú)生命的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖，在動(dòng)物或者人的腔道黏膜上存在的原核微生物。它在人體腔道的黏膜上寄宿，當(dāng)機(jī)體免疫力下降或黏膜受損，可誘發(fā)人體的泌尿系統(tǒng)感染[7]。Risser 等[8]報(bào)道，支原體感染可通過(guò)引起女性泌尿生殖道阻塞、粘連和炎癥從而成為造成女性不孕癥的主要原因之一。方智淑等[9]報(bào)道，支原體感染既可單獨(dú)引起盆腔炎癥，還可協(xié)同其他病原體促進(jìn)盆腔炎癥的發(fā)生，進(jìn)而導(dǎo)致女性不孕不育。衣原體也是一種原核微生物，如果黏膜衣原體感染，其產(chǎn)生的疤痕可能會(huì)導(dǎo)致輸卵管炎后致不育，而CT 是革蘭氏陰性病原體，它有始體和原體兩種發(fā)育形式，而原體的感染力很強(qiáng)，它偏向于侵入柱狀上皮細(xì)胞，所以其主要靶器官是宮頸[10]。CT 侵入人體后主要存在于糞便、精液、尿道分泌物、宮頸及宿主細(xì)胞內(nèi)，它經(jīng)過(guò)性交、直接的體液交換和親密接觸來(lái)傳播，在泌尿道感染中，CT 感染已成為歐洲國(guó)家性傳播疾病的首位病原體，CT 感染率在我國(guó)也有上升趨勢(shì)[11]。CT 和Mg 主要通過(guò)性行為傳播，導(dǎo)致自然流產(chǎn)和胚胎停止發(fā)育的概率較大，由于抗生素的濫用，病原菌耐藥性不斷增強(qiáng)，防治CT 成為一個(gè)難題[12-13]。

本研究結(jié)果顯示，病例組患者M(jìn)g 和CT 陽(yáng)性檢出率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示不孕不育與生殖道Mg 和CT 感染有一定的關(guān)系。本研究進(jìn)一步證實(shí)了實(shí)生殖道CT 及Mg 感染均與婦女的不孕不育存在相關(guān)性。女性感染Mg 或CT 后，炎癥可以沿生殖道上行，引發(fā)輸卵管阻塞、輸卵管炎癥、子宮內(nèi)膜炎癥等，炎癥一方面可通過(guò)直接影響女性卵子運(yùn)行和受精、受精卵運(yùn)行、胚胎著床發(fā)育來(lái)引起不孕或流產(chǎn)，炎癥另一方面還可通過(guò)引起單核巨噬細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞聚集置炎癥部位，同時(shí)吞噬受損的組織，進(jìn)而誘發(fā)免疫反應(yīng)，造成機(jī)體自身丟失或重復(fù)的配子，進(jìn)而會(huì)形成染色體單體或部分染色體三體的合子，從而致使受精卵卵死亡最終流產(chǎn)[14]。

EmAb 是育齡婦女針對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥、子宮內(nèi)膜炎等病理情況而產(chǎn)生的免疫抗體，婦女子宮內(nèi)膜正常情況下在卵巢激素的調(diào)節(jié)下產(chǎn)生周期性剝落，然后隨月經(jīng)排出，所以一般不會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生自身免疫抗體[10，15-16]。本研究結(jié)果顯示，Mg 和CT 陽(yáng)性患者的EmAb 陽(yáng)性率高于Mg 和CT 陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示不孕不育患者的EmAb 的產(chǎn)生和Mg、CT 感染有一定關(guān)系，生殖道感染可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生EmAb。女性患者生殖道感染后，損傷子宮內(nèi)膜，巨噬細(xì)胞吞噬損傷的組織，誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)，產(chǎn)生EmAb。

綜上所述，CT 和Mg 與女性不孕不育具有相關(guān)性，應(yīng)當(dāng)引起高度關(guān)注，而EmAb 的產(chǎn)生與生殖道Mg、CT 感染有關(guān)，可作為輔助診斷女性不孕不育的重要有效手段。從優(yōu)生優(yōu)育角度考慮，可將CT、Mg 和EmAb 列入孕前篩查，同時(shí)也列入不孕不育常規(guī)檢查，有助于早發(fā)現(xiàn)、早治療，從而減少泌尿生殖道感染引起的不孕不育，提高優(yōu)生優(yōu)育水平。