李 杉，覃子龍，陸梅元，馬秀梅，曾海生

（1.廣西壯族自治區(qū)食品藥品審評查驗中心，南寧 530029；2.柳州市質量檢驗檢測研究中心，廣西 柳州 545001；3.右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院，廣西 百色 533000）

金線草為蓼科植物金線草［Antenoron filiforme（Thunb.）Roberty et Vantier］的全草，別名重陽柳、毛蓼、人字草等［1］，主要分布于廣西、云南、湖南、湖北等地。金線草主要含有黃酮類、有機酸、香豆素等化學成分［2，3］。金線草味澀微苦，性平，有活血舒筋、行氣止痛、抗菌消炎、止血生肌等功效，用于跌打損傷、外傷出血、勞傷等疾?。?，4，5］。黃酮類化合物是一類植物體內的次級代謝產物，具有清除自由基、抗腫瘤、抗病毒、抗炎和抗菌等作用，且無毒無害，廣泛應用于食品、藥品、保健品等領域［6］。

本研究采用薄層色譜法對金線草藥材進行鑒別，使用高效液相色譜法對金線草中的蘆丁、槲皮素、山奈酚的含量進行測定，建立其藥材鑒別和含量測定方法，并為開展藥材品質評價、建立該藥材質量控制方法及進一步開發(fā)利用提供了科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材 金線草藥材于2020年9月采自廣西靖西市，金線草由右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥學部曾海生副主任藥師鑒定為蓼科植物金線草［Antenoron filiforme（Thunb.）Roberty et Vantier］的全草。樣品陰干，粉碎至備用。

1.1.2 試藥 硅膠G薄層板；甲醇、乙醇、甲酸乙酯、甲酸、氯仿、二氯甲烷（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；乙腈（美國Fisher公司，色譜純）；磷酸為分析純。蘆丁對照品（批號：205128，上海融禾醫(yī)藥科技有限公司）；槲皮素對照品（批號：100081-200408，中國藥品生物制品檢定所）；山柰酚對照品（批號：110861-202012，中國藥品生物制品檢定所）。

1.1.3 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀（Agilent 1260色譜工作站、DAD檢測器）、電子分析天平（AG1353型，瑞士Mettler-Toledo公司）、超聲波清洗器（KQ-250-B型，昆山市超聲儀器有限公司）、101A-3E型電熱鼓風干燥箱（上海實驗儀器廠有限公司）。

1.2 薄層鑒別

1.2.1 對照品溶液的制備 使用電子分析天平分別精密稱取適量蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品，利用甲醇溶液溶解并分別定容至10 mL容量瓶中，制得濃度分別為0.72、0.98、0.85 mg/mL的對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取金線草1 g，放入具蓋錐形瓶中，然后加入25 mL甲醇溶液，稱定其重量，加熱回流提取1 h，趁熱濾過，蒸干，殘渣加入1 mL甲醇溶液使其溶解，作為供試品溶液。

1.2.3 薄層層析條件 硅膠G薄層板（10 cm×10 cm）；吸取供試品溶液6μL，蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品溶液2μL，分別點于同一塊硅膠G板上，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（10∶3∶1.5）為展開劑，展開，晾干，噴3%三氯化鋁-乙醇溶液，晾干，置紫外燈（360 nm）下檢視。

1.3 HPLC含量測定

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸（B）水溶液，梯度洗脫（0～20 min，10%-＞32%A；21～45 min，32%-→48%A；46～60 min，48%-→62%A；61～80 min，62%-→10%A），流速：1 mL/min，進樣量：10μL，柱溫：30℃，檢測波長：370 nm。色譜峰與其他雜質峰有很好的分離度（圖1）。

圖1 對照品（A）和樣品甲醇提取物（B）色譜圖

1.3.2 制備對照品溶液 使用電子分析天平分別精密稱取適量蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品，甲醇溶解并定容至10 mL的容量瓶中，制得濃度分別為0.25、0.18、0.42 mg/mL的混合對照品溶液。

1.3.3 樣品的制備 精密稱取金線草1.0 g，放入具蓋錐形瓶中，然后加入25 mL甲醇，稱定其重量，加熱回流提取1 h，冷卻到室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，輕搖后濾過，取續(xù)濾液離心后過0.22μm濾膜，即得樣品溶液。

2 結果與分析

2.1 薄層鑒別試驗結果

薄層色譜圖試驗發(fā)現(xiàn)，金線草藥材在與蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品斑點的相同位置處，均有相同顏色斑點，且斑點較清晰（圖2）。

圖2 金線草藥材TLC鑒別

2.2 方法學結果

2.2.1 線性關系 在“1.3.1”色譜條件依次進樣10μL，以濃度（x）為橫坐標，峰面積（y）為縱坐標繪制標準曲線，即得各成分線性回歸方程及相關系數(shù)分別為：蘆?。簓=17 905x-15.915，r=0.999 4，在濃度為2.12～100.80μg/mL范圍內線性關系良好；槲皮素：y=33 029x-9.054，r=0.999 8，在 濃 度 為25.50～758.86μg/mL范圍內線性關系良好；山奈酚：y=30 464x+0.722 3，r=0.999 5，在濃度為2.62～250.48 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.2.2 精密度 精密吸取“1.3.2”項下混合對照品溶液，按照“1.3.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，分別記錄對應的峰面積，蘆丁、槲皮素、山奈酚峰面積的RSD分別為0.56%、0.32%和0.89%，表明該方法精密度良好。

2.2.3 重復性 精密稱取金線草藥材粗粉共6份，每份1.0 g，按照“1.3.3”項下方法制備金線草樣品溶液，分別精密吸取樣品溶液10μL，按照“1.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，蘆丁、槲皮素、山奈酚的RSD分別為2.12%、1.45%和2.06%，表明該方法重復性良好。

2.2.4 穩(wěn)定性 精密稱取金線草藥材粗粉1.0 g，按照“1.3.3”項下方法制備成樣品溶液，精密吸取樣品溶液10μL，分別在0、3、6、9、12、24 h后于上述色譜條件下進樣，蘆丁、槲皮素、山奈酚的RSD分別為1.28%、1.96%和1.52%，表明樣品在24 h內穩(wěn)定。

2.2.5 加樣回收率 精密稱取金線草藥材粗粉6份，每份0.5 g，并加入適量的蘆丁對照品、槲皮素對照品、山奈酚對照品，各待測成分平均回收率（n=6）分 別 為98.42%、101.21%、97.92%；RSD分 別 為1.90%、2.78%、2.35%，表明該測定方法測定結果準確、可靠。

2.3 含量測定結果

精密稱取3份金線草藥材樣品1.0 g，按照“1.3.3”項下方法制備金線草藥材樣品溶液，按照“1.3.1”項下色譜條件進行測定、計算，按照外標一點法計算藥材樣品中蘆丁、槲皮素和山柰酚的含量（每個樣品重復進樣3次，取平均值），結果見表1。

表1 廣西靖西市產金線草中3種黃酮成分的含量（n=3）（單位：mg/g）

3 小結

通過對樣品制備方法、展開劑等因素的考察，對金線草藥材中蘆丁、槲皮素、山奈酚成分薄層鑒別進行了分析，表明該方法具有較好的分離效果，樣品與對照品的斑點均較易檢出，且具有良好的重現(xiàn)性。運用高效液相色譜法測定金線草中蘆丁、槲皮素、山奈酚的含量，操作簡單、準確可靠，可作為金線草藥材質量控制、資源評價等工作的參考。