陳蘭 馮劍 黃夢利 孫曉玉 劉洋洋

摘要為建立海南地方習用藥材土人參的質量標準，依據(jù)《國家藥品標準工作手冊》中藥質量標準研制的要求，對土人參藥材的性狀、鑒別、水分、總灰分、浸出物、多糖含量等指標進行測定。結果明確了土人參藥材的性狀和顯微結構特征，建立了具有專屬性的薄層鑒別方法;規(guī)定土人參藥材水分含量不得超過12.0%、總灰分含量不得超過18.0%、醇溶性浸出物含量不得少于8.0%、多糖含量不得少于9.0%。本研究可為建立土人參藥材質量標準體系提供參考。

關鍵詞土人參;質量標準;多糖

中圖分類號 S649??????? 文獻標識碼 A???????? DOI：10.12008/j.issn.1009-2196.2022.01.014

Development of Quality Standard for Talinumpaniculatum， a Native Traditional Medicine in Hainan

CHEN Lan?? FENG Jian?? HUANG Mengli?? SUN Xiaoyu?? LIU Yangyang

（Hainan Branch of the Institute ofMedicinal Plant Development， Chinese Academy ofMedical Sciences and Peking UnionMedical College/Hainan Provincial Key Laboratory for Conservation and Development ofMedicinal Plant Resources inSouth China， Haikou， Hainan 570311， China）

Abstract?? Talinum paniculatum is a native medicinal plant in Hainan， and its characteristics， identification methods， and con- tents of water， total ash， extract， polysaccharides， etc were identified based on the requirements for the quality standard of crude drugs in the Working Manual of National Drug Standardization （2015 edition）. The characteristics and microstructures of T. paniculatum were identified， and an exclusive thin layer-chromatography identification method for T. paniculatum was established. The crude drug of T. paniculatum is provided for to contain no more than 12.0% of water， no more than 18.0% of total ash， no less than 8.0% of alcohol soluble extract and no less than 9.0% of polysaccharides. These results could provide reference for the establishment of quality standard system for T. paniculatum.

Keywords?? Talinum paniculatum; quality control; polysaccharide

海南地方習用藥材土人參為馬齒莧科植物土人參Talinumpaniculatum（Jacq.）Gaertn.的干燥全株，又稱櫨蘭、假人參、參草、土高麗參、紅參、紫人參、煮飯花、力參、波世蘭，一年生或多年生草本，全株無毛，高 30～100 cm ，原產(chǎn)熱帶美洲，我國中部和南部均有栽植，有的逸為野生，生于陰濕地[1]。土人參味甘、性平，根為滋補強壯藥，有補中益氣、潤肺生津之功效，用于氣虛乏力、體虛自汗、脾虛泄瀉，葉消腫解毒，治疔瘡癤腫[1-2]。土人參富含黃酮類、多糖、微量元素等活性物質，其葉、根部也可作為蔬菜食用，起到補血益氣的藥膳作用[3-6]。其中多糖具有較好的免疫調節(jié)、抗腫瘤、保肝、抗衰老、降血脂等活性[7-8]，黃酮類化合物具有較好的抗氧化作用，是良好的天然抗氧化劑[5]。此外，土人參的提取物還具有抗菌和抗氧化作用，具有較高的食用和藥用價值[5，9-11]。

目前土人參的研究主要集中于其藥用價值[1，4]、營養(yǎng)價值[12-13]、化學成分[14-15]、儲藏方式[16-17]、傳統(tǒng)栽培技術[18-22]等方面。在貴州，土人參被作為地方習用藥材并收載于《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版中，該標準較為簡單，僅有性狀和顯微鑒別項[23]。因此，為提升土人參藥材質量控制標準，本研究對土人參藥材的質量控制指標進行了深入探討，為制定海南地方習用藥材土人參質量標準及深入開發(fā)和利用土人參提供理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1?? 儀器與試劑儀器：生物顯微鏡（日本 Nikon ），馬弗爐，紫外可見分光光度計（日本島津）。

試劑：無水葡萄糖（批號：110833-201707，購于中國食品藥品檢定研究院），其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.2? 實驗材料 10 批實驗用土人參藥材樣品均為野生種，采自海南?？凇⒍ò?、屯昌、瓊海、澄邁、保亭、萬寧、陵水等地，詳細信息見表1。其中，土人參對照藥材（批號 TRS06）于2018 年3 月采自海南省保亭黎族苗族自治縣毛感鄉(xiāng)，除去雜質，曬干而得。原植物經(jīng)廣東藥科大學鄭希龍副研究員鑒定為馬齒莧科（Portulacaceae）植物土人參T.paniculatum（ Jacq.）Gaertn.，對照藥材（ TRS06）原植物憑證（臘葉）標本保存于海南省中藥標本館，憑證編號為 TRS18032806BT。

1.2? 方法

1.2.1? 性狀檢定參照《國家藥品標準工作手冊》的性狀檢定方法[24]，對10 批土人參藥材的外觀形狀、大小、表面色澤和特征、質地、斷面及氣味進行檢定和描述。

1.2.2? 鑒別

1.2.2.1? 顯微鑒別參照《國家藥品標準工作手冊》的顯微鑒別法[24]，將10批土人參藥材粉碎，過四號篩;挑取少許粉末置載玻片上，滴加水合氯醛試液進行透化，加蓋玻片，于生物顯微鏡下觀察土人參藥材粉末的顯微結構特征。

1.2.2.2? 薄層鑒別將土人參藥材粉碎，過四號篩;取粉末1 g ，加石油醚（60～90℃）10 mL ，超聲提取10 min，濾過，濾渣加95%乙醇25 mL? 超聲提取1 h，濾過;將濾液濃縮至2 mL，作為土人參薄層鑒別供試品溶液。另取土人參對照藥材粉末1 g，同法制成土人參薄層鑒別對照藥材溶液。參照《國家藥品標準工作手冊》照薄層色譜法，分別吸取上述2 種溶液各3 μL，點于同一硅膠 G 薄層板上，以正丁醇-水-冰醋酸（4 ∶1∶0.3）為展開劑，展開，取出晾干;噴以磷鉬酸試液，以105℃加熱至斑點清晰，置日光下檢視。

1.2.3? 水分、總灰分、浸出物的測定土人參水分、總灰分、浸出物參照《國家藥品標準工作手冊》中的測定法進行測定[24]。

1.2.4? 多糖的測定

1.2.4.1? 多糖對照品溶液制備取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成每1 mL 含0.6 mg 的溶液，即得。

1.2.4.2? 標準曲線制備精密量取多糖對照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別定容至50 mL;精密量取上述各溶液2.0 mL，分別置于10 mL 具塞試管中，迅速精密加入5%苯酚溶液1 mL 并搖勻;加入濃硫酸7 mL ，混勻后置于40℃水浴30 min，后冰浴5 min;取出，以相應的試劑為空白，參照《國家藥品標準工作手冊》中的紫外-可見分光光度法[24]，在490 nm 波長處測定吸光度;以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.2.4.3? 土人參多糖供試品溶液制備將土人參藥材粉碎，過四號篩;取粉末約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水25 mL，密塞，稱定重量;靜置1 h 后，水浴回流1 h，放冷，再稱定重量，用蒸餾水補足減失的重量;搖勻，離心，取上清液 1 mL，用蒸餾水定容至50 mL，搖勻，即得土人參多糖供試品溶液。

1.2.4.4? 方法學考察（ 1）線性關系考察精密量取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別定容至50 mL，配制成葡萄糖含量為0.0012 、0.0024、0.0036、0.0048、0.0060 mg/mL 的系列溶液，以濃度作為橫坐標（ X軸），吸光度為縱坐標（ Y軸），進行線性回歸，計算回歸方程。

（2 ）精密度試驗精密吸取供試品溶液2.0 mL，按照標準曲線制備項下的樣品制備方法，連續(xù)測定6 次，考察儀器精密度。

（3 ）穩(wěn)定性試驗精密吸取供試品溶液 2.0 mL，按照標準曲線制備項下的樣品制備方法，測定反應結束后的0 、10、20、30、40、50、60、90、120、150 min 的吸光度，考察供試品溶液的穩(wěn)定性。

（4 ）重復性試驗取同一批樣品6 份，按供試品溶液制備的方法，測定土人參多糖的含量;取同一批樣品制備6 份供試品溶液，用于測定吸光度，考察該方法重復性。

（5 ）回收率取已知含量的同一批樣品6 份，每份0.2 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法，分別精密加入1 mL 標準葡萄糖溶液和1 mL 供試品溶液，定容至100 mL，測定并計算結果，考察該方法的準確度。

1.2.4.5? 含量測定精密量取土人參多糖供試品溶液2 mL，置于10 mL 具塞試管中，按照標準曲線的樣品制備方法，測定樣品吸光度，從標準曲線上讀出土人參多糖供試品溶液中無水葡萄糖的含量，經(jīng)計算即得。

2? 結果與分析

2.1? 性狀

土人參長30～100 cm。根圓錐形或長紡錘形，有的分枝;主根長5～30 cm，直徑0.1～2.5 cm，表面凹凸不平，灰黑色，有縱皺紋及點狀突起的須根痕;質堅硬，難折斷。莖圓柱形或扁圓柱形，長5～50 cm ，直徑0.1～0.5 cm;淡棕色，具細縱棱線;質脆，斷面淡棕色或灰白色，有髓或中空。單葉互生，多皺縮破碎，墨綠色至黑棕色，完整者展平后呈倒卵形或倒卵狀長橢圓形，先端急尖，有時微凹，基部狹楔形，全緣。圓錐花序頂生或腋生，二叉狀分枝，具長花序梗。蒴果近球形，3 瓣裂。種子多數(shù)，扁圓形。氣微，味淡。

2.2? 鑒別

2.2.1? 顯微鑒別

如圖1 所示，土人參粉末呈灰黃色，木栓細胞呈長方型或類長方形。草酸鈣簇晶眾多，直徑20～70μm ，邊緣短鈍。導管為梯紋導管、螺紋導管、網(wǎng)紋導管、具緣紋孔導管。淀粉粒單粒散在或復粒，單粒類球形或近圓形，復粒由2～5粒分粒組成，多糊化。纖維成束。

2.2.2? 薄層鑒別展開后的薄層色譜板噴以磷鉬酸試液，以105℃加熱至斑點清晰，于日光燈下檢視，如圖2 所示。供試品在與對照藥材薄層色譜相應位置上，均顯相同灰藍色斑點。

2.3? 水分、總灰分、浸出物的測定

10批土人參樣品的水分、總灰分、浸出物測定結果見表2 。10批土人參總灰分含量平均值為14.71%，其中采自陵水吊羅山鄉(xiāng)土人參總灰分含量最高（16.68%），采自屯昌烏坡鎮(zhèn)的最低（13.66%）。10 批土人參的水分含量平均值為7.63%，其中采自定安黃竹鎮(zhèn)的土人參水分含量最高（9.23%），采自?？诃偵絽^(qū)的水分含量最低（ 6.84%）。10批土人參的醇溶性浸出物含量平均值為11.05%，其中采自定安黃竹鎮(zhèn)的土人參浸出物含量最高（12.84%），采自澄邁橋頭鎮(zhèn)的最低（ 10.17%）。

2.4? 多糖含量測定

2.4.1? 方法學考察

2.4.1.1? 線性關系以濃度作為橫坐標（ X軸），吸光度為縱坐標（ Y軸），進行線性回歸，得回歸方程 Y=63.833X+0.0688，R2=0.9992。結果顯示，無水葡萄糖對照品在0.0012～0.0060 mg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關系良好（表3 ）。

2.4.1.2? 精密度試驗精密度考察結果（表4 ），6次測量的 RSD 為0.00%，表明儀器精密度良好。

2.4.1.3? 穩(wěn)定性試驗實驗結果（表5 ）表明，在 150 min 內(nèi)，吸光度變化不大，但 30 min 后數(shù)值略有波動，建議在20 min 內(nèi)完成測定。

2.4.1.4? 重復性試驗結果如表6 所示，土人參多糖的吸光度 RSD 為0.92%，表明該方法重復性良好。

2.4.1.5? 回收率測定結果見表7，土人參多糖含量的加樣回收率為（102.22±0.88）%，RSD 值為0.86%。

2.4.2? 多糖測定結果 10 批土人參多糖含量平均值為11.60%，詳見表8。其中，采自?？诃偵絽^(qū)的多糖含量最高（12.93%），而采自屯昌烏坡鎮(zhèn)的多糖含量最低（10.17%）。

3? 討論與結論

3.1? 土人參藥材水分、總灰分及醇溶性浸出物含量限值的確定

10批土人參藥材水分含量為6.84%～9.23%，利用10批土人參水分含量平均值乘以120%，得到其限定標準：7.63%×1.2=9.17%，但考慮海南濕度較大，擬規(guī)定土人參藥材水分含量不得過12.0%。10 批土人參藥材總灰分含量為13.66%～16.68%，與楊暹等[25]測得土人參總灰分為（14.30±0.13）%的結果基本一致。同理，利用10批土人參總灰分含量平均值乘以120%，得到其限定標準：14.71%×1.2=17.65%，擬規(guī)定土人參藥材總灰分含量不得過18.0%。10批土人參藥材浸出物含量為10.17%～12.84%，利用10批土人參浸出物含量平均值乘以80%，得到其限定標準：11.05%×0.8=8.84%，擬規(guī)定土人參藥材醇溶性浸出物含量不得少于8.0%。

3.2? 土人參藥材多糖含量限值的確定

多糖是土人參的主要活性成分之一[7，10，26]，因此本研究將多糖含量作為土人參的質控指標之一。10 批土人參藥材的多糖含量為10.17%～12.93%，利用10批土人參藥材多糖含量的平均值乘以80%，得到土人參藥材多糖含量限定標準：11.60×0.8=9.28%。故擬定按干燥品計算，土人參多糖含量不得少于9.0%。

本研究對海南地方習用藥材土人參藥材的性狀、顯微特征、薄層色譜、水分、總灰分、浸出物以及多糖含量等質量指標進行研究，并制定相應限值或要求，可為建立其質量標準體系提供參考，對確保土人參的臨床用藥安全及其作為制劑原料的安全性、有效性和穩(wěn)定性具有一定的意義。

參考文獻

[1]?? 中國科學院中國植物志編輯委員會. 中國植物志[M]. 北京： 科學出版社， 1999.

[2]?? 盧柳拂， 林夢瑤， 黃鎖義， 等. 少數(shù)民族地區(qū)右江流域特色民族藥研究進展[J]. 中國實驗方劑學雜志， 2018， 24（1）：191-200.

[3]?? 沈笑媛， 楊小生， 楊波， 等. 苗藥土人參的化學成分研究[J]. 中國中藥雜志， 2007， 32（10）：980-981.

[4]?? 王翔， 林夢瑤， 黃鎖義， 等. 土人參研究的新進展[J]. 微量元素與健康研究， 2017， 34（1）：75-77.

[5]?? 劉曉珍， 湯艷姬， 陳斯釗， 等. 土人參黃酮類化合物的提取及其抗氧化性[J].? 貴州農(nóng)業(yè)科學 ， 2012， 40（11）：192-195+199.

[6]?? 黃禮德， 郭立強， 潘廷啟， 等. 正交設計優(yōu)化土人參多糖的超聲提取工藝[J]. 中國釀造， 2012， 31（3）：105-107.

[7]?? 潘廷啟， 文全泰， 黃禮德， 等. 土人參多糖的抗氧化活性研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥， 2014， 25（1）：30-32.

[8]?? 喬宇彬. 中藥多糖的化學與藥理[M]. 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2005.

[9]?? 葉玉妍， 陳曉， 楊禮香. 土人參 Actin 基因片段的克隆及序列分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學， 2018， 45（6）：19-24.

[10]? Cláudio Daniel Cerdeira， Jeferson J Da Silva， Manoel F RNetto， et al. Talinum paniculatum： a plant with antifungal potential? mitigates? fluconazole-induced? oxidative? dam- age-mediated growth inhibition of Candida albicans[J]. Re- vista Colombiana de CienciasQuímicoFarmacéuticas， 2020， 49（2）.

[11]? 文全泰， 潘廷啟， 黃禮德， 等. 土人參提取液對 D-半乳糖所致衰老小鼠的抗氧化作用研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)， 2014， 26（5）：662-665.

[12]? 李剛鳳， 楊天友， 高健強， 等. 土人參不同部位營養(yǎng)成分分析與評價[J]. 食品工業(yè)， 2016， 37（7）：295-298.

[13]? 曹利民， 龍春林， 曹明. 江西贛南客家兩種保健野菜營養(yǎng)成分分析[J]. 時珍國醫(yī)國藥， 2015， 26（11）：2 597-2599.

[14]? 姚姝鳳， 高建強， 成江， 等. 響應面法優(yōu)化土人參根中總黃酮提取及其抗氧化活性研究[J]. 中國現(xiàn)代應用藥學， 2017， 34（6）：858-863.

[15]? 莫璐， 馮小雄， 農(nóng)嵩， 等. 土人參葉的多糖提取及含量測定[J]. 微量元素與健康研究， 2015， 32（3）：29-30.

[16]? 陳文， 王旭， 彭玉姣， 等. 貯藏方式對4 種藥食兩用植物種子萌發(fā)的影響[J]. 中國農(nóng)學通報， 2018， 34（1）：85-89.

[17]? 謝勇， 王鵬， 施伽，等. 不同貯藏溫度對土人參葉品質特性的影響[J]. 食品安全質量檢測學報， 2016， 7（12）：4 908-4912.

[18]? 廖小鋒， 李鵬， 謝元貴， 等. 金銀花套種土人參栽培管理技術研究及效益分析[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學， 2016， 44（23）：116-118.

[19]? 廖小鋒， 李鵬， 謝元貴. 喀斯特山區(qū)土人參高產(chǎn)栽培技術[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， 2016（12）：108-109.

[20]? 張潔慧， 王鋼， 沈海琦， 等. 土人參高效安全栽培模式試驗研究[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， 2016（5）：91-92.

[21]? 張平， 屠娟麗， 石玉波， 等. 土人參種子愈傷組織誘導及植株再生[J]. 現(xiàn)代園藝， 2016（11）：5-6.

[22]? 王玲， 王鋼， 沈海琦， 等. 保健野菜土人參引種試驗[J].現(xiàn)代園藝， 2015（5）：42-43.

[23]? 貴州省藥品監(jiān)督管理局. 貴州省中藥材、民族藥材質量標準[M]. 貴州： 貴州科技出版社， 2003：23.

[24]? 國家藥典委員會. 國家藥品標準工作手冊（第四版）[M].北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2013.

[25]? 楊暹， 郭巨先. 華南主要野生蔬菜的基本營養(yǎng)成分及營養(yǎng)價值評價[J]. 食品科學， 2002（11）：26121-125.

[26]? Iraê? Oliveira? Moura，? Cláudio? Carvalho? Santana，? YeseongRobert Familia Louren?o， et al. Chemical Characterization， Antioxidant Activity and Cytotoxicity of the Unconventional Food Plants： Sweet Potato [Ipomoea batatas （L.） Lam.] Leaf， Major? Gomes [Talinum? paniculatum （Jacq.） Gaertn.] andCaruru （Amaranthus? deflexus? L.）[J]. Waste? and? Biomass Valorization， 2020（12）：2407-2431.

（責任編輯林海妹）