韋小敏，馬亞宣，李先芳

(河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院 動物醫(yī)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046)

女貞子為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實，其性涼，味甘、苦，歸肝、腎經(jīng)，有滋補肝腎、明目烏發(fā)的功能。常用于治療肝腎陰虛、眩暈耳鳴、腰膝酸軟、須發(fā)早白、目暗不明、內(nèi)熱消渴、骨蒸潮熱等癥[1]。女貞子歷代應(yīng)用的炮制方法有10 余種，但臨床上以生品和酒制品的應(yīng)用最為廣泛[2]。其酒制方法主要有酒蒸、酒燉和酒炙，具體實踐中酒制的時間長短有著很大的差異，有2 h、3 h、4 h、8 h，甚至有3 d者[3]。

女貞子經(jīng)過不同炮制后，其臨床功效會發(fā)生變化。生女貞子飲片以清肝明目、滋陰潤燥為主，酒制后滋補肝腎作用顯著增強[4]。這些改變必然與其內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)的變化密切相關(guān)。女貞子化學(xué)成分主要有萜類、環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類、黃酮類、揮發(fā)油、脂肪酸等幾大類，此外還有多糖、微量元素；其中最具活性成分和藥用價值的屬三萜類、環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類，其各自代表成分為齊墩果酸、特女貞苷和紅景天苷[5,6]。女貞子中齊墩果酸含量較大且藥理作用豐富，在抑制腫瘤細(xì)胞增長、抗炎、降脂、提高免疫等方面都有很好的療效[7]，2005年版《中國藥典》[8]將齊墩果酸作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。環(huán)烯醚萜類化合物是單萜類化合物的代謝產(chǎn)物，特女貞苷是其中的主要成分，具有保肝利膽、降血糖、調(diào)血脂、抗衰老以及調(diào)節(jié)免疫等功效[9]，自2010年后一直被《中國藥典》[1，10]定為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本實驗以不同的酒制(酒蒸、酒燉)方法和時間為影響因素，以特女貞苷、齊墩果酸的含量為指標(biāo)，考察不同炮制工藝對女貞子主要成分變化的影響，為整體評價女貞子質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 女貞子藥材

冬季，女貞子果實成熟后，在河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院校園采摘，除去雜質(zhì)和病蟲害果實，洗凈，置沸水中略燙后，置陰涼通風(fēng)處干燥，得凈女貞子原藥材。

本品經(jīng)河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院中藥教研室程茂高老師鑒定，確為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實。

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀；電子天平；高速萬能粉碎機；電子恒溫不銹鋼水浴鍋；電熱鼓風(fēng)干燥箱；圓底燒瓶；回流冷凝管等。

1.3 實驗方法

1.3.1 女貞子的炮制[11]取女貞子原藥材200 g，等份置于4個燒杯中，加20%的黃酒拌勻，用鋁箔紙蓋嚴(yán)，悶潤至酒被完全吸盡后，置不銹鋼鍋內(nèi)蒸2 h、4 h、8 h、10 h，取出干燥。

取女貞子原藥材200 g，等份置于4個燒杯中，加20%的黃酒拌勻，用鋁箔紙蓋嚴(yán)，悶潤至酒被完全吸盡后，置于不銹鋼鍋內(nèi)隔水燉2 h、4 h、8 h、10 h，取出干燥。

1.3.2 樣品的預(yù)處理 將上述凈女貞子和用不同酒制方法炮制過后的女貞子飲片，用萬能粉碎機粉碎至能通過三號篩，而后稱取各樣品粉末約2 g，放置于干燥后的稱量瓶中，精密稱定。把瓶蓋打開后，在105 ℃的干燥箱內(nèi)干燥5個小時，然后把瓶蓋蓋好轉(zhuǎn)移置干燥器中，放冷約三十分鐘后精密稱定，再在上述溫度下干燥1小時，放冷，再次稱重，直到連續(xù)兩次稱重的差異不大于5 mg為止[12]。以此干燥后的粉末作為供試品，分別測定其中的齊墩果酸和特女貞苷含量。

1.3.3 齊墩果酸的含量測定[13]精密稱取5.25 mg齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品，放到25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度后，配成濃度為0.210 mg/mL的齊墩果酸對照品溶液，搖勻，用0.45微米微孔濾膜濾過，作為對照品溶液。精密吸取上述齊墩果酸對照品溶液0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL，然后用甲醇定容到10mL的容量瓶中。選用色譜柱Kromasil C 18 (5 μm，4.6 mm×200 mm)；流動相為甲醇-水(86∶14)；柱溫30 ℃；流速1.0 mL/min；進樣量10 μL；在波長208 nm下檢測其峰面積。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=2184.2X+240.4，R2=0.9992。表明齊墩果酸在 0.0084 ～0.042 mg/mL 濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

準(zhǔn)確稱取各樣品粉末1 g，放到100 mL的圓底燒瓶內(nèi)，依次用20 mL、15 mL、10 mL無水乙醇在80 ℃的恒溫水浴鍋中進行回流提取，每次提取3 min，而后用濾紙濾過，再將3次濾過后的濾液合并到100mL的容量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液備用。分別取上述制得的供試品溶液 10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算各樣品的齊墩果酸含量。

1.3.4 特女貞苷的含量測定[1]精密稱取6.25 mg特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)品，放到25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度后，配成濃度為0.250 mg/mL的特女貞苷對照品溶液，搖勻，用0.45微米微孔濾膜濾過，精密吸取特女貞苷對照品溶液0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL，用甲醇定容到10 mL的容量瓶中。選用色譜柱Kromasil C 18 (5 μm，4.6 mm×200 mm)；流動相為甲醇-水(40∶60)；柱溫30 ℃；流速1.0 mL/min；進樣量10 μL；在波長224 nm下檢測其峰面積。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到特女貞苷的回歸方程為：Y=11881X-46.226，R2=0.9998，表明特女貞苷在0.01～0.05 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

準(zhǔn)確稱取各樣品粉末0.5 g，放到圓底燒瓶中，加入50%的乙醇50 mL，再次稱定其重量，在80 ℃的恒溫水浴鍋中回流提取1 h，取出放冷后，再稱定重量，并用50%的乙醇補足減失的重量，后用濾紙濾過后轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，搖勻，再用0.45 μm的微孔濾膜濾過，得續(xù)濾液[13]。分別取上述制得的供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算各樣品的特女貞苷含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 酒蒸對女貞子中齊墩果酸和特女貞苷含量的影響

女貞子酒蒸不同時間后，飲片中的齊墩果酸含量見圖1。結(jié)果顯示，女貞子酒蒸后齊墩果酸的含量與生品相比較明顯增加，并且在酒蒸4個小時的時候達(dá)到最高，其后隨著蒸制時間的延長又呈下降趨勢。女貞子酒蒸不同時間后，飲片中的特女貞苷含量見圖2。從圖2可以看出，女貞子酒蒸后，特女貞苷含量與生品相比較有所降低，且隨著酒蒸時間的延長，特女貞苷的含量逐漸降低。

圖1 不同酒蒸時間齊墩果酸含量變化

圖2 不同酒蒸時間特女貞苷含量變化

2.2 酒燉對女貞子中齊墩果酸和特女貞苷含量的影響

結(jié)果顯示，女貞子經(jīng)酒燉后，其主要有效成分齊墩果酸含量較生品明顯增加，并且在酒燉4小時的時候，齊墩果酸含量達(dá)到最高，其變化趨勢見圖3。女貞子經(jīng)酒燉后，其主要有效成分特女貞苷含量與生品相比較有所減少，且隨著酒燉時間的延長，特女貞苷的含量逐漸降低。其變化趨勢見圖4。

圖3 不同酒燉時間齊墩果酸含量變化

圖4 不同酒燉時間特女貞苷含量變化

2.3 女貞子酒制工藝的綜合評價分析

徐維統(tǒng)等[13]以齊墩果酸和特女貞苷為綜合評判指標(biāo)，優(yōu)選了酒蒸女貞子的最佳炮制工藝。他們根據(jù)齊墩果酸和特女貞苷這兩個指標(biāo)成分在工藝選擇中的主次地位，分別給予了齊墩果酸 60% 和特女貞苷40% 的加權(quán)系數(shù)，求出綜合質(zhì)量評分，分值最高的即為最佳炮制工藝。本實驗參考該方法來綜合評價女貞子的炮制工藝。根據(jù)Y=(各樣品中齊墩果酸含量÷9個樣品中齊墩果酸最高含量)×60%+(各樣品中特女貞苷含量÷9個樣品中特女貞苷最高含量)×40%，將所得到的實驗數(shù)據(jù)進行計算，求出綜合評價值Y，其結(jié)果見表1。

表1 女貞子炮制工藝的綜合評價

根據(jù)計算結(jié)果看出，在酒蒸4 h的時候，其綜合評價值最高。因此，本實驗顯示，女貞子較佳的酒制工藝為酒蒸4 h。

3 討論

中藥有效成分受炮制方法的影響。采用不同炮制方法處理，會對女貞子化學(xué)成分的含量產(chǎn)生一定影響[14，15]。本實驗通過對女貞子生品和不同酒制品中齊墩果酸和特女貞苷含量比較, 研究酒制對女貞子的影響。結(jié)果表明，女貞子經(jīng)酒制后，其有效成分齊墩果酸的含量增加，這是因為酒制改變了細(xì)胞壁的通透性，產(chǎn)生了某些助溶和脫吸附作用，從而提高了齊墩果酸的溶出效率[13]。本實驗所測得的每個樣品中的特女貞苷含量變化趨勢和前人研究結(jié)果一致，都是隨著酒制時間的延長，炮制品中特女貞苷含量逐漸降低[16]，但是均達(dá)到了藥典0.70%的要求[1]。特女貞苷含量之所以降低，是因為其性質(zhì)不穩(wěn)定，經(jīng)較長時間加熱酒制后，在高溫及水蒸氣的作用下會水解生成紅景天苷，紅景天苷進一步水解生成酪醇所致[4，6]。

女貞子中有多種不同類型的化學(xué)成分。其中最具活性成分和藥用價值的屬齊墩果酸和特女貞苷[5]。雖然特女貞苷的藥理作用強大且專屬性較強[16]，但是前人的研究發(fā)現(xiàn)，酒女貞子中特女貞苷的含量因炮制方法和時間不同而差異較大，因此本實驗以齊墩果酸和特女貞苷的含量變化作為綜合指標(biāo)加以評判，并分別給予60%和40%的加權(quán)系數(shù)，求出綜合質(zhì)量評分，以考察女貞子不同炮制工藝之間的差別，更具科學(xué)性。根據(jù)綜合質(zhì)量評分，得出女貞子較佳的酒制工藝為酒蒸4 h。此結(jié)果可為酒制女貞子工藝條件提供參考。