梁艷輝,邢征宇,劉 斌,姚傳華,魏 丹

(海南省食品藥品檢驗所?？诜炙Ｄ?海口 570100)

氟康唑為三唑類第三代抗真菌藥，被用于各種真菌感染特別是對隱球菌、念珠菌和皮膚真菌具有良好的抗菌作用[1-2]。《中國藥典》2020年版二部收載的氟康唑原料藥的含量測定為電位滴定法，該方法操作繁瑣[3]。本文參考《中國藥典》2020年版二部氟康唑原料藥有關(guān)物質(zhì)項下檢測方法和其制劑項下含量測定方法選擇了兩種系統(tǒng)對氟康唑原料藥的含量進行了方法學(xué)研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Agilent 1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；XS205DU 型電子天平，梅特勒-托利多(上海)有限公司。

1.2 試 藥

氟康唑原料藥(批號：210902)，海南沙汀寧制藥有限公司；氟康唑?qū)φ掌?批號：100314-201906，含量：99.8%)，中國食品藥品檢定研究院；氟康唑雜質(zhì)Ⅰ(批號：130699-201501，含量：99.1%)，中國食品藥品檢定研究院；甲醇和乙腈均為色譜純，其它試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 高效液相色譜法

在系統(tǒng)1和系統(tǒng)2的色譜條件相同的部分為色譜柱均為ACE Excel 5 C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流速均為1.0 mL·min-1，進樣量均為20 μL，柱溫均為40 ℃，方法系統(tǒng)適用性要求為氟康唑與雜質(zhì)Ⅰ的分離度大于1.5，理論塔板數(shù)大于2000。流動相比例和實驗結(jié)果系統(tǒng)使用性見表格1。

表1 高效液相色譜法中色譜條件

2.2 溶液的配制

對照品溶液：精密稱取氟康唑?qū)φ掌芳s50 mg+分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相→50 mL。

供試品液溶液：精密稱取氟康唑樣品約50 mg+分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相→50 mL。

雜質(zhì)Ⅰ對照品溶液配制：精密稱取雜質(zhì)Ⅰ對照品約10mg+分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相→10 mL。

系統(tǒng)適用性溶液的配制：精密稱取氟康唑10 mg+分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相+精密量取雜質(zhì)Ⅰ對照品溶液1 mL→10 mL。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 專屬性試驗

精密稱取氟康唑樣品約50 mg，置50 mL容量瓶中，加系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相溶解后分別做如下處理：(1)酸破壞：加 1 mol/L鹽酸溶液0.2 mL，放置1 h，再加1 mol/L氫氧化鈉溶液0.2 mL中和，再分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相稀釋至刻度；(2)堿破壞：加入1 mol/L氫氧化鈉溶液0.2 mL，放置1 h，再加1 mol/L鹽酸溶液0.2 mL中和，再分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相；(3)氧化破壞：加入30%過氧化氫溶液0.2 mL，放置 1 h，再分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相溶解并稀釋定容至刻度；(4)高溫破壞：取本品置80 ℃烘箱放置3 h，精密稱取50 mg，置50 mL量瓶中，再分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相溶解并稀釋定容至刻度，搖勻。(5)光照破壞：取本品光照破壞24 h，精密稱取50 mg，置50 mL量瓶中，再分別用系統(tǒng)1和系統(tǒng)2流動相溶解并稀釋定容至刻度，搖勻。按2.1.1項下的色譜條件測定，詳見圖1。結(jié)果表明，原料藥在酸、堿、光和熱的破壞試驗中，未出現(xiàn)其他雜質(zhì)。在氧化破壞的條件下產(chǎn)生較多降解雜質(zhì)，各雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均大于1.5，表明本法的專屬性良好。在將原料藥制備成制劑時，應(yīng)重點關(guān)注其在氧化環(huán)境中產(chǎn)生的雜質(zhì)會影響到制劑的穩(wěn)定性，預(yù)知未知雜質(zhì)，則需要進一步研究。

圖1 系統(tǒng)1和系統(tǒng)2高效液相色譜破壞圖

2.3.2 線性范圍試驗

系統(tǒng)1中氟康唑?qū)φ掌啡芤哼M樣量在3.1048～31.0478 μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=116.9X+7.765，r=1；系統(tǒng)2中氟康唑?qū)φ掌啡芤哼M樣量在2.0958～31.4370 μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=115.15X+5.61，r=1。

2.3.3 重復(fù)性和精密度試驗

精密稱取氟康唑6份樣品，按照2.2要求稀釋后，平行測定6次，系統(tǒng)1中6份樣品的平均含量為99.7%，RSD為0.3%(n=6)；系統(tǒng)2中6份樣品的平均含量為99.4%，RSD為0.2%(n=6)，結(jié)果表明氟康唑樣品在系統(tǒng)1和系統(tǒng)2中均具有良好的重復(fù)性和精密度。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗

供試品溶液在系統(tǒng)1和系統(tǒng)2中連續(xù)12小時進樣檢測，樣品含量RSD分別為0.05%和0.09%，表明樣品在12小時內(nèi)穩(wěn)定性較好，能夠滿足檢驗要求，結(jié)果見表2。

表2 系統(tǒng)1和系統(tǒng)2穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.3.5 檢測限與定量限

將對照品溶液逐級進行稀釋，測得其檢測限(S/N=3)和定量限(S/N=10)，系統(tǒng)1中的檢測限為2.0958 ng，定量限為8.3832 ng；系統(tǒng)2中的檢測限為0.0414 ng，定量限為1.0349 ng。

2.3.6 耐用性試驗

在系統(tǒng)1和系統(tǒng)2中其他條件不變的情況下分別考察了氟康唑6份樣品在調(diào)整流速和柱溫發(fā)生變化時，其含量的變化情況?？紤]到系統(tǒng)誤差和人為誤差后，流速和柱溫發(fā)生變化后，兩兩比較的RSD值均在合理的范圍內(nèi)，具體實驗過程中可以根據(jù)實驗室的條件選擇合適的實驗方案，結(jié)果分別見表3和表4。

表3 系統(tǒng)1和系統(tǒng)2不同流速對含量測定的影響

表4 系統(tǒng)1和系統(tǒng)2不同柱溫對含量測定的影響

3 結(jié) 論

本實驗考察了兩種系統(tǒng)對氟康唑的影響，實驗表明兩種流動相系統(tǒng)對含量檢測結(jié)果影響相差不大，系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果表明系統(tǒng)1的分離度和理論塔板數(shù)優(yōu)于系統(tǒng)2?！吨袊幍洹?020年版二部中，系統(tǒng)1是原料藥的有關(guān)物質(zhì)檢測系統(tǒng)，系統(tǒng)2則用于其制劑中含量測定和有關(guān)物質(zhì)。試驗對方法的專屬性進行全面考察，通過破壞實驗結(jié)果表明，降解雜質(zhì)與主成分分離度均符合要求，王成剛[4]報道了在專屬性考察中保留時間約為17.5 min的雜質(zhì)是由生產(chǎn)工藝過程中產(chǎn)生；嚴小紅[5]報道了氟康唑中未知雜質(zhì)均在主峰相對保留時間1.5以上，均能與主峰獲得良好分離，對含量測定結(jié)果無干擾。耐用性試驗表明合理范圍內(nèi)的條件參數(shù)變化，對結(jié)果影響較小，表明方法耐用性良好。

原料藥的純度要求高，限度要求嚴格，一般為99.0%～102.0%，含量測定更加注重結(jié)果的準確性?！吨袊幍洹?020年版對氟康唑原料藥的含量測定采用的是非水溶液滴定法，隨著現(xiàn)代藥品檢測技術(shù)的提高，高效液相色譜法既可用于定性分析又可用于定量分析，檢測結(jié)果準確度靈敏度均較高，在藥品研發(fā)、質(zhì)量控制和檢測等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。方法驗證試驗表明，兩種系統(tǒng)均可用于氟康唑原料藥的含量測定，且可優(yōu)選系統(tǒng)1的方法。