徐 斌，董春霞，陳忠瓊，曾 政*，蔣佳利，邵東東

(1.重慶市巴南區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，重慶 401320；2.重慶市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，重慶 401147)

弓形蟲病(Toxoplasmosis)是由剛地弓形蟲(Toxoplasmagongdii)引起的一種人獸共患寄生原蟲病[1]。弓形蟲呈世界性分布，可感染所有溫血?jiǎng)游铩Ｈ?、犬和家畜等是弓形蟲的中間宿主，貓是終末宿主[2]。終末宿主糞便中的卵囊(孢子化后)、終末宿主和中間宿主組織中的速殖子及包囊，均可引起人和動(dòng)物感染。犬和貓可通過消化道、呼吸道、胎盤、皮膚等途徑感染并傳播弓形蟲病。弓形蟲可引起人和動(dòng)物的發(fā)熱、生長(zhǎng)發(fā)育障礙、流產(chǎn)、死胎等，弓形蟲病甚至?xí)斐擅庖吖δ艿拖抡叩乃劳鯷3]。全球人類弓形蟲感染率較高，血清陽(yáng)性率平均25%～50%，部分國(guó)家和地區(qū)甚至高達(dá)85%以上[4]。寵物飼養(yǎng)者的弓形蟲陽(yáng)性率明顯高于普通人群[5-6]。本研究隨機(jī)收集了重慶市部分地區(qū)2019年的犬和貓血清樣品，應(yīng)用ELISA對(duì)犬和貓弓形蟲感染情況進(jìn)行調(diào)查[7]，以期為重慶市弓形蟲病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本 789份犬血清樣本于2019年采自重慶市18個(gè)區(qū)縣的城市寵物犬和農(nóng)村家養(yǎng)犬，其中城市寵物犬血清432份，農(nóng)村家養(yǎng)犬血清357份，76份貓血清樣本采自重慶市渝北區(qū)。

1.1.2 主要試劑 ID Screen?弓形體抗體檢測(cè)試劑盒-多種動(dòng)物(試劑批號(hào)：F35)，法國(guó)ID-VET公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 SunriseTM光吸收酶標(biāo)儀、HYDROSPEED洗板機(jī)-96/384高速洗板機(jī)，瑞士帝肯(TECAN)公司產(chǎn)品；恒溫恒濕箱，德國(guó)美墨爾特(MEMMERT)公司產(chǎn)品； MultidropTMCombi自動(dòng)分液器，美國(guó)賽默飛世爾(ThermoFisher)公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 犬和貓弓形蟲抗體檢測(cè)方法 試劑使用前恢復(fù)至室溫(21℃±5℃)，輕搖顛倒或振蕩混合均勻。血清樣本10倍稀釋：在ELISA反應(yīng)板上每孔加入90 μL 2號(hào)緩沖稀釋液，在A1和B1孔加入10 μL陰性對(duì)照，在C1和D1孔加入10 μL陽(yáng)性對(duì)照，剩余每孔加入10 μL待測(cè)樣本。室溫孵育45 min±4 min。棄去孔內(nèi)液體，加入約300 μL洗液(1×)洗板3次，洗板間隔應(yīng)避免微孔干燥。用3號(hào)緩沖稀釋液將濃縮酶標(biāo)抗體(10×)稀釋10倍為酶標(biāo)抗體(1×)，每孔加入100 μL酶標(biāo)抗體。蓋住反應(yīng)板，室溫孵育30 min±3 min。棄去孔內(nèi)液體，加入約300 μL洗液(1×)洗板3次。每孔加入100 μL底物溶液，室溫避光孵育15 min±2 min。每孔加入100 μL終止液終止反應(yīng)。在450 nm波長(zhǎng)處讀取吸光值(OD)，具體操作按說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

計(jì)算每個(gè)樣本的SP值：S/P%=[(OD樣品-ODNc)/(ODPC-ODNc)]×100%

樣品S/P%≤40%為陰性，40%～50%為可疑，≥50%為陽(yáng)性。對(duì)于犬血清，IDvet驗(yàn)證顯示，40%～70%的ELISA結(jié)果很難被IFAT解讀。因此，IDvet建議犬血清有更寬的可疑區(qū)(40%～70%)。試驗(yàn)結(jié)果中陽(yáng)性對(duì)照平均OD值(ODPC)應(yīng)大于0.350，陽(yáng)性和陰性對(duì)照平均OD值(ODPC和ODNc)的比值應(yīng)大于3，否則需重新試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 弓形蟲抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

共檢測(cè)渝北區(qū)(城市)寵物貓血清樣本76份，檢出弓形蟲抗體陽(yáng)性5份，陽(yáng)性率為6.58%。共檢測(cè)18個(gè)區(qū)縣犬血清樣本789份，檢出弓形蟲抗體陽(yáng)性159份，陽(yáng)性率為20.15%。14個(gè)區(qū)縣檢出了犬弓形蟲抗體陽(yáng)性樣本，陽(yáng)性率從0～55%，其中有11個(gè)區(qū)縣(主城區(qū)5個(gè)，渝東北5個(gè)，渝東南1個(gè))弓形蟲陽(yáng)性率達(dá)到10%以上(表1)。

2.2 不同來源犬、貓血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

犬和貓對(duì)弓形蟲都存在一定程度的感染，不同來源的犬弓形蟲感染陽(yáng)性率都很高，且差異極顯著(P<0.01)，其中，農(nóng)村家養(yǎng)犬弓形蟲感染陽(yáng)性率最高為29.97%，其次為城市寵物犬，陽(yáng)性率為12.04%；城市寵物貓感染陽(yáng)性率較低，為6.58%(表2)。

表1 重慶部分地區(qū)犬血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 重慶市犬貓血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同季節(jié)犬血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

不同季節(jié)農(nóng)村犬弓形蟲感染率差異極顯著(P<0.01)。冬春兩季犬血清弓形蟲感染率較低，夏季開始上升，秋季是高峰季節(jié)，陽(yáng)性率為27.26%。夏季主城區(qū)犬弓形蟲感染率較高，秋冬兩季是渝東北三峽庫(kù)區(qū)的犬弓形蟲感染率更高(表3、表4)。

2.4 不同年齡犬、貓血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

不同年齡犬、貓弓形蟲感染陽(yáng)性率差異不顯著(P>0.05)，但犬陽(yáng)性率從6月齡～1歲開始增加，3歲之后隨著年齡增長(zhǎng)，陽(yáng)性率遞增，10歲以上的陽(yáng)性率達(dá)40%以上(表5)。城市寵物貓?jiān)?月齡～6歲年齡段最易感染，6歲以后，感染陽(yáng)性率則大幅下降(表6)。

3 討論

本試驗(yàn)共檢測(cè)渝北(城市)寵物貓血清樣本76份，檢出弓形蟲抗體陽(yáng)性5份，陽(yáng)性率為6.58%，感染率較高。共采集了重慶18個(gè)區(qū)縣2019年的城市犬和農(nóng)村犬共789份血清樣本。789份樣本中，檢出弓形蟲抗體陽(yáng)性159份，平均陽(yáng)性率20.15%。其中城市寵物犬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為12.04%，農(nóng)村家養(yǎng)犬弓形蟲感染陽(yáng)性率為29.97%，感染率較高。

從地域分布上看，犬弓形蟲感染在主城區(qū)、渝東北三峽庫(kù)區(qū)、渝東南武陵山區(qū)中均有感染。渝東北三峽庫(kù)區(qū)高于主城區(qū)和渝東南武陵山區(qū)，可能是弓形蟲喜歡溫暖潮濕的低海拔地區(qū)。

表3 不同季節(jié)城市和農(nóng)村犬血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

表4 不同地區(qū)和季節(jié)犬血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

表5 不同年齡犬血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

表6 不同年齡貓血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

不同來源犬、貓血清樣本檢測(cè)結(jié)果表明，農(nóng)村家養(yǎng)犬弓形蟲感染率最高。農(nóng)村家養(yǎng)犬和城市寵物犬弓形蟲抗體陽(yáng)性率均高于貓，與文獻(xiàn)[8]部分研究結(jié)果一致。秋季是犬弓形蟲發(fā)病的高峰季，可能原因是秋季天氣變涼，晝夜溫差大，動(dòng)物抵抗力下降，犬、貓更易感染弓形蟲，與文獻(xiàn)[9]報(bào)道有差異。農(nóng)村犬弓形蟲陽(yáng)性率更高，夏季主城區(qū)的犬弓形蟲陽(yáng)性率較高，可能是由于城市熱島效應(yīng)，主城區(qū)溫度更高、濕度較大利于弓形蟲生存，同時(shí)夏季遛犬時(shí)間較長(zhǎng)，犬與犬、犬與其他動(dòng)物感染幾率增多。

6月齡以上的犬、貓弓形蟲抗體陽(yáng)性率均明顯升高，可能原因是6月以下的幼年犬貓外出少，6月齡后的犬、貓接觸感染弓形蟲的幾率大。犬抗體陽(yáng)性率高于貓，可能是犬較貓更喜聚集玩耍，外出多，更易接觸感染源。10歲以上犬弓形蟲抗體陽(yáng)性率在40%以上，增長(zhǎng)明顯，可能是犬10歲以后，身體機(jī)能逐漸退化，抵抗力下降，更易感染弓形蟲，且弓形蟲抗體一旦產(chǎn)生，能終身存在于動(dòng)物體內(nèi)[10]。6歲后的城市寵物貓弓形蟲抗體陽(yáng)性率大幅度下降，可能是城市寵物貓定期進(jìn)行了預(yù)防處理，感染幾率降低。

本次調(diào)查得出城市寵物犬弓形蟲抗體陽(yáng)性率為12.04%，比文獻(xiàn)[11]中重慶主城區(qū)寵物犬弓形蟲血清抗體陽(yáng)性檢出率高6.67%。東莞地區(qū)犬弓形蟲抗體陽(yáng)性率0.66%(4/610)，是報(bào)道感染率最低的地區(qū)[12]。而北京、上海地區(qū)犬弓形蟲抗體陽(yáng)性率均在13%左右。重慶市寵物犬弓形蟲感染率在全國(guó)處于較高水平，說明環(huán)境中存在弓形蟲高污染的狀況。

本研究發(fā)現(xiàn)重慶市犬貓弓形蟲感染率較高，有潛在的公共衛(wèi)生安全隱患，應(yīng)進(jìn)一步全面監(jiān)測(cè)分析，掌握重慶市弓形蟲病的流行規(guī)律，提出預(yù)防策略，降低犬貓的感染率，保障人和動(dòng)物健康。