王玉婷，于熙，岳佳音，華會明，孫雅婷*（. 沈陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，沈陽 0034；. 沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，沈陽 006）

長裂藤黃（

Garcinia lancilimba

）為藤黃科（Guttiferae）藤黃屬（

Garcinia

）植物，主要分布于我國云南省東南部，廣西西部和西南部地區(qū)，生于低丘、蔭坡、潮濕的溝谷密林下。藤黃屬植物有著悠久的民間用藥歷史，具有消炎作用，其代表性化合物為酮類化合物、間苯三酚類化合物、萜類化合物和黃酮類化合物?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，該屬植物具有抗腫瘤、抗氧化、抗菌和抗炎等多種藥理作用。長裂藤黃是中國特有的藤黃屬植物，但對其化學(xué)成分研究相對較少且研究部位為莖，為了更好地開發(fā)利用長裂藤黃的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性，本文對長裂藤黃葉的化學(xué)成分進行研究。本文采用硅膠柱色譜、開放ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、反相半制備高效液相色譜等多種色譜手段從長裂藤黃葉95%乙醇提取液的二氯甲烷萃取物中分離得到8個化合物，包括5個黃酮類，2個雙黃酮類，1個生育三烯酚類，分別鑒定為山柰酚（kaempferol，1）、芹菜素（apigenin，2）、5，7-二羥基-6，4'-二甲氧基黃酮（5，7-dihydroxy-6，4'-dimethoxyflavone，3）、槲皮素（quercetin，4）、木犀草素（luteolin，5）、pancibiflavonol（6）、藤黃雙黃酮（morelloflavone，7）、litchtocotrienol A（8）。通過理化常數(shù)測定、波譜數(shù)據(jù)分析等方法確定了化合物的結(jié)構(gòu)（見圖1）。

圖1 化合物1～8的結(jié)構(gòu)式Fig 1 Structures of the compounds 1～8

1 材料

Bruker ARX-400核磁共振波譜儀（Bruker 公司，TMS內(nèi)標）；Bruker micrOTOF-Q 高分辨電噴霧質(zhì)譜儀（Bruker 公司）；J-715圓二色譜儀（日本JASCO）；高效液相色譜儀（日本島津，配備SPD-20A紫外檢測器，LC-6AB高壓輸液泵）；色譜柱（YMC ODS-A，250 mm×20 mm，5 μm）；Bruker IFS-55紅外光譜儀（KBr壓片）；N1100DWB旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本EYELA）；柱色譜用硅膠（200～300目、100～200目）和薄層色譜用硅膠（青島海洋化工廠）；ODS柱色譜填料（100 μm，日本YMC公司）；Sephadex LH-20（GE公司）；色譜純甲醇、乙腈（天津科密歐公司），其他常規(guī)試劑均為分析純。

長裂藤黃葉于2010年采自云南省西雙版納熱帶植物園，經(jīng)陳渝工程師鑒定為藤黃屬植物長裂藤黃

Garcinia lancilimba

的葉。樣品標本保留于沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室。

2 提取分離

長裂藤黃葉12.4 kg在提取罐中用95%乙醇浸漬加熱提取3次，每次3 h，合并提取液，回收溶劑。將該醇提物混懸于水中，依次用等體積的石油醚、二氯甲烷和正丁醇萃取，分別減壓回收溶劑，得到二氯甲烷萃取物270 g。

取二氯甲烷萃取物270 g，進行硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)（100∶0～0∶100）進行梯度洗脫得到5個組分Fr.A～Fr.E。Fr.C組分進行硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮系統(tǒng)（100∶5～0∶100）進行梯度洗脫，得到7個亞組分Fr.C1～Fr.C7。Fr.C3經(jīng)ODS開放柱色譜（甲醇-水：30%～100%）和高效液相色譜純化得到化合物1（5.0 mg）和化合物2（3.0 mg）。Fr.C5依次經(jīng)過ODS柱色譜（甲醇-水：40%～100%）、重結(jié)晶以及高效液相色譜（流動相：80%甲醇）純化得到化合物8（30.0 mg）。Fr.C6經(jīng)ODS柱色譜和Sephadex LH-20凝膠柱色譜純化得到化合物3（5.6 mg）、化合物4（3.2 mg）和化合物5（3.5 mg）。Fr.D組分進行硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮系統(tǒng)（100∶5～100∶50）進行梯度洗脫，得到4個亞組分Fr.D1～Fr.D4。Fr.D3經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜和高效液相色譜純化得到化合物6（4.0 mg）和化合物7（7.0 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末（甲醇），10% 硫酸乙醇溶液顯黃色；三氯化鐵/鐵氰化鉀溶液顯藍色，提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基，推測可能為黃酮類化合物。H NMR（400 MHz，DMSO-

d

）譜表明

δ

12.47（1H，s，5-OH）為5位酚羥基質(zhì)子信號，

δ

9.53（1H，brs）為一個活潑質(zhì)子信號；一組B環(huán)AA'BB'偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號

δ

8.02（2H，d，

J

＝8.8 Hz，H-2'，6'），6.92（2H，d，

J

＝8.8 Hz，H-3'，5'），提示有4'-羥基取代；同時還顯示了一組A環(huán)6，8位間位偶合芳香質(zhì)子信號

δ

6.41（1H，d，

J

＝2.0 Hz，H-8），6.16（1H，d，

J

＝2.0 Hz，H-6），表明A環(huán)為5，7-二羥基取代。氫譜信號歸屬為：

δ

12.47（1H，s，5-OH），9.53（1H，brs，7/4'-OH），8.02（2H，d，

J

＝8.8 Hz，H-2'，6'），6.92（2H，d，

J

＝8.8 Hz，H-3'，5'），6.41（1H，d，

J

＝2.0 Hz，H-8），6.16（1H，d，

J

＝2.0 Hz，H-6）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻基本一致，鑒定化合物1為山柰酚（kaempferol）?；衔?：淡黃色粉末（甲醇），10%硫酸乙醇溶液顯黃色；三氯化鐵/鐵氰化鉀溶液顯藍色，提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基，推測可能為黃酮類化合物。H NMR（400 MHz，DMSO-

d

）譜中：

δ

12.46（1H，s，5-OH）為與羰基締合的羥基質(zhì)子信號；一組B環(huán)AA'BB'偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號

δ

7.98（2H，d，

J

＝8.3 Hz，H-2'，6'），6.90（2H，d，

J

＝8.3 Hz，H-3'，5'），提示有4'-羥基取代；A環(huán)6，8位間位偶合芳香質(zhì)子信號

δ

6.44（1H，d，

J

＝2.0 Hz，H-8），6.15（1H，d，

J

＝2.0 Hz，H-6），表明A環(huán)為5，7-二羥基取代；與化合物1相比，多了一個芳氫質(zhì)子信號

δ

6.68（1H，s，H-3），為黃酮母核3位的質(zhì)子。氫譜信號歸屬為：

δ

12.46（1H，s，5-OH），7.98（2H，d，

J

＝8.3 Hz，H-2'，6'），6.90（2H，d，

J

＝8.3 Hz，H-3'，5'），6.68（1H，s，H-3），6.44（1H，d，

J

＝2.0 Hz，H-8），6.15（1H，d，

J

＝2.0 Hz，H-6）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻基本一致，鑒定化合物2為芹菜素（apigenin）?；衔?：黃色粉末（甲醇），10% 硫酸乙醇溶液顯黃色；三氯化鐵/鐵氰化鉀溶液顯藍色，提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基，推測可能為黃酮類化合物。H NMR（400 MHz，DMSO-

d

）譜表明含有5位締合酚羥基質(zhì)子信號

δ

13.01（1H，s，5-OH）；一組B環(huán)AA'BB'偶合系統(tǒng)較低場質(zhì)子信號

δ

8.02（2H，d，

J

＝8.6 Hz，H-2'，6'），7.10（2H，d，

J

＝8.6 Hz，H-3'，5'），同時還顯示兩個芳香質(zhì)子信號

δ

6.84（1H，s），6.58（1H，s），提示化合物為A環(huán)和3位有獨立氫取代的黃酮類化合物；另外還給出了兩個甲氧基信號

δ

3.85（3H，s，4'-OCH），3.75（3H，s，6-OCH），提示有4'-甲氧基存在。氫譜信號歸屬為：

δ

13.01（1H，s，5-OH），8.02（2H，d，

J

＝8.6 Hz，H-2'，6'），7.10（2H，d，

J

＝8.6 Hz，H-3'，5'），6.84（1H，s，H-3），6.58（1H，s，H-8），3.85（3H，s，4'-OCH），3.75（3H，s，6-OCH）。C NMR（100 MHz，DMSO-

d

）共顯示17個碳信號并歸屬為：

δ

182.1（C-4），163.3（C-2），162.3（C-4'），158.0（C-8a），152.7（C-5），152.5（C-7），131.5（C-6），128.3（C-2'，6'），122.9（C-1'），114.6（C-3'，5'），103.9（C-4a），103.0（C-3），94.4（C-8），59.9（6-OCH），55.6（4'-OCH）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻基本一致，鑒定化合物3為5，7-二羥基-6，4'-二甲氧基黃酮（5，7-dihydroxy-6，4'-dimethoxyflavone）?；衔?：黃色粉末（甲醇），10%硫酸乙醇溶液顯黃色；三氯化鐵/鐵氰化鉀溶液顯藍色，提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基，推測可能為黃酮類化合物。H NMR（400 MHz，DMSO-

d

）譜中

δ

12.48（1H，s，H-5）為5位締合酚羥基質(zhì)子信號；給出B環(huán)上ABX偶合系統(tǒng)氫質(zhì)子信號

δ

7.65（1H，d，

J

＝2.1 Hz，H-2'），7.53（1H，dd，

J

＝8.6，2.1 Hz，H-6'），6.84（1H，d，

J

＝8.6 Hz，H-5'），提示該黃酮母核B環(huán)上有3'，4'-二取代；A環(huán)上給出間位偶合質(zhì)子信號

δ

6.42（1H，d，

J

＝2.2 Hz，H-8），6.19（1H，d，

J

＝2.2 Hz，H-6）。氫 譜 信號歸屬為：

δ

12.48（1H，s，5-OH），7.65（1H，d，

J

＝2.1 Hz，H-2'），7.53（1H，dd，

J

＝8.6，2.1 Hz，H-6'），6.84（1H，d，

J

＝8.6 Hz，H-5'），6.42（1H，d，

J

＝2.2 Hz，H-8），6.19（1H，d，

J

＝2.2 Hz，H-6）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻基本一致，鑒定化合物4為槲皮素（quercetin）?；衔?：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），10%硫酸乙醇溶液顯黃色；三氯化鐵/鐵氰化鉀溶液顯藍色，提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基，推測可能為黃酮類化合物。H NMR（400 MHz，DMSO-

d

）譜中給出5位締合的酚羥基質(zhì)子信號

δ

12.62（1H，s，5-OH）；給出B環(huán)上ABX偶合系統(tǒng)氫質(zhì)子信號

δ

7.46（1H，d，

J

＝2.4 Hz，H-2'），7.44（1H，dd，

J

＝8.6，2.4 Hz，H-6'），6.92（1H，d，

J

＝8.6 Hz，H-5'）；A環(huán)上給出間位偶合質(zhì)子信號

δ

6.44（1H，d，

J

＝2.1 Hz，H-8），6.19（1H，d，

J

＝2.1 Hz，H-6）；氫譜中還有一個

δ

6.63（1H，s，H-3）的芳氫質(zhì)子信號。氫譜信號歸屬為：

δ

12.62（1H，s，5-OH），7.46（1H，d，

J

＝2.4 Hz，H-2'），7.44（1H，dd，

J

＝8.6，2.4 Hz，H-6'），6.92（1H，d，

J

＝8.6 Hz，H-5'），6.63（1H，s，H-3），6.44（1H，d，

J

＝2.1 Hz，H-8），6.19（1H，d，

J

＝2.1 Hz，H-6），以上數(shù)據(jù)與文獻基本一致，故鑒定化合物5為木犀草素（luteolin）?；衔?：黃色無定形粉末（甲醇），10%硫酸乙醇溶液顯黃色；三氯化鐵/鐵氰化鉀溶液顯藍色，提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基。H NMR（400 MHz，DMSO-

d

）譜中

δ

12.51，12.32為兩個與羰基締合的羥基質(zhì)子信號，9.32（2H，brs）為兩個活潑質(zhì)子信號。

δ

7.63（1H，d，

J

＝1.8 Hz，H-2'''），7.56（1H，brd，

J

＝8.6 Hz，H-6'''），6.90（1H，d，

J

＝8.6 Hz，H-5'''）為一組典型的苯環(huán)上ABX偶合系統(tǒng)；

δ

6.14（1H，s，H-6''）為一個孤立的芳氫信號。

δ

7.12（2H，d，

J

＝8.4 Hz，H-2'，6'）和6.37（2H，d，

J

＝8.4 Hz，H-3'，5'）為苯環(huán)上一組AA'BB'偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號，提示B環(huán)上有4'-羥基存在，

δ

5.93（2H，brs，H-8，6）為A環(huán)上一組間位偶合的質(zhì)子信號，表明A環(huán)為5，7-二羥基取代，

δ

5.75（1H，d，

J

＝12.0 Hz，H-2）和4.81（1H，d，

J

＝12.0 Hz，H-3）為二氫黃酮母核C環(huán)2，3位上的處于反式直立鍵上的兩個質(zhì)子信號。氫譜信號歸屬為：

δ

12.51（5''-OH），12.32（5-OH），9.32（2H，brs，7/4'/4'''/5'''-OH），7.63（1H，d，

J

＝1.8 Hz，H-2'''），7.56（1H，brd，

J

＝8.6 Hz，H-6'''），7.12（2H，d，

J

＝8.4 Hz，H-2'，6'），6.90（1H，d，

J

＝8.6 Hz，H-5'''），6.37（2H，d，

J

＝8.4 Hz，H-3'，5'），6.14（1H，s，H-6''），5.93（2H，brs，H-8，6），5.75（1H，d，

J

＝12.0 Hz，H-2），4.81（1H，d，

J

＝12.0 Hz，H-3）。C NMR（100 MHz，DMSO-

d

）譜中共給出30個碳信號，歸屬為：

δ

196.4（C-4）、175.7（C-4''）、166.7（C-7）、163.8（C-5）、163.6（C-7''）、162.9（C-8a）、159.7（C-5''）、157.3（C-4'）、154.1（C-8''a）、147.7（C-4'''）、145.1（C-3'''）、145.1（C-2''）、135.3（C-3''）、128.8（C-1'）、128.5（C-2'，6'）、121.8（C-1'''）、120.4（C-6'''）、115.7（C-5'''）、114.7（C-2'''）、114.4（C-3'，5'）、102.3（C-4''a）、101.6（C-4a）、100.2（C-8''）、98.1（C-6''）、96.2（C-6）、95.3（C-8）、80.9（C-2）、48.1（C-3）。綜合分析該化合物的波譜數(shù)據(jù)，并結(jié)合ESIMS給出的分子離子峰[M＋H]

m/z

573.10，推測其可能為一個黃酮母核的C-8''位與另一個二氫黃酮母核的C-3位通過碳碳鍵連接而形成的雙黃酮類化合物。ECD譜中顯示212 nm處負Cotton效應(yīng)（－27）、284 nm處正Cotton效應(yīng)（＋22）和356 nm處正Cotton效應(yīng)（＋6）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)及其ECD數(shù)據(jù)同文獻基本一致，鑒定為pancibiflavonol。由于C-3位上連接基團的空間位阻較大，旋轉(zhuǎn)受阻而出現(xiàn)構(gòu)象異構(gòu)，在氫譜中表現(xiàn)為具有一定比例的兩種異構(gòu)體的混合，升溫核磁后（80℃）的圖譜則表現(xiàn)為單一形式的一組核磁信號。化合物7：黃色無定形粉末（甲醇），10%硫酸乙醇溶液顯黃色；三氯化鐵/鐵氰化鉀溶液顯藍色，提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基。H NMR（400 MHz，DMSO-

d

）譜中

δ

13.06，12.31為兩個與羰基締合的羥基質(zhì)子信號，9.38（2H，brs）為兩個活潑質(zhì)子信號。

δ

7.41（2H，m，H-2'''/6'''），6.90（1H，d，

J

＝8.8 Hz，H-5'''）為一組典型的苯環(huán)上ABX偶合系統(tǒng)；

δ

6.55（1H，s，H-3''），6.19（1H，s，H-6''）為兩個孤立的芳氫信號。

δ

7.16（2H，d，

J

＝8.3 Hz，H-2'，6'）和6.39（2H，d，

J

＝8.3 Hz，H-3'，5'）為苯環(huán)上一組AA'BB'偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號，提示B環(huán)上有4'-羥基存在，

δ

5.96（2H，brs，H-8，6）為A環(huán)上一組間位偶合的質(zhì)子信號，表明A環(huán)為5，7-二羥基取代，

δ

5.75（1H，d，

J

＝12.0 Hz，H-2）和4.86（1H，d，

J

＝12.0 Hz，H-3）為二氫黃酮母核C環(huán)2，3位上處于反式直立鍵上的兩個質(zhì)子信號。氫譜數(shù)據(jù)與化合物6相比，僅黃酮母核上多了一個

δ

6.55的氫質(zhì)子信號。氫譜信號歸屬為：

δ

13.06（5''-OH），12.31（5-OH），9.38（2H，brs，7/4'/4'''/5'''-OH），7.41（2H，m，H-2'''/6'''），7.16（2H，d，

J

＝8.3 Hz，H-2'，6'），6.90（1H，d，

J

＝8.8 Hz，H-5'''），6.55（1H，s，H-3''），6.39（2H，d，

J

＝8.3 Hz，H-3'，5'），6.19（1H，s，H-6''），5.96（2H，brs，H-8，6），5.75（1H，d，

J

＝12.0 Hz，H-2），4.86（1H，d，

J

＝12.0 Hz，H-3）。C NMR（100 MHz，DMSO-

d

）譜中共給出30個碳信號，歸屬為：

δ

196.4（C-4）、181.5（C-4''）、166.8（C-8a）、163.9（C-2''）、163.3（C-7）、162.9（C-7''）、160.6（C-5''）、157.4（C-4'）、155.4（C-8''a）、149.7（C-4'''）、145.7（C-3'''）、128.6（C-2'，6'）、128.3（C-1'）、121.2（C-1'''）、119.3（C-6'''）、116.2（C-5'''）、114.5（C-3'，5'）、113.3（C-2'''）、102.8（C-4''a）、102.2（C-3''）、101.5（C-4a）、100.7（C-8''）、98.8（C-6''）、96.3（C-8）、95.4（C-6）、81.0（C-2）、48.4（C-3），其中C-5的化學(xué)位移值被覆蓋。綜合分析該化合物的波譜數(shù)據(jù)，并結(jié)合ESIMS給出的分子離子峰[M＋H]

m/z

557.10，推測其可能為一個黃酮母核C-8''位與另一個二氫黃酮母核的C-3位通過碳碳鍵連接而形成的雙黃酮類化合物。ECD譜中顯示221 nm處負Cotton效應(yīng)（－43）、284 nm處正Cotton效應(yīng)（＋38）和348 nm處正Cotton效應(yīng)（＋12）。該化合物的波譜數(shù)據(jù)及ECD數(shù)據(jù)與文獻基本一致，鑒定為藤黃雙黃酮（morelloflavone）。與化合物6相似，該化合物氫譜中也由于旋轉(zhuǎn)受阻而出現(xiàn)兩組信號，可以通過升溫核磁使其變?yōu)閱我恍问降囊唤M核磁信號?；衔?：淺棕色油狀，10% 硫酸乙醇溶液顯棕色。HRESIMS給出準分子離子峰[M＋Na]

m/z

453.2976，確定該化合物的分子式為CHO（計算值為453.2975）。紅外光譜在3427 cm處的吸收峰提示存在羥基信號，在1384，2973 cm處的吸收峰提示甲基的存在，在1640，933 cm處的吸收峰提示苯環(huán)的存在。H NMR（400 MHz，CDN）譜結(jié)合HMBC，HSQC，H-H COSY圖譜（見圖2），將氫信號歸屬為：

δ

6.97（1H，d，

J

＝2.4 Hz，H-7），6.84（1H，d，

J

＝2.4 Hz，H-5），5.36（1H，t，

J

＝6.4 Hz，H-7'），5.24（1H，t，

J

＝6.4 Hz，H-3'），3.74（1H，m，H-11'），2.68（2H，m，H-4），2.62（1H，m，H-9'），2.34（1H，m，H-9'），2.30（3H，s，H-18'），2.21（2H，m，H-2'），2.17（2H，m，H-6'），2.07（2H，m，H-5'），2.05（1H，m，H-10'），1.81（1H，m，H-10'），1.75（1H，m，H-3a），1.74（1H，m，H-1'），1.68（3H，s，H-15'），1.67（1H，m，H-3b），1.64（3H，s，H-16'），1.63（1H，m，H-1'），1.51（3H，s，H-13'），1.48（3H，s，H-14'）1.27（3H，s，H-17'）。C NMR（100 MHz，DMSO-

d

）譜 中共給出27個碳信號，歸屬為：

δ

151.2（C-6）、145.2（C-8a）、135.7（C-8'）、135.0（C-4'）、126.9（C-8）、124.8（C-3'）、124.4（C-7'）、121.5（C-4a）、116.8（C-7）、113.7（C-5）、78.2（C-11'）、75.2（C-2）、72.5（C-12'）、40.0（C-5'）、39.8（C-1'）、37.5（C-9'）、31.6（C-3）、30.7（C-10'）、26.8（C-6'）、25.9（C-13'）、25.8（C-14'）、24.0（C-17'）、22.7（C-4）、22.4（C-2'）、16.4（C-18'）、16.2（C-15'）、15.8（C-16'）。此核磁數(shù)據(jù)與文獻中化合物litchtocotrienol A的數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物的平面結(jié)構(gòu)。根據(jù)ECD譜中215 nm處正Cotton效應(yīng)（＋15）和293 nm處負Cotton效應(yīng)（－4.6）確定C-2的絕對構(gòu)型為

R

型。采用鉬鹽誘導(dǎo)ECD的方法確定C-11'位的絕對構(gòu)型，此方法用來測定鄰二醇類結(jié)構(gòu)的絕對構(gòu)型。根據(jù)ECD譜中特征的302 nm處的負Cotton效應(yīng)確定C-11'位的絕對構(gòu)型為

R

。綜合分析，鑒定化合物8為litchtocotrienol A。

圖2 化合物8的主要HMBC和COSY相關(guān)信號Fig 2 Key HMBC（H→C），and COSY correlation of compound 8

4 討論

近年來藤黃屬植物一直是天然藥物領(lǐng)域研究的熱點，其化學(xué)成分種類豐富，結(jié)構(gòu)新穎，活性強，如黃酮、酮、間苯三酚、萜類等化合物。本文對長裂藤黃的化學(xué)成分進行了研究，從中分離得到8個化合物，豐富了藤黃屬次級代謝產(chǎn)物的多樣性，為探索藤黃屬的化學(xué)成分提供了參考。從近幾年分離得到的化合物的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性以及活性數(shù)據(jù)來看，藤黃屬植物還有很大的研究發(fā)展空間，有待于進一步深入研究。