夏 禹，張文珍，黃 真，仇鳳梅，鐘曉明

浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，杭州 310053

溫莪術(shù)為姜科姜黃屬植物溫郁金CurcumawenyujinY.H.Chen et C.Ling的干燥主根莖[1]，有抗氧化、抗炎抑菌[2]、抗風(fēng)濕、抗腫瘤[3]、改善免疫系統(tǒng)功能[4]、抗病毒[5]等多種藥理作用，是具有廣泛應(yīng)用價值的傳統(tǒng)中藥。溫莪術(shù)主要成分為揮發(fā)油、姜黃素類、多糖類、酚酸類和生物堿類化合物[6]，其中揮發(fā)油占1%～2.5%，是溫莪術(shù)主要藥效物質(zhì)之一，目前已被提取制劑應(yīng)用于臨床。但是，許多制藥工廠在提取溫莪術(shù)油多采用水蒸氣蒸餾法，而此法在提取揮發(fā)油時效率較低，導(dǎo)致提油后大量的溫莪術(shù)藥渣堆積，且因其暫無有效利用途徑、處理成本高等原因，每年只能將成百上千噸的藥渣當(dāng)做廢棄物丟棄，嚴(yán)重造成資源浪費和環(huán)境污染。而有學(xué)者[7,8]對溫莪術(shù)經(jīng)水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油所剩藥渣的化學(xué)成分進行分析，發(fā)現(xiàn)溫莪術(shù)藥渣中仍含有多種姜黃素類化合物、莪術(shù)二酮等活性成分。而姜黃素類化合物已被證實具有抗菌、抗氧化、美白等生物活性[9-11]，這說明溫莪術(shù)藥渣的二次開發(fā)利用仍有非常大的可行性。

溫郁金提取物目前已收錄于2021年版《已使用化妝品原料名稱目錄》，然而卻未見其在化妝品領(lǐng)域的相關(guān)研究文獻報道。美白作為化妝品最常見的功效宣稱之一，近年來也逐漸受到人們的追捧[12]，而皮膚顏色主要是由黑色素決定的。當(dāng)細(xì)胞受到內(nèi)源性(如α-MSH)刺激物作用時，會通過多種信號通路誘導(dǎo)小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)的表達(dá)，從而激活酪氨酸酶，促進黑色素的生成。另外，活性氧(ROS)也在黑色素生成過程中起到十分重要的作用，ROS是酪氨酸酶催化氧化過程中的引發(fā)劑和反應(yīng)物，通過相關(guān)蛋白的作用誘導(dǎo)黑色素合成基因的表達(dá)，導(dǎo)致黑色素含量的升高[13]。故抑制酪氨酸酶活性、抗氧化是目前公認(rèn)美白的兩個關(guān)鍵靶點。

因此，本研究旨在挖掘溫莪術(shù)藥渣在化妝品領(lǐng)域上的潛在價值，以其美白活性成分總姜黃素得率為指標(biāo)，利用響應(yīng)面法優(yōu)化溫莪術(shù)藥渣的最佳提取工藝，同時考察最佳提取工藝條件下溫莪術(shù)藥渣提取物對DPPH、ABTS自由基清除作用和大鼠黑色素瘤B16細(xì)胞黑色素合成及酪氨酸酶活性的影響。為擴大溫莪術(shù)植物資源的利用及其在化妝品領(lǐng)域應(yīng)用的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)，并促進各行業(yè)二次開發(fā)利用中藥渣資源，從而推動地方經(jīng)濟及產(chǎn)業(yè)的進一步發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實驗用溫莪術(shù)藥渣于浙江省瑞安市通明溫郁金專業(yè)合作社購買。姜黃素對照品(批號：S19245-5 g，杭州高晟生物科技有限公司)；DPPH(批號：GC19475-100 mg，南京翼飛雪生物科技有限公司)；ABTS(批號：S30629-250 mg，北京酷爾化學(xué)科技有限公司)；熊果苷標(biāo)準(zhǔn)品(批號：PS0213-25 mg，成都普思生物科技股份有限公司)；甲醇(批號：M116121-500 mL，杭州邦易化工有限公司)；二甲基亞砜(批號：D103271-5 mL，杭州邦易化工有限公司)；MTT(批號：KGT5251-1 g，杭州昊天生物技術(shù)有限公司)；DMEM培養(yǎng)基(批號：C11960500BT-500 mL，廈門輝耀興業(yè)科技有限公司)；胎牛血清(批號：S9030-500 mL，北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司)；TritonX-100(批號MB2486-1 g，大連美侖生物技術(shù)有限公司)；L-DOPA(批號：HY-N0304-1 g，杭州昕誠生物科技有限公司)；小鼠黑色素瘤細(xì)胞(批號：SCC-211111，北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司)；胰酶(批號：P816199-50g，上海麥克林生化科技有限公司)；PBS(BL302A-500 mL，廣州賽國生物科技有限公司)；水為超純水；其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

電子天平(型號：AL104，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(型號：RE-52AA，上海亞榮生化儀器廠)；數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(型號：DHG-9240A，上海帥登儀器有限公司)；恒溫水浴鍋(型號：HH-8，上海宜昌儀器紗篩廠)；紫外可見分光光度計(型號：UV-1800，杭州宗燦科技有限公司)；酶標(biāo)儀(型號BLX-800，美國伯騰儀器有限公司)；二氧化碳培養(yǎng)箱(型號：Thermo 3111，美國賽默飛世爾科技公司)。

1.3 溫莪術(shù)藥渣總姜黃素類化合物含量測定[14-16]

1.3.1 對照品溶液制備

精密稱取姜黃素對照品1.0 mg，加入甲醇定容至10 mL，即得濃度為0.1 mg/mL的對照品溶液。

1.3.2 檢測波長的選擇[24]

將姜黃素對照品用甲醇稀釋10倍后置于比色皿中，以甲醇溶液作為空白對照，在200～800 nm紫外波長下掃描對照品溶液發(fā)現(xiàn)其在423 nm處有一最大吸收峰(如圖1)，故選用該波長測定溫莪術(shù)藥渣總姜黃素吸光度。

圖1 姜黃素對照品紫外掃描圖譜Fig.1 UV scanning spectrum of curcumin reference substance

1.3.3 方法學(xué)考察

精密吸取姜黃素對照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mL。分別加入到10 mL的容量瓶中，再用甲醇定容，震蕩搖勻。測定方法:以甲醇為空白對照，采用紫外可見分光光度計測量各溶液423 nm處的吸光度。以吸光度(A)對姜黃素質(zhì)量(X)進行回歸，得到回歸方程A=164.43X+0.169(r=0.999 4)，在0.010 6～0.106 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗RSD分別為0.84、1.83、1.76%；加樣回收率為97.76%，RSD為1.68%(n=9)。

1.3.4 樣品總姜黃素含量測定

將溫莪術(shù)藥渣經(jīng)烘干研磨后過50目篩，得到溫莪術(shù)藥渣粉末，精密稱取1.0 g，加入20 mL的60%乙醇溶液，超聲提取30 min，抽濾兩次后減壓回收溶劑，揮干得到的提取物干品，用甲醇復(fù)溶，并定容至100 mL的容量瓶備用，按照“2.1.3”項下測定并計算溶液中總姜黃素濃度，按式(1)計算其得率。

(1)

其中，總姜黃素得率單位為mg/mL，C為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算溶液中總姜黃素的質(zhì)量濃度(mg/mL)；d為稀釋倍數(shù)；V為定容體積(mL)；M為稱取樣品的質(zhì)量(g)。

1.4 溫莪術(shù)藥渣提取工藝優(yōu)化

1.4.1 單因素試驗

實驗基礎(chǔ)條件設(shè)置為：超聲提取溫度控制在20±1 ℃，液料比20 mL/g，60%乙醇濃度，超聲提取30 min。因素考察設(shè)計如下：液料比(10～30 mL/g)；乙醇濃度(50%～90%)；超聲持續(xù)時間(20～60 min)。每組各五個梯度，重復(fù)三次實驗，考察三個因素對溫莪術(shù)藥渣總姜黃素提取得率的影響。

1.4.2 響應(yīng)面法優(yōu)化實驗

參考文獻方法[17,18]并修改，響應(yīng)面實驗通過Design-Expert 8.0.6軟件進行模型的建立與分析，根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選擇合適的三因素三水平，并以總姜黃素得率作為評價指標(biāo)，共得到17個試驗，每項試驗重復(fù)三次。最后，按照模型擬合得出的總姜黃素得率最高的工藝條件進行驗證，對比測得的實際得率與理論值的差異，驗證實驗的準(zhǔn)確性。

1.5 DPPH、ABTS自由基清除率測定

參考文獻方法[19]將溫莪術(shù)藥渣提取物和陽性對照VC溶于乙醇溶液，均配成濃度為1、2、4、8、16、32、64 μg/mL的待測溶液備用。避光環(huán)境下稱取DPPH、ABTS粉末，參照文獻方法[18]配成0.06 mmol/L的DPPH乙醇溶液和ABTS貯備液，將不同濃度的待測溶液依次加入到DPPH乙醇溶液和ABTS貯備液中，避光反應(yīng)20 min，分別于517 nm和734 nm測定吸光度，重復(fù)三次，并按照式(2)計算清除率。

(2)

其中，A0是用空白試劑和DPPH乙醇溶液或ABTS貯備液混合后得到的溶液的吸光度，AS是用供試品溶液和DPPH乙醇溶液或ABTS貯備液混合后得到的溶液的吸光度。

1.6 B16細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)參考文獻方法[20,21]并改進，將B16細(xì)胞接種于含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，于37 ℃，5%CO2恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每24 h于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞貼壁生長至近融合狀態(tài)時(鋪滿瓶底80%～90%)，棄去瓶內(nèi)培養(yǎng)液，用PBS沖洗2次，加入1 mL預(yù)溫至37 ℃的0.25%胰酶，于培養(yǎng)箱內(nèi)進行消化反應(yīng)2 min，加培養(yǎng)液中止反應(yīng)，離心處理分離后，將細(xì)胞傳代至25 cm2培養(yǎng)瓶中，加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，重復(fù)以上操作可培養(yǎng)至第10代。

1.7 實驗分組

取對數(shù)生長期的B16細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105個/mL，接種于96孔板，每孔100 μL(空白組不接種B16細(xì)胞)，于培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，小心吸去各孔上清液，按如下實驗分組進行給藥：正常對照組(normal control，NC)與空白組均加入不含藥DMEM培養(yǎng)基；陽性對照組(positive control，PC)加入含濃度為100 μg/mL熊果苷的DMEM培養(yǎng)基；實驗組分別加入含濃度為50、100、200、400、800、1 600 μg/mL溫莪術(shù)藥渣提取物的DMEM培養(yǎng)基，每組設(shè)置6個復(fù)孔，培養(yǎng)48 h。

1.8 MTT法測定溫莪術(shù)藥渣提取物對B16細(xì)胞存活率的影響

按“1.7”法分組給藥培養(yǎng)B16細(xì)胞48 h后，各孔重新加入新的DMEM培養(yǎng)基100 μL，隨后依次加入20 μL預(yù)先配置好濃度為5 mg/mL的MTT溶液，培養(yǎng)4 h。隨后將96孔板內(nèi)上清液棄去，各孔重新加入150 μL DMSO溶液，震蕩10 min，立即置酶標(biāo)儀下測定其在490 nm波長下的OD值，重復(fù)三次。按式(3)計算細(xì)胞存活率

(3)

1.9 黑色素含量測定

取對數(shù)生長期的B16細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后，調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105個/mL，接種于24孔板中培養(yǎng)24 h后，按照“1.7”下實驗分組依次處理，每組設(shè)置3個平行實驗，培養(yǎng)48 h后，收集各孔濃度約2×105個/mL的B16細(xì)胞，加入1 mol/L NaOH溶液400 μL，100℃孵育30 min，裂解細(xì)胞并讓細(xì)胞內(nèi)黑色素溶出，離心，取100 μL上清液至96孔板中，于酶標(biāo)儀450 nm波長下測定OD值。按照式(4)求得黑色素含量。

(4)

其中，n為實驗組細(xì)胞數(shù)量。

1.10多巴氧化法測定B16細(xì)胞酪氨酸酶活性

B16細(xì)胞酪氨酸酶活性參考文獻方法[22]采用多巴氧化法測定，首先提前配制好1% TritonX-100溶液和0.1% L-DOPA溶液備用，按“1.7”法下分組給藥培養(yǎng)B16細(xì)胞48 h后，將96孔板上清液棄去，每孔依次加入100 μL TritonX-100溶液，在-80 ℃溫度下凍存1 h，而后室溫下使其融化裂解，每孔依次加0.1% L-DOPA 100 μL，于37 ℃培養(yǎng)箱2 h，置酶標(biāo)儀下測定其在490 nm處OD值。重復(fù)三次，按式(5)計算細(xì)胞酪氨酸酶活性。

(5)

1.11數(shù)據(jù)統(tǒng)計

實驗結(jié)果運用Design Expert 8.0.6軟件進行響應(yīng)面設(shè)計及分析，GraphPad Prism 6.0.2軟件進行相關(guān)圖表的繪制，SPSS 20.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

2.1 單因素試驗

2.1.1 乙醇濃度對提取得率的影響

實驗結(jié)果如圖2A所示。從圖中可以看出，總姜黃素提取得率在乙醇濃度為50～80%時逐漸上升，80%時達(dá)到最高，而后有所降低，因此選用乙醇濃度70、80、90%進行后續(xù)響應(yīng)面實驗。

2.1.2 超聲時間對提取得率的影響

實驗結(jié)果如圖2B所示。從圖中可以看出，超聲時間在20～50 min時，總姜黃素得率逐漸提升，隨后有所降低，因此選取超聲時間40、50、60 min進行后續(xù)響應(yīng)面實驗。

2.1.3 液料比對提取得率的影響

實驗結(jié)果如圖2C所示。從圖中可以看出，當(dāng)液料比為20 mL/g時，總姜黃素得率最高，而后總姜黃素得率逐漸降低，因此選擇15、20、25 mL/g這三個水平進行后續(xù)的響應(yīng)面實驗。

2.2 響應(yīng)面實驗結(jié)果與分析

以總姜黃素得率作為響應(yīng)值(Y)，得到的響應(yīng)面實驗設(shè)計方案如表1和表2所示。

實驗結(jié)果利用Design Expert 8.0.6軟件對表2實驗數(shù)據(jù)進行回歸分析，軟件擬合得到的響應(yīng)面三維圖如圖3所示，獲得響應(yīng)面方差分析及顯著性結(jié)果如表3所示。

由表3方差分析得出，響應(yīng)面實驗?zāi)Ｐ蚉< 0.01，說明實驗?zāi)Ｐ途哂薪y(tǒng)計學(xué)意義并且該模型的擬合度良好(失擬項P> 0.05)。因素A、B、C、AB、BC、A2、B2、C2對總姜黃素得率均具有極顯著影響(P< 0.001)。以總姜黃素得率為響應(yīng)值(Y)，得到總姜黃素得率對各影響因素的二項多項式回歸模型為：Y=6.35+0.090×A+0.091×B+0.22×C+0.090×AB-0.015×AC+0.11×BC-0.34×A2-0.20×B2-0.39×C2。各因素對溫莪術(shù)藥渣總姜黃素的得率影響程度依次為液料比(C)>乙醇體積分?jǐn)?shù)(A)>超聲時間(B)。

表1 響應(yīng)面試驗因素水平設(shè)計Table 1 Factors and levels of response surface analysis

表2 試驗設(shè)計與結(jié)果Table 2 Design and results of tests

表3 響應(yīng)面方差分析Table 3 The response surface analysis of variance(ANOVA)

圖3 各因素響應(yīng)面圖Fig.3 Response surface plots for various factors

根據(jù)回歸模型求解方程得出最優(yōu)提取工藝為液料比21.65 mL/g，乙醇濃度81.78%，超聲時間53.74 min，模型預(yù)測在該實驗條件下總姜黃素得率為6.41 mg/g，為了便于實驗實際操作，驗證實驗以液料比22 mL/g，乙醇體積分?jǐn)?shù)82%，超聲時間55 min為條件，并重復(fù)3次實驗再次進行提取，最終測得總姜黃素得率為6.38±0.02 mg/g，與預(yù)測值6.41 mg/g接近，與未優(yōu)化所得5.46 mg/g比較提升14.42%，表明工藝合理穩(wěn)定，可為后續(xù)重復(fù)實驗提供參考依據(jù)。

2.3 體外抗氧化活性實驗

DPPH自由基清除實驗結(jié)果可見圖4A。溫莪術(shù)藥渣提取物對DPPH自由基的清除率隨著濃度的增加而提高，在濃度為32 μg/mL時，清除率達(dá)到88.23%，隨后趨于平緩，IC50為24.99 μg/mL。ABTS自由基清除實驗結(jié)果可見圖4B。由此可知，溫莪術(shù)藥渣提取物對ABTS自由基的清除率也是隨著濃度的增加而升高，存在一定量效關(guān)系。溫莪術(shù)藥渣提取物對ABTS自由基的清除率在64 μg/mL處接近100%，IC50值為49.72 μg/mL。以上均說明溫莪術(shù)藥渣提取物具有良好的體外抗氧化作用。

圖4 不同濃度提取物對DPPH、ABTS自由基清除率Fig.4 Clearance rates of extracts with different concentrations on DPPH and ABTS free radicals

2.4 小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞實驗結(jié)果

2.4.1 不同濃度溫莪術(shù)藥渣提取物對B16細(xì)胞存活率的影響

MTT結(jié)果顯示如圖5，當(dāng)溫莪術(shù)藥渣提取物濃度在50～800 μg/mL時，對細(xì)胞存活率的影響與正常對照組沒有顯著性差異，當(dāng)濃度達(dá)到1 600 μg/mL時，細(xì)胞存活率顯著下降至80%以下，并且與正常組差異顯著(P< 0.001)。為控制B16細(xì)胞凋亡對實驗的影響，因此溫莪術(shù)提取物對B16細(xì)胞的安全給藥濃度范圍為50～800 μg/mL，選用該濃度范圍進行后續(xù)實驗。

圖5 不同濃度提取物對B16細(xì)胞存活率的影響Fig.5 Effects of different concentrations of extracts on survival rate of B16 cells注：與正常對照組比較，***P < 0.001。Note:Compared with normal control,***P < 0.001.

2.4.2 不同濃度溫莪術(shù)藥渣提取物對B16細(xì)胞黑色素合成的影響

由圖6可得，不同濃度的溫莪術(shù)藥渣提取物對黑色素瘤B16細(xì)胞黑色素合成均具有一定的抑制作用，并且呈一定的濃度依賴性，各實驗組與正常對照組相比，均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P< 0.05)，細(xì)胞給藥處理48 h后，400、800 μg/mL溫莪術(shù)藥渣提取物實驗組與正常對照組相比具有極顯著差異(P< 0.001)，兩組的黑色素含量僅為正常對照組的64.94%和41.78%，其中800 μg/mL實驗組抑制黑色素生成作用優(yōu)于陽性對照組熊果苷，且具有統(tǒng)計學(xué)差異(P< 0.05)。

圖6 不同濃度提取物對B16細(xì)胞黑色素合成的影響Fig.6 Effects of different concentrations of extracts on melanin synthesis in B16 cells注：與正常組比較，*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。與陽性對照組比較，#P < 0.05。Note:Compared with normal control,*P < 0.05,**P < 0.01,***P < 0.001.Compared with positive control,#P < 0.05.

2.4.3 不同濃度溫莪術(shù)藥渣提取物對B16細(xì)胞酪氨酸酶活性的影響

由圖7可知，與正常組相比，陽性對照組及實驗組的酪氨酸酶活性均顯著降低(P< 0.05)，其中400 μg/mL的溫莪術(shù)藥渣提取物實驗組與陽性對照組的酪氨酸酶活性分別為60.98%和61.12%，根據(jù)數(shù)據(jù)分析得出兩組沒有顯著性差異(P> 0.05)，說明溫莪術(shù)藥渣提取物抑制酪氨酸酶活性的作用約為熊果苷的四分之一。并且溫莪術(shù)藥渣提取物抑制酪氨酸酶活性的作用隨著濃度升高而逐漸增強，與黑色素含量試驗結(jié)果一樣存在量效關(guān)系(如圖8)，在濃度為800 μg/mL時溫莪術(shù)藥渣提取物對B16細(xì)胞酪氨酸酶活性抑制率達(dá)到最大值51.87%，與陽性對照組相比，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P< 0.05)。因此，推測溫莪術(shù)藥渣提取物可能是通過抑制B16細(xì)胞中酪氨酸酶活性或其相關(guān)激活通路，進而發(fā)揮限制黑色素B16細(xì)胞中黑色素合成的作用。

圖7 不同濃度提取物對B16細(xì)胞酪氨酸酶活性的影響Fig.7 Effects of different concentrations of samples on tyrosinase activity in B16 cells注：與正常組比較，*P < 0.05,**P < 0.01,***P < 0.001。與陽性對照組比較，#P < 0.05。Note:Compared with normal control,*P < 0.05,**P < 0.01,***P < 0.001.Compared with positive control,#P < 0.05.

圖8 提取物對B16細(xì)胞酪氨酸酶的抑制率Fig.8 Inhibition rate of the extract on B16 cell tyrosinase

3 討論與結(jié)論

采用響應(yīng)面法優(yōu)化后溫莪術(shù)藥渣提取物的最佳提取工藝為液料比22 mL/g，82%乙醇超聲提取，超聲時間55 min，得到總姜黃素平均得率為6.38 mg/g。該工藝條件簡單，操作方便且穩(wěn)定，可為溫莪術(shù)提取揮發(fā)油后剩余藥渣中姜黃素類化合物的二次利用提供參考。

此外，以最佳工藝提取制備的溫莪術(shù)藥渣提取物具有良好的清除DPPH、ABTS自由基作用，其IC50值分別為24.99、49.72 μg/mL。細(xì)胞實驗的結(jié)果顯示，50～800 μg/mL各濃度溫莪術(shù)藥渣提取物實驗組均能夠有效減少黑色素瘤B16細(xì)胞黑色素的含量以及抑制酪氨酸酶活性。

姜黃素類化合物在酸性及中性環(huán)境中性質(zhì)比較穩(wěn)定，并且易溶于有機溶劑但是不易溶于水[23]。傳統(tǒng)回流提取姜黃素類化合物的方法耗時、提取率低并且不利于保證姜黃素類化合物的生物活性[24]，同時姜黃素類化合物含量的檢測方法也較為復(fù)雜，故本實驗通過改良文獻方法[25]采用紫外分光光度法測定總姜黃素類化合物的方法，研究不同液料比、乙醇濃度、超聲時間對其得率的影響，并通過響應(yīng)面模型優(yōu)化提取工藝。優(yōu)化后使溫莪術(shù)藥渣中總姜黃素的提取率提高了14.42%。該方法穩(wěn)定可行，重復(fù)性好，也為溫莪術(shù)殘渣中姜黃素類化合物的提取工藝優(yōu)化、測定及二次利用提供了理論依據(jù)。

DPPH法及ABTS法為兩大常用的體外抗氧化評價試驗，廣泛用于評價植物提取物的抗氧化性能[19]。本實驗發(fā)現(xiàn)溫莪術(shù)藥渣提取物在抗氧化方面顯示出良好的作用，并通過細(xì)胞實驗進一步驗證發(fā)現(xiàn)其對黑色素生成及其關(guān)鍵限速酶酪氨酸酶活性的抑制作用良好。后續(xù)可以更加深入地研究溫莪術(shù)藥渣提取物在細(xì)胞、分子水平上的美白機制或進行分離純化得到更安全有效的抗氧化劑或酪氨酸酶抑制劑，為溫莪術(shù)藥渣的開發(fā)提供科學(xué)理論依據(jù)。

隨著中藥行業(yè)的迅猛發(fā)展，在生產(chǎn)中也導(dǎo)致中藥渣的大量產(chǎn)生，秉著我國綠色可持續(xù)發(fā)展和資源再利用理念，中藥渣也逐漸成為近年來研究的熱點，目前中藥渣已被廣泛用作飼料、添加劑、燃料、吸附劑及肥料等[26,27]，具有很大的開發(fā)潛力。因此，本實驗也為加快各行業(yè)對中藥渣資源的二次開發(fā)利用、實現(xiàn)中藥渣可持續(xù)利用奠定基礎(chǔ)。