荊夢(mèng)君 陳 葳

西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安 710061

肺癌是當(dāng)今全球癌癥致死的首位原因，占癌癥致死總數(shù)的18%，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康，也給社會(huì)公共衛(wèi)生系統(tǒng)造成了極大的負(fù)擔(dān)[1]。有資料顯示肺癌晚期患者的中位生存期不足一年[2]，因此早期篩查和診斷肺癌，對(duì)于改善患者預(yù)后至關(guān)重要。近年來(lái)，各種研究表明，在癌癥發(fā)展初期，機(jī)體的免疫系統(tǒng)就可以識(shí)別腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的異常蛋白，又稱(chēng)腫瘤相關(guān)抗原，分泌針對(duì)這些抗原的自身抗體，稱(chēng)為腫瘤相關(guān)自身抗體（tumor associated autoantibody，TAAB），由于免疫系統(tǒng)的敏感性和穩(wěn)定性，可在影像學(xué)診斷出肺癌的5年前被檢出[3-4]。這種自身抗體的檢測(cè)具有無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便易測(cè)且靈敏度及特異度均較高的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)發(fā)現(xiàn)早期肺癌具有重要的臨床價(jià)值[5]。本研究擬探討7 種腫瘤相關(guān)自身抗體（7-TAABs），即p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE-A1、CAGE，和腫瘤標(biāo)志物鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原（squamous cell carcinoma，SCC）、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、細(xì)胞角蛋白19 片段（cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1）的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷價(jià)值，以期為肺癌篩查提供更有利的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年12月至2021年7月西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的149 例肺癌患者為肺癌組，選取同期86 例肺部良性疾病患者為對(duì)照組。肺癌組中，男93 例，女56 例；平均年齡（62.9±9.5）歲；腺癌82 例，鱗癌52 例，小細(xì)胞肺癌15 例；Ⅰ～Ⅱ期60 例，Ⅲ～Ⅳ期89 例。對(duì)照組中，男52 例，女34 例；平均年齡（60.4±10.5）歲；非特異性炎性結(jié)節(jié)患者33 例，機(jī)化性肺炎患者24 例，肺結(jié)核患者15 例，肺錯(cuò)構(gòu)瘤患者10 例，其他類(lèi)型患者4 例。兩組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)： ①肺癌組患者病理活檢確診為肺癌，符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南（2018 版）的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②年齡18～85 歲，首次確診，未行放療、化療、手術(shù)或靶向治療；③組織病理分型、TNM 分期明確及其他臨床資料、輔助檢查資料完整；④患者及家屬簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有自身免疫性疾病和血液病；②合并有其他嚴(yán)重并發(fā)癥，如糖尿病、缺血性心臟病等；③合并其他胸外腫瘤病史；④?chē)?yán)重精神障礙患者且不能配合研究者。

1.2 方法

兩組研究對(duì)象于清晨空腹?fàn)顟B(tài)采外周靜脈血樣4 ml，以離心半徑10 cm、轉(zhuǎn)速4000 r/min 離心10 min分離血清，8 h 內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。7-TAABs 選用杭州凱保羅生物科技有限公司生產(chǎn)的檢測(cè)試劑盒，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)。7-TAABs 陽(yáng)性判斷值分別為：p53＞13.1 U/ml，PGP9.5＞11.1 U/ml，SOX2＞10.3 U/ml，GAGE7＞14.4 U/ml，GBU4-5＞7.0 U/ml，MAGE-A1＞11.9 U/ml，CAGE＞7.2 U/ml。SCC、CEA、CYFRA21-1 使用德國(guó)羅氏全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及羅氏公司提供的配套試劑盒，采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)。各腫瘤標(biāo)志物參考范圍為：SCC<2.7 ng/ml、CEA<5 ng/ml、CYFRA21-1<3.3 ng/ml。

利用靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分析自身抗體和腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的診斷價(jià)值。靈敏度=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%；特異度=真陰性/（假陽(yáng)性+真陰性）×100%；準(zhǔn)確度=（真陽(yáng)性+真陰性）/總例數(shù)×100%；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陽(yáng)性）×100%；陰性預(yù)測(cè)值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)于符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）的形式進(jìn)行描述，采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，對(duì)于不符合正態(tài)分布的資料，用中位數(shù)（下四分位數(shù)，上四分位數(shù)）[M（P25，P75）]進(jìn)行描述，組間比較采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清7-TAABs 和腫瘤標(biāo)志物水平的比較

肺癌組患者血清中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE-A1 抗體以及3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物SCC、CEA、CYFRA21-1 水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），CAGE 抗體水平與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1、2）。

表1 兩組患者7-TAABs 水平比較[U/ml，M（P25，P75）]

表2 兩組患者腫瘤標(biāo)志物水平比較[ng/ml，M（P25，P75）]

2.2 兩組患者7-TAABs 和腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率比較

7-TAABs 聯(lián)合檢測(cè)、3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)及7-TAABs 聯(lián)合3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。同時(shí)在肺癌組患者中，7-TAABs+3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率最高，為83.22%（表3）。

表3 兩組患者7-TAABs 和3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率比較[n（%）]

2.3 7-TAABs 與3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)肺癌患者的診斷效能

7-TAABs 聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為57.72%，準(zhǔn)確度為68.51%，陰性預(yù)測(cè)值為54.35%，均高于單項(xiàng)抗體檢測(cè)結(jié)果。三種聯(lián)合檢測(cè)組合里，7-TAABs +3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測(cè)值最高，分別為83.22%、79.15%、71.26%（表4）。

表4 7-TAABs 和3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷價(jià)值[%（n/N）]）

3 討論

據(jù)資料顯示，肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，患者的5年生存率僅為15%左右[7-8]。然而，肺癌早期發(fā)病隱匿，多數(shù)患者就診時(shí)已經(jīng)為中晚期，因此肺癌的早期診斷已成為臨床上的重大難題。目前，對(duì)于肺癌的各種篩查手段中，CT 檢查假陽(yáng)性率高達(dá)96.4%，且具有篩查過(guò)度和輻射誘發(fā)腫瘤的危險(xiǎn)，病理學(xué)檢查也具有創(chuàng)傷性和標(biāo)本取材困難的缺陷，均限制了臨床應(yīng)用[9-10]。

腫瘤自身抗體作為一種新型的血清標(biāo)志物，其檢測(cè)創(chuàng)傷小，標(biāo)本易獲得，且半衰期長(zhǎng)達(dá)30 d，穩(wěn)定性好，受到了臨床的廣泛關(guān)注[11]。p53 是最早發(fā)現(xiàn)的抑癌基因之一，參與DNA 修復(fù)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其突變促進(jìn)了癌癥的發(fā)生、發(fā)展[12]。PGP9.5 是一種泛素水解酶，在早期肺癌中就可呈高表達(dá)狀態(tài)[13]。SOX2 是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，可促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖[14]。GAGE7、GBU4-5、MAGE-A1 和CAGE 均屬于腫瘤/睪丸基因家族，多表達(dá)于惡性腫瘤和睪丸組織，不在正常的組織中表達(dá)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增值以及擴(kuò)散起到了重要作用[15-16]。

此研究顯示，7-TAABs 中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE-A1 這6 項(xiàng)自身抗體水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與Du 等[17]的結(jié)論略有差異，其研究結(jié)果認(rèn)為肺癌組7 種自身抗體的水平均明顯高于肺部良性病變組。此次研究中CAGE 抗體在肺癌組中檢測(cè)水平較低，可能與樣本量及樣本組成不同、 試劑靈敏度不高以及患者間個(gè)體差異有關(guān)，還需要擴(kuò)大樣本量深入研究。7-TAABs 單項(xiàng)抗體檢測(cè)的特異度（96%～100%）較高，但靈敏度較低，僅分布于為5%～19%之間，并且準(zhǔn)確度低于50%，并不能滿(mǎn)足臨床篩查肺癌的需要，將自身抗體進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)后，靈敏度（57.72%）和特異度（87.21%）均達(dá)到了較高的水平，并且準(zhǔn)確度提高至68.51%，與陳志等[18]的研究結(jié)論基本相同，提示7-TAABs 聯(lián)合檢測(cè)能有效鑒別肺癌人群與肺部良性疾病人群，具有更好的診斷效能。但由于本研究中良性病例納入的人數(shù)較少，所以特異度稍低。Dai 等[19]學(xué)者研究結(jié)果顯示自身抗體聯(lián)合檢測(cè)的敏感性達(dá)到了68.9%，優(yōu)于本研究，原因可能與所選抗體譜不同、試劑靈敏度和人群差異等因素有關(guān)。

另外，本研究顯示3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于肺癌篩查也具有較高的靈敏度 （67.79%） 和特異度（83.72%），有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。一項(xiàng)前期的研究結(jié)果[20]顯示7-TAABs 組比傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物具有更高的敏感性，但此次研究中得出腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度稍高于7-TAABs 組，出現(xiàn)這種情況的原因可能是腫瘤標(biāo)志物水平為腫瘤負(fù)荷的標(biāo)志，與腫瘤分期相關(guān)，本研究肺癌組中晚期患者納入相對(duì)較多，已有大量的特異性蛋白進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，因而腫瘤標(biāo)志物檢出率高，相比于早期肺癌，其對(duì)中晚期肺癌可能更有診斷意義，此結(jié)論還需深入研究。進(jìn)一步分析抗體與腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，7-TAABs + 3 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)在肺癌組患者中陽(yáng)性率（83.22%）明顯上升，其陽(yáng)性率明顯高于7-TAABs 聯(lián)合檢測(cè)和3項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)。雖然聯(lián)合檢測(cè)損失了一部分特異度，但靈敏度和準(zhǔn)確度提升至83.22%和79.15%，同時(shí)陰性預(yù)測(cè)值明顯提高至71.26%，表明如果患者該聯(lián)合測(cè)定結(jié)果均為陰性，診斷為肺部良性疾病的可能性可達(dá)71.26%，提示了該聯(lián)合檢測(cè)具有較高的排除非肺癌患者的能力。以上結(jié)論均表明抗體與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)可針對(duì)更多基因靶點(diǎn)，提高肺癌檢出率，降低漏診率和誤診率，協(xié)助臨床醫(yī)生對(duì)肺癌患者進(jìn)行更準(zhǔn)確的診斷。但本研究中小細(xì)胞肺癌和處于Ⅰ+Ⅱ期肺癌患者樣本量相對(duì)較少，后續(xù)研究可增加樣本量，豐富患者類(lèi)型，研究不同病理類(lèi)型和組織分型之間各抗體水平的差異，得出更可靠的結(jié)果。

綜上所述，血清7 種腫瘤相關(guān)自身抗體聯(lián)合檢測(cè)可作為鑒別肺部良惡性疾病的一種高效且可靠的方法，并且與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物結(jié)合可提高診斷效能，為肺癌的診斷和篩查提供更有利的依據(jù)。