林毅雄，林藝芬，陳藝暉，王 慧，林河通,*

（1.閩南師范大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，福建 漳州 363000；2.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350002；3.亞熱帶特色農(nóng)產(chǎn)品采后生物學(xué)（福建農(nóng)林大學(xué)）福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002；4.福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)后技術(shù)研究所，福建 福州 350002）

龍眼（Dimocarpus longanaLour.）又名桂圓，廣泛種植在中國(guó)、泰國(guó)、印度、越南、美國(guó)及澳大利亞等具有熱帶和亞熱帶氣候的國(guó)家[1-3]。我國(guó)是龍眼品種最多、栽培面積最廣和產(chǎn)量最高的國(guó)家，主要種植在福建、廣東、海南和臺(tái)灣等地區(qū)[4-6]。龍眼是著名的亞熱帶名優(yōu)特色水果，果實(shí)不僅風(fēng)味獨(dú)特，還富含維生素、礦物質(zhì)、糖和氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用功效，是一種良好的藥食同源水果[7-9]。但龍眼果實(shí)成熟期主要集中在7～9月的高溫季節(jié)，容易導(dǎo)致龍眼果實(shí)采后生理代謝旺盛，進(jìn)而出現(xiàn)果皮褐變、果肉自溶和果實(shí)病害等品質(zhì)劣變現(xiàn)象[3,7,9-13]。特別是果皮褐變的發(fā)生嚴(yán)重影響龍眼果實(shí)外觀品質(zhì)和商品價(jià)值，從而限制龍眼產(chǎn)業(yè)發(fā)展[3-4,8-9,14]。近年來(lái)，龍眼的種植面積和產(chǎn)量不斷提高。因此，尋求安全、可靠的新型保鮮技術(shù)，以控制采后龍眼果皮褐變、保持采后龍眼品質(zhì)和延長(zhǎng)其保鮮期，是提高農(nóng)戶經(jīng)濟(jì)效益、促進(jìn)龍眼產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展亟待解決的難題。

能量代謝是采后新鮮果蔬的主要生理代謝活動(dòng)之一，其能量水平與新鮮果蔬采后貯藏品質(zhì)和耐貯性密切相關(guān)[15-18]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，采后龍眼果實(shí)貯藏期間活性氧過(guò)量積累、能量虧缺或病原菌侵染會(huì)影響能量物質(zhì)的合成，進(jìn)而降低細(xì)胞內(nèi)能量水平，最后導(dǎo)致龍眼果實(shí)品質(zhì)劣變[7-8,15,19-22]；但經(jīng)活性氧清除劑（棓酸丙酯）、腺苷三磷酸（adenosine triphosphate，ATP）或水楊酸等采后處理可以提高龍眼果實(shí)貯藏期間的細(xì)胞內(nèi)能量水平，有效減輕采后龍眼果實(shí)果皮褐變發(fā)生[23-26]。王斌等[27]研究發(fā)現(xiàn)，在甜瓜果實(shí)發(fā)育期噴施0.5 mmol/L硝普鈉，可提高采后甜瓜果實(shí)貯藏期間的能量水平和果實(shí)耐貯性。因此，適當(dāng)?shù)牟汕盎虿珊筇幚砜赡軙?huì)影響采后龍眼果實(shí)貯藏期間的能量水平，進(jìn)而調(diào)控龍眼果皮褐變的發(fā)生速度。近年來(lái)，關(guān)于龍眼果實(shí)保鮮的研究報(bào)道主要集中在采后處理，較少涉及采前田間栽培管理；有關(guān)采前田間栽培技術(shù)對(duì)采后龍眼果實(shí)能量代謝的影響及其與果實(shí)耐貯性的關(guān)系還鮮見(jiàn)報(bào)道，因此很有必要深入研究和探討。

己酸二乙氨基乙醇酯（diethyl aminoethyl hexanoate，DA-6）簡(jiǎn)稱胺鮮酯，是參與植物細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育的一種新型生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。DA-6作為一種潛在的健康環(huán)保型果蔬保鮮劑，近年來(lái)受到研究者的關(guān)注[28]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，采前噴施DA-6可以降低采后龍眼果實(shí)貯藏期間的活性氧代謝和膜脂代謝，有效延緩龍眼果皮褐變和果肉自溶的發(fā)生，提高龍眼貯藏品質(zhì)和保鮮效果[28-30]。目前，鮮見(jiàn)采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼貯藏期間果皮能量代謝影響的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以‘福眼’龍眼為材料，在龍眼盛花期后70、90、110 d，用含量為10 mg/kg的DA-6噴施龍眼果實(shí)3 次，研究其對(duì)采后龍眼果實(shí)貯藏期間果皮能量代謝的影響及其與果實(shí)耐貯性的關(guān)系，旨在為開(kāi)發(fā)減輕龍眼果實(shí)采后品質(zhì)劣變、延長(zhǎng)果實(shí)保鮮期的采前田間栽培新技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

本研究選擇福建省主栽培名優(yōu)龍眼品種‘福眼’果實(shí)（Dimocarpus longanLour.cv. Fuyan）、樹(shù)齡（8 年）和生長(zhǎng)一致的‘福眼’龍眼果樹(shù)為實(shí)驗(yàn)材料，采前噴施DA-6的實(shí)驗(yàn)基地在福建省安溪縣龍眼科技示范果園。

高氯酸、氫氧化鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、乙二胺四乙酸、VC、氯化鎂、氯化鈉、乙醇、氫氧化鈉、硝酸鉀、三氯乙酸、鉬酸銨 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇、苯甲基磺酰氟、釩酸鈉、6-磷酸葡萄糖、6-磷酸葡萄糖脫氫酶、乙醇脫氫酶 上海麥克林生化科技有限公司；腺嘌呤核苷三磷酸、二硫蘇糖醇 北京索萊寶科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-2030C 3D高效液相色譜儀 島津（日本）有限公司；GL-20G-II高速冷凍離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器有限公司；BSA224S電子天平 賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 國(guó)華電器有限公司；T6新世紀(jì)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.3 方法

1.3.1 DA-6噴施處理

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在龍眼盛花期后70、90、110 d采前噴施不同含量的DA-6（0～15 mg/kg），其中含量為10 mg/kg時(shí)能較好地控制龍眼果實(shí)采后果皮褐變和果肉自溶等品質(zhì)劣變的發(fā)生[28]。因此，將10 mg/kg DA-6作為本實(shí)驗(yàn)的噴施劑量，并在龍眼盛花期后70、90、110 d噴施龍眼果實(shí)3 次；同時(shí)以噴施蒸餾水作為對(duì)照組。對(duì)照組和DA-6處理組各噴施6 株龍眼果樹(shù)。

‘福眼’龍眼果實(shí)在盛花期后120 d采收，采收后立即在冷庫(kù)預(yù)冷，之后用冷藏車（3～4 ℃）運(yùn)至福建農(nóng)林大學(xué)，選取大小、色澤一致、無(wú)機(jī)械損傷、無(wú)病蟲害的健康龍眼果實(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。龍眼果實(shí)經(jīng)蒸餾水清洗、自然晾干果實(shí)表面水分后，用聚乙烯薄膜袋包裝（聚乙烯薄膜袋0.015 mm厚，50 個(gè)果實(shí)/袋，對(duì)照組和DA-6處理組各50 袋），在（28±1）℃、相對(duì)濕度80%下貯藏。貯藏期間每天取樣測(cè)定龍眼果皮能量水平、腺苷三磷酸酶（adenosine triphosphatase，ATPase）活力、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶（nicotinamide adenine dinucleotide kinase，NADK）活力和吡啶核苷酸含量。

1.3.2 測(cè)定指標(biāo)

1.3.2.1 果皮能量水平測(cè)定

從10 個(gè)龍眼果實(shí)中取果皮組織5 g，參照Chen Yihui[21]和陳夢(mèng)茵[31]等的方法測(cè)定ATP、腺苷二磷酸（adenosine diphosphate，ADP）、腺苷一磷酸（adenosine monophosphate，AMP）含量和能荷，單位為mg/kg，結(jié)果以鮮質(zhì)量計(jì)。

1.3.2.2 果皮ATPase活力測(cè)定

從10 個(gè)龍眼果實(shí)中取果皮組織1 g，參考陳蓮[32]的方法制備提取液用于質(zhì)膜、液泡膜和線粒體膜H＋-ATPase、Ca2＋-ATPase和Mg2＋-ATPase活力的測(cè)定。按照考馬斯亮藍(lán)G250染色法[33]測(cè)定酶蛋白質(zhì)含量，以牛血清白蛋白作標(biāo)準(zhǔn)曲線。以上酶活力單位均為U/mg，結(jié)果以蛋白質(zhì)量計(jì)。

1.3.2.3 果皮NADK活力和吡啶核苷酸含量測(cè)定

從10 個(gè)龍眼果實(shí)中取果皮1 g，參考Lin Yixiong等[20]的方法制備提取液并測(cè)定NADK活力，結(jié)果以U/mg表示。

從10 個(gè)龍眼果實(shí)中取果皮1 g，參考Lin Yixiong等[20]的方法，測(cè)定煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD）、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide，NADH）、氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADP）和還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）含量，以上含量單位均為μmol/g，結(jié)果以鮮質(zhì)量計(jì)。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

以上各指標(biāo)測(cè)定均重復(fù)3 次，結(jié)果取其平均值。采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析（T檢驗(yàn)法進(jìn)行顯著性分析）。采用Excel 2010軟件制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)果皮褐變的影響

圖1 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)果皮褐變的影響Fig. 1 Effect of pre-harvest spray application of DA-6 on browning development in pericarp of postharvest longan fruit during storage

2.2 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)果皮ATP、ADP、AMP含量和能荷的影響

由圖2A可知，采后龍眼果實(shí)果皮ATP含量隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)總體呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明龍眼果實(shí)在采后貯藏期間能量水平是逐漸下降的。與對(duì)照龍眼果實(shí)比較，采前噴施DA-6可有效地延緩采后龍眼果實(shí)果皮ATP含量的下降，并在采后貯藏的同一時(shí)間，其果皮ATP含量始終高于對(duì)照龍眼果實(shí)。在采收當(dāng)天和采后貯藏2～3 d內(nèi)二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；在采后貯藏4～5 d內(nèi)二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。其中，采收當(dāng)天、貯藏第2天和第3天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮ATP含量分別是對(duì)照組的1.31、1.70 倍和1.69 倍。

由圖2B可知，對(duì)照組和采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮ADP含量在采后貯藏過(guò)程整體呈下降趨勢(shì)。采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮ADP含量比對(duì)照組高。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收當(dāng)天和貯藏至第4天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；采后貯藏2～3 d和5～6 d內(nèi)二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中，采收當(dāng)天、貯藏第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮ADP含量分別是對(duì)照組的1.48、1.52 倍。

由圖2C可知，對(duì)照組和采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮AMP含量隨采后貯藏時(shí)間延長(zhǎng)總體呈上升趨勢(shì)。與對(duì)照組相比，采前噴施DA-6可有效保持較低的采后龍眼果實(shí)果皮AMP含量。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收當(dāng)天和貯藏第5天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；采后貯藏3～4 d和貯藏第6天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，采收當(dāng)天、貯藏第6天，采前噴施DA-6處理組的龍眼果實(shí)果皮AMP含量分別比對(duì)照組低27.20%、27.85%。

由圖2D可知，采后龍眼果實(shí)果皮能荷在貯藏期間逐漸下降。與對(duì)照組相比，采前噴施DA-6可有效保持較高的采后龍眼果實(shí)果皮能荷。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，采后貯藏第3天和第6天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中，貯藏第6天，采前噴施DA-6處理組的龍眼果實(shí)果皮能荷比對(duì)照組高12.26%。

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)在采后貯藏期間可保持較高果皮能量水平。

圖2 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)貯藏期間果皮ATP（A）、ADP（B）、AMP（C）含量和能荷（D）的影響Fig. 2 Effect of pre-harvest spray application of DA-6 on contents of ATP (A), ADP (B), AMP (C) and energy charge (D) in pericarp of postharvest longan fruit during storage

2.3 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)果皮H＋-ATPase活力的影響

由圖3A可知，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮質(zhì)膜H＋-ATPase活力在整個(gè)貯藏期間高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收當(dāng)天和貯藏第2天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；采后貯藏3～4 d和貯藏第6天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，采收當(dāng)天、貯藏第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮質(zhì)膜H＋-ATPase活力分別比對(duì)照組高11.06%、17.78%。

由圖3B可知，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮液泡膜H＋-ATPase活力在整個(gè)貯藏期間高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采后貯藏0～1 d二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；采后貯藏2～3 d二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，采收當(dāng)天、貯藏第2天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮液泡膜H＋-ATPase活力分別比對(duì)照組高15.61%、56.51%。

(2) 太原地區(qū)地層性質(zhì)更接近軟土地層，基坑樁(墻)體水平位移監(jiān)測(cè)，應(yīng)以管頂為起算點(diǎn)，并將對(duì)應(yīng)墻頂水平位移值代入進(jìn)行修正。

由圖3C可知，經(jīng)采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮線粒體膜H＋-ATPase活力在整個(gè)貯藏期間高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收當(dāng)天和采后貯藏5～6 d二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；采后貯藏2～4 d二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，采收當(dāng)天、貯藏第3天，采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮線粒體膜H＋-ATPase活力分別是對(duì)照組的1.20、1.92 倍。

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)在采后貯藏期間可保持較高果皮質(zhì)膜、液泡膜、線粒體膜H＋-ATPase活力。

圖3 采前噴施DA-6處理對(duì)采后龍眼果實(shí)貯藏期間果皮H＋-ATPase活力的影響Fig. 3 Effect of pre-harvest spray application of DA-6 on H+-ATPase activity in pericarp of postharvest longan fruit during storage

2.4 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)果皮Ca2＋-ATPase活力的影響

由圖4A可知，對(duì)照組和采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮質(zhì)膜Ca2＋-ATPase活力隨采后貯藏時(shí)間延長(zhǎng)總體呈上升趨勢(shì)。經(jīng)采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮質(zhì)膜Ca2＋-ATPase活力高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收第2天和采后貯藏5～6 d內(nèi)二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；采后貯藏3～4 d內(nèi)二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中，貯藏第3、6天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮質(zhì)膜Ca2＋-ATPase活力分別比對(duì)照組高29.10%、49.60%。

由圖4B可知，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮液泡膜Ca2＋-ATPase活力高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收第2天和采后貯藏5～6 d內(nèi)二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；采后貯藏第3天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮液泡膜Ca2＋-ATPase活力在采后貯藏第2天和第6天分別比對(duì)照組高60.73%和38.38%。

由圖4C可知，不同處理的采后龍眼果實(shí)果皮線粒體膜Ca2＋-ATPase活力變化趨勢(shì)基本一致，但變化幅度不一樣。采前噴施DA-6龍眼果實(shí)可有效保持較高果皮線粒體膜Ca2＋-ATPase活力并在貯藏期間的同一時(shí)間始終高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收貯藏第1天和第6天內(nèi)二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；采后貯藏2～3 d和貯藏第5天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，貯藏至第2、6天，采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮線粒體膜Ca2＋-ATPase活力分別是對(duì)照組的1.52、1.24 倍。

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)在采后貯藏期間可保持較高果皮質(zhì)膜、液泡膜、線粒體膜Ca2＋-ATPase活力。

圖4 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)貯藏期間果皮Ca2＋-ATPase活力的影響Fig. 4 Effect of pre-harvest spray application of DA-6 on Ca2+-ATPase activity in pericarp of postharvest longan fruit during storage

2.5 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)果皮Mg2＋-ATPase活力的影響

由圖5A可知，不同處理組采后龍眼果實(shí)果皮質(zhì)膜Mg2＋-ATPase活力變化趨勢(shì)基本一致，但幅度不一樣。采前噴施DA-6可保持較高龍眼果實(shí)果皮質(zhì)膜Mg2＋-ATPase活力并在貯藏期間的同一時(shí)間始終高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采后貯藏2～3 d內(nèi)二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；采后貯藏第4天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中，第2、3天和第4天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮質(zhì)膜Mg2＋-ATPase活力分別比對(duì)照高1.57、1.60 倍和1.20 倍。

由圖5B可知，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮液泡膜Mg2＋-ATPase活力始終高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采后貯藏0～1 d和貯藏第4、6天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；采后貯藏2～3 d內(nèi)二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，采后當(dāng)天、貯藏第2天和第6天，采前噴施DA-6的果皮液泡膜Mg2＋-ATPase活力分別是對(duì)照組的1.20、2.09 倍和1.22 倍。

由圖5C可知，采前噴施DA-6龍眼果實(shí)可保持較高果皮線粒體膜Mg2＋-ATPase活力并在貯藏期間的同一時(shí)間始終高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收當(dāng)天和采后貯藏5～6 d內(nèi)二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；采后貯藏1～3 d內(nèi)二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，采收當(dāng)天、貯藏第2天和第6天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮線粒體膜Mg2＋-ATPase活力分別比對(duì)照組高21.36%、70.02%和28.54%。

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)在采后貯藏期間可保持較高果皮質(zhì)膜、液泡膜、線粒體膜Mg2＋-ATPase活力。

圖5 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)貯藏期間果皮Mg2＋-ATPase活力的影響Fig. 5 Effect of pre-harvest spray application of DA-6 on Mg2+-ATPase activity in pericarp of postharvest longan fruit during storage

2.6 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)果皮NADK活力的影響

由圖6可知，經(jīng)采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮NADK活力在采后貯藏期間高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收當(dāng)天和采后貯藏第6天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；采后貯藏1～3 d內(nèi)二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中，采收當(dāng)天、貯藏第6天，采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮NADK活力分別比對(duì)照高28.78%、32.52%。上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6可保持較高采后龍眼果實(shí)果皮NADK活力。

圖6 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)貯藏期間果皮NADK活力的影響Fig. 6 Effect of pre-harvest spray application of DA-6 on NADK activity in pericarp of postharvest longan fruit during storage

2.7 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)果皮NAD（H）和NADP（H）含量的影響

由圖7A可知，不同處理組采后龍眼果實(shí)果皮NAD含量變化趨勢(shì)基本一致，但變化幅度不一樣。采前噴施DA-6龍眼果實(shí)可維持較低的果皮NAD含量并在貯藏期間的同一時(shí)間始終低于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采收當(dāng)天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；采后貯藏至第2天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中，采收當(dāng)天、貯藏第2天，采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮NAD含量分別比對(duì)照低20.73%、12.63%。

由圖7B可知，采前噴施DA-6可保持較高的龍眼果實(shí)果皮NADP含量并在貯藏期間的同一時(shí)間始終高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采后貯藏0～2 d和采后貯藏第4天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；采后貯藏第3天和第5天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；其中，采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮NADP含量在采收當(dāng)天和貯藏第4天分別是對(duì)照組的1.43 倍和1.70 倍。

由圖7C可知，不同處理組采后龍眼果實(shí)果皮NADH含量變化趨勢(shì)不一樣。采前噴施DA-6龍眼果實(shí)果皮NADH含量始終低于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，采后貯藏第2天和第6天二者差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05）；采后貯藏至第3天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，貯藏第3、6天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮NADH含量分別比對(duì)照組低30.22%、18.76%。

由圖7D可知，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮NADPH含量在同一貯藏時(shí)間始終高于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在采后貯藏第1天二者差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）；其中，貯藏第1天，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮NADPH含量比對(duì)照組高40.23 %。

上述結(jié)果表明，采前噴施DA-6可保持較高采后龍眼果實(shí)果皮NADP（H）和較低果皮NAD（H）含量。

圖7 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)貯藏期間果皮NAD（A）、NADP（B）、NADH（C）、NADPH（D）含量的影響Fig. 7 Effect of pre-harvest spray application of DA-6 on contents of NAD (A), NADP (B), NADH (C) and NADPH (D) in pericarp of postharvest longan fruit during storage

3 討 論

3.1 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)耐貯性的影響及其與果皮能量水平的關(guān)系

采后新鮮果蔬貯藏期間能量水平是調(diào)控果蔬耐貯性的重要因素[17-18,27,34-35]。維持較高的能量水平有助于抵御病原菌侵染、活性氧攻擊等逆境脅迫時(shí)所需的能量正常供應(yīng)，進(jìn)而有利于其他正常生理代謝的進(jìn)行，從而增強(qiáng)采后新鮮果蔬的耐貯性[15,19-21,31,36]。因此，采后新鮮果蔬的耐貯性可以通過(guò)能量水平進(jìn)行評(píng)價(jià)。通常情況下，能量水平越高，則果蔬耐貯性越強(qiáng)；反之，能量水平越低，則果蔬耐貯性越差[16-21,25,34-36]。線粒體是產(chǎn)生能量的主要細(xì)胞器，細(xì)胞內(nèi)能量水平可以用ATP、ADP含量和能荷評(píng)價(jià)[17-18,36]。在果蔬組織中，正常的能量供應(yīng)對(duì)保持細(xì)胞膜系統(tǒng)、質(zhì)膜、液泡、線粒體等細(xì)胞器膜的結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性和功能具有重要作用[3,15-18,20,26,36]。有研究發(fā)現(xiàn)，能量供應(yīng)不足是導(dǎo)致果蔬組織細(xì)胞膜系統(tǒng)破壞的重要因素之一，進(jìn)而導(dǎo)致組織容易發(fā)生褐變[3,16,18,26]。Wang Tian等[16]研究發(fā)現(xiàn)，采后荔枝果實(shí)經(jīng)褪黑激素處理后可以保持采后貯藏期間較高的能量水平，進(jìn)而有效保持較好的果皮細(xì)胞膜系統(tǒng)，從而有效延緩采后荔枝果皮褐變和果實(shí)衰老的發(fā)生。Jin Peng[17]和Wang Junwei[18]等研究報(bào)道，經(jīng)草酸處理的桃果實(shí)和經(jīng)間歇升溫處理的南果梨果實(shí)冷藏期間能量水平有所提高，通過(guò)有效提高冷藏期間抗冷性保持較好的果皮細(xì)胞膜系統(tǒng)，從而有效減輕采后果實(shí)果皮褐變和冷害的發(fā)生。Li Meiling等[25]研究報(bào)道，ATP處理采后龍眼果實(shí)可使其能量合成系統(tǒng)得到較好的維護(hù)而保持較高的能量水平，進(jìn)而有效減輕果皮細(xì)胞膜系統(tǒng)的破壞，有效延緩采后龍眼果皮褐變的發(fā)生。

本研究發(fā)現(xiàn)，兩組龍眼果實(shí)采后貯藏期間ATP、ADP含量和能荷呈下降趨勢(shì)，AMP含量呈上升趨勢(shì)，且與對(duì)照組相比，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)果皮ATP、ADP含量和能荷更高，AMP含量更低（圖2A～D）。此外，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組龍眼果實(shí)相比，采前噴施DA-6能延緩龍眼果實(shí)果皮褐變指數(shù)和果皮細(xì)胞膜透性的上升，減輕采后龍眼果實(shí)貯藏期間膜脂代謝[28-29]。由此可以推測(cè)，采前噴施DA-6龍眼果實(shí)可維持較好的果皮細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，這與保持較高的果皮ATP、ADP含量和能荷有關(guān)，進(jìn)而確保采后龍眼果實(shí)貯藏期間正常的能量供應(yīng)，從而有效減輕龍眼果皮褐變的發(fā)生。

3.2 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)耐貯性的影響及其與果皮ATPase活力的關(guān)系

采后新鮮果實(shí)細(xì)胞能量合成和供應(yīng)與ATPase活力密切相關(guān)[15,17-18,34,36-40]。ATPase存在于質(zhì)膜、液泡和線粒體等細(xì)胞器膜上，其主要包含H＋-ATPase、Ca2＋-ATPase和Mg2＋-ATPase等；它們對(duì)維持組織細(xì)胞內(nèi)外離子的平衡、正常的能量合成和供應(yīng)起著重要的作用[15,36,38]。ATPase功能受阻時(shí)，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境可能會(huì)不穩(wěn)定，而使質(zhì)膜、液泡和線粒體結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞，從而導(dǎo)致能量供應(yīng)不足和能量利用受限制，最終引起采后新鮮果實(shí)衰老加快和耐貯性變差[15,36,38]。趙穎穎[39]和陳文烜[40]等研究報(bào)道，采后經(jīng)低溫預(yù)貯和減壓處理的桃果實(shí)可有效保持較高的果肉線粒體H＋-ATPase和Ca2＋-ATPase活力，從而有利于能量的合成和供應(yīng)，進(jìn)而有效減輕桃果實(shí)冷害的發(fā)生。Zhang Zhengke等[41]研究發(fā)現(xiàn)，采后荔枝果實(shí)經(jīng)茶籽油處理可有效保持較高的果皮線粒體H＋-ATPase和Ca2＋-ATPase活力，有利于細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和能量的合成和供應(yīng)，保持較高能量水平，從而有效減輕荔枝果實(shí)果皮褐變。Lin Yixiong等[36]研究報(bào)道，采后龍眼果實(shí)貯藏期間積累過(guò)量的活性氧會(huì)導(dǎo)致貯藏期間質(zhì)膜、液泡膜和線粒體膜H＋-ATPase、Ca2＋-ATPase和Mg2＋-ATPase活力下降，不利于細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和能量的合成，進(jìn)而保持較低的能量水平，加快龍眼果實(shí)果肉自溶和品質(zhì)劣變的發(fā)生。Lin Yifen等[23]研究發(fā)現(xiàn)，龍眼果實(shí)采后經(jīng)棓酸丙酯處理可以有效抑制貯藏期間活性氧的積累，有利于細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和能量的合成，確保了采后貯藏期間正常的能量需求，從而有效減輕龍眼果皮褐變。

本研究發(fā)現(xiàn)，采前噴施DA-6可保持較高龍眼果實(shí)的果皮能量水平（圖2），較高的果皮質(zhì)膜、液泡膜和線粒體膜H＋-ATPase、Ca2＋-ATPase和Mg2＋-ATPase活力（圖3～5）。這說(shuō)明采前噴施DA-6可通過(guò)保持較高龍眼果實(shí)的果皮ATPase活力有效保證果皮細(xì)胞內(nèi)離子平衡，從而維護(hù)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，使質(zhì)膜、液泡和線粒體保持正常的功能，確保正常的能量合成和保證細(xì)胞的能量供應(yīng)，有效減輕采后龍眼果實(shí)果皮褐變，增強(qiáng)果實(shí)耐貯性。

3.3 采前噴施DA-6對(duì)采后龍眼果實(shí)耐貯性的影響及其與果皮NADK活力、吡啶核苷酸水平的關(guān)系

采后新鮮果蔬的貯藏品質(zhì)、耐貯性、衰老進(jìn)程與吡啶核苷酸水平密切相關(guān)[20,31]。吡啶核苷酸（NAD、NADH、NADP和NADPH）是呼吸代謝強(qiáng)弱的調(diào)節(jié)輔助因子和電子供體，從而影響采后貯藏期間細(xì)胞內(nèi)能量水平[20,31,42-44]。NADK是催化細(xì)胞質(zhì)中的NAD與ATP磷酸化生成NADP的唯一酶，可調(diào)節(jié)NAD和NADP水平，并有調(diào)控許多生理代謝的作用[31,42,45]。NAD主要參與呼吸代謝過(guò)程中的糖酵解和三羧酸循環(huán)，NAD得到電子而生成NADH；NADP在呼吸代謝過(guò)程中的磷酸戊糖途徑得到電子而生成NADPH[20,31,42-45]。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組龍眼果實(shí)相比，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)可保持較高的果皮NADK活力（圖6）和NADP含量（圖7B），以及較低的果皮NAD含量（圖7A）。此結(jié)果與NADK能催化NAD磷酸化生成NADP相一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組龍眼果實(shí)相比，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)還能保持較低的果皮NAD（圖7A）和NADH（圖7C）含量，這說(shuō)明采前噴施DA-6削弱了龍眼果實(shí)采后貯藏期間糖酵解和三羧酸循環(huán)。此外，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)可保持較高的果皮NADP（圖7B）和NADPH（圖7D）含量，這說(shuō)明采前噴施DA-6誘導(dǎo)了龍眼果實(shí)采后貯藏期間戊糖磷酸途徑的提高而有利于生成ATP（圖2A）。本課題組前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)可保持較低的果實(shí)呼吸強(qiáng)度[28]。結(jié)合本研究結(jié)果，采前噴施DA-6可保持較高龍眼果實(shí)的果皮能量水平（圖2）。因此，可以推測(cè)采前噴施DA-6處理可通過(guò)調(diào)節(jié)龍眼果實(shí)采后貯藏期間果皮NADK活力而影響果皮細(xì)胞內(nèi)NAD（H）與NADP（H）含量比例，進(jìn)而促進(jìn)磷酸戊糖途徑和抑制糖酵解和三羧酸循環(huán)，從而有效降低采后龍眼果實(shí)呼吸強(qiáng)度和保持較高能量水平，減輕龍眼果實(shí)果皮褐變發(fā)生和提高果實(shí)耐貯性。

采后新鮮果蔬貯藏期間進(jìn)行呼吸作用，在呼吸鏈的電子傳遞過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生和積累活性氧，過(guò)量的活性氧會(huì)加速細(xì)胞氧化和衰老[13,45]。NADH比NADPH傳遞電子的速率更快，則會(huì)產(chǎn)生和積累更多的活性氧；而NADPH可以通過(guò)抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)在清除活性氧過(guò)程中起重要作用[39-40]。本研究發(fā)現(xiàn)，采前噴施DA-6的龍眼果實(shí)可保持較低的果皮NADH（圖6C）和較高的NADPH（圖6D）含量，可以推斷采前噴施DA-6可能會(huì)減少采后貯藏期間龍眼果實(shí)果皮細(xì)胞內(nèi)活性氧的積累和提高活性氧清除能力。本研究結(jié)果與前期研究發(fā)現(xiàn)的采前噴施DA-6可通過(guò)提高龍眼果實(shí)采后貯藏期間活性氧清除能力而降低活性氧的積累，從而有效減輕活性氧對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能破壞的結(jié)果[29,30]相一致。因此認(rèn)為，采前噴施DA-6可通過(guò)提高龍眼果實(shí)采后貯藏期間果皮NADK活力來(lái)調(diào)節(jié)NADH和NADPH含量，從而降低果皮細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，進(jìn)而維持較好的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能，延緩采后龍眼果實(shí)果皮褐變發(fā)生和提高果實(shí)耐貯性。

4 結(jié) 論

采前噴施含量為10 mg/kg的DA-6可有效保持龍眼果實(shí)較高的果皮質(zhì)膜、液泡膜和線粒體膜H＋-ATPase、Ca2＋-ATPase和Mg2＋-ATPase活力，較高的果皮NADK活力和NADP（H）含量，較低的果皮NAD（H）含量，進(jìn)而有利于采后龍眼果實(shí)貯藏期間保持較高的能量水平，從而有效減輕龍眼果實(shí)果皮褐變和增強(qiáng)龍眼果實(shí)耐貯性。