敖 蕊，許晨遠，朱崇淼，姚 文，鄭衛(wèi)江*

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，南京 210095；2.南京致潤生物科技有限公司，南京 211124)

雞輸卵管囊腫(cyst of fallopian tube，CFT)是由各種病因引起的輸卵管腫脹，內(nèi)含數(shù)量不等的液體的一類疾病的總稱，也稱為輸卵管積液[1]。蛋雞輸卵管囊腫的臨床癥狀多表現(xiàn)為病雞腹部膨大，行走呈企鵝狀；剖檢后可觀察到不同程度的輸卵管積水，囊腫擠壓生殖器官和其他腹部臟器并伴有萎縮或出血[1-2]。據(jù)統(tǒng)計，不同品種的蛋雞均可發(fā)生輸卵管囊腫；且隨著蛋雞養(yǎng)殖規(guī)?；?、集約化的迅速發(fā)展，使蛋雞長期處于亞健康狀態(tài)，很容易誘發(fā)該疾病[3-4]。

輸卵管囊腫是產(chǎn)蛋雞比較常見的疾病。有研究表明，輸卵管囊腫是慢性輸卵管炎的常見并發(fā)癥，可引起輸卵管內(nèi)滲或積膿[5]。Bisgaard和Dam[6]報道了丹麥蛋雞輸卵管炎的患病率為1.26%，而在澳大利亞患病率為11%[7]。Zhang等[8]臨床調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在種雞和商業(yè)雞中，輸卵管囊腫的患病率分別為10%和15.1%。目前，對于蛋雞輸卵管囊腫研究多為探究其發(fā)病原因，如林楠[4]發(fā)現(xiàn)傳染性支氣管炎是輸卵管囊腫蛋雞可能的發(fā)病原因；閆志偉[1]采集輸卵管囊腫病雞組織進行細菌分離、血清鑒定，發(fā)現(xiàn)均可分離出卡氏桿菌及大腸桿菌；而輸卵管囊腫對蛋雞屠宰性能、器官指數(shù)、血清生化和免疫球蛋白的影響還鮮有報道。因此，本研究旨在為蛋雞輸卵管囊腫病提供更多的數(shù)據(jù)支撐，為后期預(yù)防和監(jiān)測蛋雞輸卵管囊腫提供理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

選取同一飼養(yǎng)環(huán)境和日齡(54周齡)的健康蛋雞(CTR,n=9)和患有輸卵管囊腫病的蛋雞(CFT，n=7)。健康和患病蛋雞均由病理專家現(xiàn)場挑選；健康蛋雞的挑選標準為：在日產(chǎn)蛋率為87%～88%、體重在1.9～2.1 kg蛋雞中隨機挑選，所選健康雞其行為、產(chǎn)蛋、采食量均正常(圖1A)；輸卵管囊腫蛋雞的挑選標準為：患病雞腹部膨大，觸及地面，腹部觸之柔軟有“波動感”；站立和行走呈“企鵝”狀(圖1E)。

1.2 樣品采集及指標測定

健康和患輸卵管囊腫蛋雞屠宰前禁食12 h，稱量活重后于頸動脈采血，使用促凝管采集血液，通過冷凍離心機3 000 r·min-1離心15 min，吸取上清于凍存管中，制備血清樣，-80 ℃保存，采集肺、胸腺、脾、十二指腸、空腸、回腸、盲腸以及卵巢等樣品。

1.2.1 屠宰性能測定 稱量蛋雞活重、屠體重、胸肌重及全凈膛重，參照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》(NY/T823—2004)[9]測定兩組動物的屠宰性能。

1.2.2 器官指數(shù)測定 稱取腸道、卵巢等組織的重量用于計算器官指數(shù)，計算公式如下：

器官指數(shù)(%)=各器官重/活體重×100。

參照Hao等[10]的方法，對卵巢卵泡直徑進行計數(shù)：小白卵泡(SWF)直徑為2～4 mm，大白卵泡(LWF)為6～8 mm，小黃卵泡(SYF)直徑8～10 mm、等級卵泡(GF)直徑>10 mm。

1.2.3 組織學(xué)病理觀察 取蛋雞的肺、卵巢及輸卵管置于4%的多聚甲醛中固定，進行石蠟包埋、連續(xù)切片(5 μm)、HE染色、鏡檢[11]。

1.2.4 血清免疫球白的測定 血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定。相關(guān)免疫球蛋白ELISA試劑盒均購自上海江萊生物科技有限公司。

1.2.5 血清生化指標的測定 采用HITACHI-7020全自動生化分析儀測定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、堿性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和葡萄糖(GLU)。血清生化相關(guān)試劑盒均購自南京美康科技股份有限公司。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

將試驗所得數(shù)據(jù)通過Excel 2016 進行整理，運用SPSS 26.0軟件進行獨立樣本t檢驗分析，數(shù)據(jù)以“平均值(mean)±標準誤差(SD)”表示。P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，0.05≤P<0.10表示有提高或降低的趨勢。

2 結(jié) 果

2.1 輸卵管囊腫蛋雞外觀、內(nèi)臟、卵巢和肺臟外觀及組織病理學(xué)觀察

圖1為健康和輸卵管囊腫蛋雞內(nèi)臟、卵巢和肺外觀剖檢結(jié)果。由圖1可知，健康蛋雞腹腔內(nèi)臟器官排布正常(圖1B)；進一步分離卵巢、輸卵管(圖1C)和肺(圖1D)均無明顯異常。但是，輸卵管囊腫蛋雞打開腹腔后可見輸卵管出現(xiàn)似球狀囊腫(圖1F)；取出囊腫內(nèi)液體發(fā)現(xiàn)，大部分液體清亮透明(圖1F)，部分含有白色顆粒(圖片未展示)。進一步對卵巢、輸卵管和肺臟的外觀檢查發(fā)現(xiàn)，輸卵管囊腫蛋雞卵巢發(fā)育良好，可見不同發(fā)育階段的卵泡(圖1G)；偶見個別蛋雞卵巢萎縮和發(fā)育不良(圖片未展示)；此外，部分患病雞的肺可看到黑色霉點狀的病變(圖1H)。

A～D為對照組(CTR)，A.外觀；B.內(nèi)臟解剖圖；C.卵巢及輸卵管；D.肺。E～H為輸卵管囊腫組(CFT)，E.腹部腫大，站立呈“企鵝狀”；F.輸卵管內(nèi)充滿積液；G.卵泡發(fā)育正常；H.箭頭處表示肺有“霉點狀”病變

組織切片HE染色結(jié)果顯示(圖2)：對照組蛋雞肺清晰可見其支氣管、肺泡及毛細血管且無明顯病理變化(圖2A)；卵巢組織可見多個卵泡且卵泡發(fā)育正常(圖2C)；輸卵管組織膨大部黏膜層纖毛排列整齊(圖2E)。進一步對虛線矩形標識處放大觀察(100倍)發(fā)現(xiàn)肺無出血、淤血、水腫及炎性細胞浸潤，肺泡內(nèi)無漿液、紅細胞等雜質(zhì)(圖2H)；卵巢結(jié)締組織未見毛細血管充血(圖2J)；輸卵管膨大部黏膜層、漿膜層未見出血，胞膜、胞漿邊界清楚(圖2L)。與對照組相比，輸卵管囊腫組蛋雞對應(yīng)臟器出現(xiàn)部分病理學(xué)變化，具體表現(xiàn)為：肺出現(xiàn)廣泛性出血(圖2B)，如箭頭標識所示；卵巢皮質(zhì)區(qū)出現(xiàn)充血(圖2D)；輸卵管彭大部黏膜層多處纖毛損傷嚴重，排列不齊，腺體結(jié)構(gòu)模糊(圖2F)。進一步放大觀察(100倍)發(fā)現(xiàn)肺毛細血管充血，肺泡腔內(nèi)充滿大量的紅細胞、炎性細胞及紅色滲出物(圖2I)，紅色箭頭處肺泡壁增厚；卵巢的病變主要表現(xiàn)在皮質(zhì)區(qū)毛細血管擴張出血，炎性細胞浸潤，其它未見明顯病變(圖2K)；輸卵管膨大部黏膜層纖毛斷裂、脫落，嚴重時無纖毛，漿膜層有炎性細胞浸潤(圖2M)。

A、H.CTR組肺；B、I.CFT組肺，肺泡腔內(nèi)充滿紅色滲出物；C、J.CTR組卵巢；D、K.CFT組卵巢，皮質(zhì)區(qū)毛細血管充血；E、L.CTR組輸卵管；F、M.CFT組輸卵管，膨大部絨毛斷裂。A-F.放大倍數(shù)20倍，標尺500 μm; H-M.放大倍數(shù)100倍，標尺100 μm

2.2 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對屠宰性能的影響

由表1可知，輸卵管囊腫組蛋雞的活重和屠體重較對照組極顯著升高(P<0.01),屠體率顯著升高(P<0.05)，但全凈膛率極顯著降低(P<0.01)；胸肌重、胸肌率及全凈膛重?zé)o顯著差異(P>0.05)。此外，輸卵管囊腫組蛋雞輸卵管積液體積為(820.00±285.54)mL，而對照組無積液。

表1 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對屠宰性能的影響

2.3 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對器官重、器官指數(shù)和卵泡數(shù)量的影響

由表2可知，輸卵管囊腫組蛋雞盲腸指數(shù)、十二指腸重、空腸重和回腸重及對應(yīng)的指數(shù)較對照組極顯著降低(P<0.01)，盲腸重和卵巢指數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)；對脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、等級卵泡、小黃卵泡、小白卵泡和大白卵泡均無顯著影響(P>0.05)。

表2 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對器官重、器官指數(shù)和卵泡數(shù)量的影響

2.4 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對血清生化和免疫球蛋白的影響

由表3可知，輸卵管囊腫組蛋雞血清中ALT和AST活性較對照組極顯著升高(P<0.01)，ALP活性低于對照組(P<0.01)；TP(P=0.054)和GLOB(P=0.095)含量有升高的趨勢；ALB和GLU含量差異不顯著(P>0.05)；血清IgM含量有升高的趨勢(P=0.085)，血清IgA和IgG含量差異不顯著(P>0.05)。

表3 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對血清生化和免疫球蛋白的影響

3 討 論

3.1 輸卵管囊腫蛋雞的剖檢及組織學(xué)觀察

禽類的泄殖腔是消化、泌尿和生殖系統(tǒng)的共同通道已被認為是輸卵管囊腫主要的感染途徑[12]。前期研究表明，由雞桿菌引起的蛋雞輸卵管囊腫的病狀多見于呼吸道及生殖道[13]。本研究中對輸卵管囊腫蛋雞剖檢發(fā)現(xiàn)肺部有明顯的“霉點狀”病變，個別卵巢發(fā)育不良、卵泡萎縮變性；輸卵管內(nèi)蓄積積液。Ajayi等[14]研究發(fā)現(xiàn)，輸卵管囊腫黑雞的腹腔中出現(xiàn)中度彌漫性腹膜炎，伴有漿液性液體，存在發(fā)育良好的卵泡。Wang等[15]對60～90周齡的蛋雞進行病理及細菌感染調(diào)查發(fā)現(xiàn)蛋雞的輸卵管囊腫可能是由泄殖腔區(qū)域的細菌上移引起的。本試驗中蛋雞輸卵管囊腫病的感染類型及具體致病原因還有待進一步調(diào)查和研究。

劉慧敏[13]發(fā)現(xiàn)，輸卵管囊腫能致雞呼吸道及生殖道組織損傷且有明顯的病理變化，表現(xiàn)在氣管、肺、卵巢及輸卵管均出現(xiàn)出血或炎性細胞浸潤等。本試驗中輸卵管囊腫蛋雞呼吸道和生殖道的組織病理學(xué)觀察也發(fā)現(xiàn)了相似的結(jié)果，造成蛋雞肺和輸卵管組織上述病理變化的可能原因為：輸卵管囊腫使肺、輸卵管受損，造成炎性物質(zhì)增加；同時實質(zhì)器官上皮細胞受損，導(dǎo)致內(nèi)皮腫脹，紅細胞外滲，阻礙血液循壞，進而加重實質(zhì)器官的病變及壞死。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，輸卵管膨大部黏膜層腺體出現(xiàn)炎癥且呈紅色，猜測是細菌引發(fā)感染造成血液循壞障礙[13]，使?jié)B出物匯集于輸卵管造成囊腫無法產(chǎn)蛋。本試驗中雖觀察到卵巢、肺及輸卵管病變，但輸卵管囊腫與上述臟器病變的相互關(guān)系及具體機制還需進一步研究。

3.2 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對屠宰性能的影響

屠宰率與全凈膛率是禽類生產(chǎn)性能的重要指標[16]。林晴[17]研究發(fā)現(xiàn)，患有輸卵管囊腫的30周齡海蘭褐病雞輸卵管內(nèi)積液體積量為500～1 000 mL。Williamson[2]研究發(fā)現(xiàn)，71周齡的白來航輸卵管囊腫病雞的體重30%在于輸卵管內(nèi)蓄積的積液重量，這與本試驗中觀察到的結(jié)果類似，輸卵管囊腫組蛋雞積液體積為(820.00±285.54)mL，占蛋雞體重的28%；這也解釋了輸卵管囊腫組蛋雞活重、屠體重和屠體率高于健康組，但全凈膛率卻低于對照組蛋雞的原因。

3.3 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對器官重量、器官指數(shù)和卵泡數(shù)量的影響

消化器官的重量和大小是衡量生理功能的指標；禽類消化器官的相對重量與養(yǎng)分代謝率呈正相關(guān)[18-19]。本試驗中輸卵管囊腫蛋雞組的十二指腸、空腸、回腸重量及器官指數(shù)顯著低于對照組，其原因可能為腸道的重量與營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收有關(guān)；輸卵管囊腫擠壓臟器向前方移動，致使一些臟器萎縮或貧血，造成其營養(yǎng)吸收、消化能力下降；另外，隨著蛋雞日齡的增長，其小腸的增長速率降低；在產(chǎn)蛋高峰后期，蛋雞的消化代謝功能減弱，導(dǎo)致小腸的重量及器官指數(shù)降低。

有研究表明，輸卵管積液的存在與誘導(dǎo)卵巢功能下降、卵泡發(fā)育不良有關(guān)且不利于生殖[20-21]。王繼安等[22]發(fā)現(xiàn)，蛋雞早期感染腎性傳染性支氣管炎會導(dǎo)致輸卵管囊腫，出現(xiàn)“假母雞”情況，致使生殖障礙，無法產(chǎn)蛋。本試驗中輸卵管囊腫蛋雞在卵泡數(shù)量方面沒有顯著差異，未出現(xiàn)卵泡壞死或卵泡不發(fā)育情況，暗示本研究中引起該病癥的病原體主要以引起輸卵管積液為特征，但其生殖功能仍完善。需要指出的是，雖然卵泡發(fā)育成熟，但因輸卵管內(nèi)蓄積大量液體可能會阻止卵泡進入輸卵管，導(dǎo)致其無法正常產(chǎn)蛋，造成雞群產(chǎn)蛋量降低[7]。

3.5 海蘭灰蛋雞患輸卵管囊腫對血清生化指標和免疫球蛋白的影響

血清生化參數(shù)是動物生理功能的內(nèi)部微觀反映，間接反映了營養(yǎng)代謝、器官功能和健康狀況[23]。Okorie-Kanu等[24]認為，無論ALT、AST、ALP各種酶濃度和血尿素氮(BUN)等的增加或減少，都間接提示感染禽病毒的禽類正在發(fā)生器質(zhì)性疾病。Huang等[25]觀察到腎性傳染性支氣管炎(NIBV)組的胚雞血漿ALT、ALP和AST水平顯著提高,認為NIBV感染可引起胚胎雞的肝損傷。本試驗也得到了相似的結(jié)果，即輸卵管囊腫組蛋雞ALT和AST含量極顯著高于對照組，ALP含量極顯著低于對照組；上述結(jié)果暗示輸卵管囊腫可能還導(dǎo)致了肝功能的損傷[26]。ALT和AST是使用最廣泛的肝健康臨床生物標志物，ALT和AST在肝細胞損傷后會從肝細胞滲漏到血液中，當(dāng)肝受損時，它們的水平通常會上升[27]。免疫球蛋白在應(yīng)對外來有害物質(zhì)入侵時發(fā)揮著重要作用[28]。朱新葉和程涇[29]研究發(fā)現(xiàn)，患有輸卵管炎偶伴有輸卵管積液的鼠血清分泌性免疫球蛋白(sIgA)與IgA較對照組均增高但差異不顯著，本試驗得到了類似的結(jié)果，輸卵管囊腫組的IgM、IgA和IgG含量均高于對照組但差異不顯著，提示輸卵管囊腫可能對蛋雞造成一定的炎癥反應(yīng)，機體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫防御響應(yīng)，但是其與輸卵管囊腫的相互關(guān)系尚需進一步的研究。

4 結(jié) 論

綜上所述，輸卵管囊腫提高蛋雞的活重、屠體重和屠體率，降低全凈膛率、消化器官指數(shù)和卵巢指數(shù)；極顯著提高蛋雞血清AST和ALT活性，降低血清ALP活性；并造成蛋雞肺、卵巢及輸卵管組織出現(xiàn)不同程度的病理損傷。

致謝：感謝南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院孫衛(wèi)東教授作為病理專家在篩選病雞中的幫助，及對本研究設(shè)計所提的寶貴意見。