馬艷，張寧梅，何靜子

1.延安市疾病預(yù)防控制中心，陜西 延安 716000；2.延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 延安 716000

美國(guó)于1981 年首次報(bào)道了5 例艾滋病病例，由此拉開(kāi)了人類(lèi)了解艾滋病的序幕[1]。據(jù)2020年調(diào)查統(tǒng)計(jì)全世界感染艾滋病者約3 800 萬(wàn)，全世界接受抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法者約2 540萬(wàn)。僅2020年新發(fā)感染者就有170萬(wàn)人，每年死于艾滋病相關(guān)的疾病約69萬(wàn)人，新發(fā)感染患者的數(shù)量在逐年遞增。目前艾滋病已經(jīng)成為威脅我國(guó)公共衛(wèi)生問(wèn)題之一[2]。對(duì)艾滋病患者如果可以做到早發(fā)現(xiàn)早治療，就有助于幫助患者提高生活質(zhì)量，從而減少艾滋病的傳播[3]。目前艾滋病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要包括人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)抗體檢測(cè)、核酸檢測(cè)。HIV抗體檢測(cè)的篩查方法主要主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、化學(xué)發(fā)光(CIA)、免疫熒光試驗(yàn)(IFA)以及快速檢測(cè)(RT)等。HIV 抗體確證實(shí)驗(yàn)是診斷HIV 感染的金標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)內(nèi)目前常用的HIV 抗體確證實(shí)驗(yàn)是免疫印跡試驗(yàn)(Western blot，WB)。本研究對(duì)2015—2020年延安市HIV 確證試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行分析，以探討其條帶特點(diǎn)和人群特征，為提高條帶判讀能力以及艾滋病防治工作提供支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取的標(biāo)本嚴(yán)格按照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2020年修訂版)》[4]采樣、運(yùn)輸和保存，標(biāo)本類(lèi)型均為血清或血漿。標(biāo)本為2015 年1 月至2020 年12 月在延安市各個(gè)篩查實(shí)驗(yàn)室中HIV 初篩陽(yáng)性的患者，經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)WB 試驗(yàn)后診斷為HIV-1 抗體陽(yáng)性、HIV-1抗體陰性及HIV-1抗體不確定者共571例。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) WB 試劑為MP 公司生產(chǎn)的HIV1+2 型抗體檢測(cè)試劑盒，均在有效期內(nèi)，按照說(shuō)明書(shū)要求存放，實(shí)驗(yàn)操作人員嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)操作人員均持有上崗證書(shū)，結(jié)果判讀由兩人以上進(jìn)行肉眼判讀。

1.3 結(jié)果判定 確證實(shí)驗(yàn)結(jié)束后根據(jù)條帶并結(jié)合帶型進(jìn)行HIV 抗體結(jié)果判定。HIV 抗體陰性的判斷標(biāo)準(zhǔn)則是沒(méi)有出現(xiàn)特異性條帶。HIV 抗體不確定的判斷標(biāo)準(zhǔn)則是出現(xiàn)任何特異性條帶，但不足于被判斷為陽(yáng)性，則需要檢測(cè)者在一定期限內(nèi)再次檢測(cè)，再根據(jù)檢測(cè)結(jié)果做出判斷。HIV抗體陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)是需要檢測(cè)出2個(gè)ENV(gp160、gp120、gp41)及任何一個(gè) GAG (p17、p24、p55)或者檢測(cè)出 2 個(gè) ENV(gp160、gp120、gp41)及任何一個(gè) POL (p31、p51、p66)。若HIV-2抗體陽(yáng)性的判斷則需滿(mǎn)足上述條件并且清晰出現(xiàn)HIV-2特定條帶。HIV檢測(cè)流程及判定結(jié)果都是參照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2020 年修訂版)》[4]以及使用的試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。資料采用描述性分析方法，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 延安市HIV 確證人群概況 2015—2020 年本確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)571 份。確證結(jié)果顯示HIV-1 抗體陽(yáng)性率為 76.53% (437/571)，HIV-1 抗體不確定率為4.73%(27/571)，HIV-1抗體陰性率為18.73%(107/571)，見(jiàn)表1。各年份HIV抗體陽(yáng)性、陰性、不確定的檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=25.342，P＜0.05)，見(jiàn)表2。經(jīng)過(guò)WB確證實(shí)驗(yàn)后，HIV-1抗體陽(yáng)性為444份，HIV-1 抗體不確定為20 份，HIV-1 抗體陰性為107份。444 份 HIV-1 抗體陽(yáng)性中，特異性全帶(gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p39、p31、p24、p17)共 254 份占58.12%。HIV-1抗體陽(yáng)性和HIV-1抗體不確定的標(biāo)本共464 份，其中檢測(cè)出ENV 基因：gp160、gp120、gp41，分別為 95.47% (443/464)、95.91% (445/464)和 94.18%(437/464)。檢測(cè)出 GAG 基因：p17、p24、p55，分別為84.91% (394/464)、86.85 (403/464)、66.16% (307/464)。檢測(cè)出 POL 基因：p31、p51、p66，分別為 89.22%(414/464)、91.16%(423/464)和91.16%(423/464)。

表1 延安市2015—2020年HIV 檢驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

表2 2015—2020年HIV感染樣本確證結(jié)果分析[例(%)]

2.2 延安市HIV 確證人群分布 經(jīng)過(guò)WB 實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)HIV-1 抗體陽(yáng)性構(gòu)成比例主要以男性為主，年齡在31～50歲之間，分布較多的是農(nóng)民和無(wú)業(yè)人群，文化程度以初中和初中以下為主。不同性別、年齡、職業(yè)和文化者的HIV-1 抗體陰性構(gòu)成比例均無(wú)明顯差異。HIV-1 抗體不確定的構(gòu)成比例男性明顯高于女性，大于等于60歲的比例最高，但不同職業(yè)、文化程度和婚姻狀況的HIV-1抗體不確定構(gòu)成比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表3。

表3 延安市HIV抗體WB實(shí)驗(yàn)人群分布特征

2.3 不同送檢單位陽(yáng)性確證結(jié)果的條帶檢出分布情況比較 送檢單位主要是轄區(qū)內(nèi)HIV 篩查實(shí)驗(yàn)室，包括血站、CDC、醫(yī)院和VCT 等，經(jīng)過(guò)WB 確證實(shí)驗(yàn)后確證例數(shù)分別為25例、117例、278例和24例。其中醫(yī)院的陽(yáng)性率最高91.44%，血站的陽(yáng)性率最低26.32%。gp160、gp120 的檢出率均為100%，p55 的檢出率最低。不同組間對(duì)比發(fā)現(xiàn)血站送的樣本中條帶的檢出率較其他組高，但是血站的陽(yáng)性率較低可能與血站的篩查試劑靈敏度較高有關(guān)。相同條帶在不同的送檢單位之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表4。

表4 不同送檢單位陽(yáng)性確證結(jié)果的條帶檢出分布情況比較[例(%)]

2.4 不同年齡組確證陽(yáng)性結(jié)果的條帶檢出分布情況比較 感染者最小7 歲，最大85 歲。≤18 歲占1.8%(8/444)，19～30 歲占29.95%(133/444)，31～50 歲占50%(222/444)，51～60 歲占 14.86%(66/444)，60 歲以上占3.38% (15/444)。在不同年齡組間gp160、gp120 的檢出率均為100%，p55 和p17 的檢出率都相對(duì)較低。p24條帶在不同年齡組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其他條帶在不同年齡組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 p24 在≤18 歲組內(nèi)檢出率最低。相同條帶在≥60歲的組內(nèi)檢出率較低，這可能與年齡有關(guān)。相同條帶在31～50 歲組內(nèi)的檢出率較高，這可能也與年齡有一定的聯(lián)系，見(jiàn)表5。

表5 不同年齡組確證陽(yáng)性結(jié)果的條帶檢出分布情況比較[例(%)]

2.5 結(jié)婚與否陽(yáng)性確證結(jié)果條帶檢出分布情況比較 HIV-1 抗體陽(yáng)性根據(jù)婚姻狀態(tài)分組，條帶檢出率最低的為p55，其次為p17；條帶檢出率較高的為：p66、gp41、p24，相同條帶比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表6。

表6 結(jié)婚與否陽(yáng)性確證結(jié)果條帶檢出分布情況比較[例(%)]

3 討論

本確證實(shí)驗(yàn)室對(duì)延安市2015—2020年571份HIV樣本通過(guò)WB 法進(jìn)行了確證實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：HIV-1 抗體陽(yáng)性率為76.53%，HIV-1 抗體不確定率為4.73%，HIV-1 抗體陰性率為18.73%。通過(guò)數(shù)據(jù)分析得出HIV-1抗體的不確定主要是以早期感染和非特異性反應(yīng)為主的結(jié)論[5-7]。對(duì)HIV-1 抗體不確定的標(biāo)本要加強(qiáng)隨訪，將每一份標(biāo)本的檢測(cè)工作落實(shí)到位，這需要篩查實(shí)驗(yàn)室和確證實(shí)驗(yàn)室的相互配合，加強(qiáng)工作能力。同時(shí)希望確證試劑能加強(qiáng)靈敏度使試劑更一步完善[8-9]。延安市2015—2020 年根據(jù)年份不同的確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這也說(shuō)明了延安市HIV防控工作維持穩(wěn)定，沒(méi)有增加的趨勢(shì)。

HIV-1 抗體陽(yáng)性率為76.53%，男性陽(yáng)性率為84.01%，明顯高于女性的55.91%，這個(gè)結(jié)果與青島、揚(yáng)州等地的研究結(jié)果相同[10-11]。本研究發(fā)現(xiàn)女性的HIV-1 抗體陰性率明顯高于男性，但是男性和女性的HIV-1抗體不確定率相差不多。通過(guò)流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，近幾年隨著男男同性戀人數(shù)的不斷增加，男男性行為傳播成為男性感染的重要途徑[12-14]。要加強(qiáng)宣傳教育，加大檢測(cè)力度，尤其是對(duì)男男同性人群。男男同性戀人群是一個(gè)值得社會(huì)關(guān)注的群體，同時(shí)也是一個(gè)HIV預(yù)防的研究方向。

根據(jù)樣本來(lái)源的不同，確證結(jié)果的差異性也很大。血站的HIV-1 抗體陽(yáng)性率最低為26.32%，醫(yī)院HIV-1抗體陽(yáng)性率最高為91.44%，大部分血站送來(lái)的標(biāo)本是通過(guò)自愿獻(xiàn)血，其中獻(xiàn)血人群可能有腫瘤患者或者自身患有免疫性疾病的人，也可能和血站的初篩試劑的靈敏性有關(guān)，這些都是造成HIV-1 抗體陽(yáng)性率低的原因[15-17]。醫(yī)院的陽(yáng)性樣本和CDC的陽(yáng)性樣本都比較多，很多醫(yī)院樣本發(fā)現(xiàn)的時(shí)候都已經(jīng)是HIV的中晚期，很多病人都是在入院后才知道自己的身體狀況，CDC的陽(yáng)性標(biāo)本往往都是基層單位經(jīng)過(guò)篩查的標(biāo)本，送來(lái)確證實(shí)驗(yàn)室后經(jīng)過(guò)WB確證后陽(yáng)性率也很高，自愿咨詢(xún)的陽(yáng)性率也達(dá)到了64.86%，這說(shuō)明現(xiàn)在人們對(duì)HIV 的認(rèn)知越來(lái)越多。有研究發(fā)現(xiàn)gp120、p24 是HIV感染后最早出現(xiàn)的抗體[18]。本次研究中g(shù)p120 和p24的檢出率分別為100%和99.77%，和先前研究結(jié)果相同。p24的高檢出率是因?yàn)槠洚a(chǎn)生穩(wěn)定以及特異性高。對(duì)HIV 要加大宣傳尤其是對(duì)年輕人群和高危人群，讓大家了解HIV 的傳播途徑和治療方法，加大對(duì)自身的保護(hù)力度。對(duì)醫(yī)院和CDC要提高檢測(cè)能力，如果對(duì)HIV感染者能做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，那么患者就能得到更好的救治和保護(hù)。