陳 路，蒙桂賓，歐 敏，劉 鈺，秦明珍，謝唐貴，藍鳴生，吳無畏

（廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 西南瀕危藥材資源開發(fā)國家工程實驗室，南寧 530023）

土甘草為豆科魚藤屬植物毛果魚藤Derris eriocarpaHow.的干燥藤莖，又名毛果魚藤、斑花藤、扣來、雞血藤（《廣西藥植名錄》）、藤子甘草、美麗相思子《云南思茅中草藥選》，壯語又稱“藤糖”，是廣西壯族地區(qū)具有民族特色的常用藥材之一，生于山地，疏、密林，海拔1 200～1 400 m，主要分布于我國的廣西、貴州、云南等地[1-3]。土甘草性平，味甘、苦，具有利尿通淋、化痰止咳等功效。藥理實驗研究發(fā)現(xiàn)土甘草具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤及降糖等作用，常用于治療咳血、咳嗽、咽喉腫痛、腎炎、膀胱炎、尿道炎、腳氣、水腫等疾病。土甘草是壯族民間驗方的重要組成成分，其中，壯藥制劑“桂龍藥膏”就是以土甘草為主要原料的重要全國性銷售的中成藥品種，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》第八冊。經(jīng)文獻檢索研究發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)外對土甘草的研究報道主要集中在化學(xué)成分及藥理活性方面，且尚未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)總結(jié)報道。因此，本文就土甘草化學(xué)成分及其藥理活性進行綜述，為其進一步研究和開發(fā)利用提供理論參考。

1 化學(xué)成分

化學(xué)成分預(yù)試驗研究表明，土甘草中還可能含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖、多糖、苷類、蒽醌、強心苷、酚類等化學(xué)成分[4]。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對土甘草化學(xué)成分進行深入研究，共分離得到63 個化合物，其中包括黃酮、三萜、香豆素等多種類化合物。

1.1 黃酮類化合物（1-20）黃酮類化合物是土甘草的主要化學(xué)成分，也是主要活性成分之一，主要有黃酮、異黃酮和黃烷類，其中異黃酮占比較大。ZHANG H X等[5]從土甘草中分離鑒定了7個異黃酮類化合物，其中兩個新化合物分別為4-羥基-5,7-二甲氧基-6-(3-甲基-2-丁烯基)-異黃酮[4′-hydroxy-5,7-dimethoxy-6-(3-methyl-2-butenyl)-isoflavone]和7-羥基-5-甲氧基-6-（3-甲基-2-丁烯基）-3＇,4＇-（亞甲二氧基）-異黃酮（Derrubon 5-methyl ether）。YANG LF 等[6]從土甘草中首次分離得到3＇,4＇-二-O-亞甲基-5-羥基-7-甲氧基-6-異戊烯基異黃酮（3＇,4＇-di-O-methylene-5-hydroxy-7-methoxy-6-isopentenyl isoflavone）。王倫興等[7]通過多色譜聯(lián)合方法從毛果魚藤乙酸乙酯部位首次分離鑒定出9 個黃酮類化合物，其中6 個為異黃酮類化合物。見表1。

1.2 雙環(huán)氧木脂素類（21-28）該類化合物在土甘草所分離鑒定的化合物中結(jié)構(gòu)較為新穎，主要有雙氧環(huán)五六相連和雙氧環(huán)六六相連兩種類型。見表1。

1.3 三萜類（29-40）三萜類化合物也是土甘草的主要成分之一，主要為五環(huán)三萜類化合物。張憲民等[8]從土甘草中分離獲得了五個三萜化合物，其中三個五環(huán)三萜化合物為首次從土甘草中分離獲得，分別為魚藤三萜A[3β,15α-dihydroxy-olean-12 (13) -en-16-one]、魚藤三萜B（3β,15α,23-tri-hydroxy--olean-12-en-16-one）、魚藤三萜C[15α-hydroxy-16-oxo-olean-12(13)-en-3-O-β-glucuronopyranoside]。吳紅果等[9]在土甘草中首次分離了大豆甾醇B（soyasapogenol B）、羽扇-20(29)-烯-3-酮[Lup-20(29)-en-3-one]和白樺脂酸（Betulinic acid）。ZHANG H X 等[10]從土甘草中首次分離獲得了崖豆藤皂苷A（millettiasaponin A）。見表1。

1.4 香豆素類（41-45）香豆素類化合物在土甘草已知化合物中占比較小。楊東愛等[12]首次分離鑒定了土甘草的第一個香豆素成分-土甘草A。見表1。

1.5 其他類（46-63）經(jīng)過進一步對土甘草中其他化合物進行梳理發(fā)現(xiàn)，主要含有白藜蘆醇類（46-48）、環(huán)己烷醇類（49-51）以及鏈烴和甾醇等。見表1。

表1 土甘草中的分離鑒定的化合物一覽表

2 藥理活性研究

2.1 安全性評價 《中華本草》中土甘草（毛果魚藤）的劑量換算得小鼠最大臨床等效量約為5 g/kg，大鼠最大臨床等效量為3.15 g/kg[1]。試驗結(jié)果表明，土甘草水提物對小鼠灌胃給藥的最大耐受量為62.8 g/kg（生藥量）；乙醇提物對小鼠灌胃給藥的最大耐受量為96.0 g/kg（生藥量），兩者均未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，提示土甘草具有較低的生物毒性[14-15]。

2.2 抗炎、鎮(zhèn)痛 土甘草水、醇提取物及民間成方制劑具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。中藥實驗藥理研究發(fā)現(xiàn)，土甘草水提取物（5 g/kg、10 g/kg、20 g/kg）、乙醇提取物（15 g/kg、30 g/kg）和正丁醇提取物（30 g/kg、60 g/kg）均可顯著抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹（與空白對照組比較，P＜0.05），抑制率（%）分別為：33.59、33.79、37.00/23.88、30.74/33.87、56.45、48.39（阿司匹林：25.99%）；土甘草水提取物（5 g/kg、10 g/kg、20 g/kg），乙醇提取物（5 g/kg、10 g/kg、20 g/kg）及正丁醇提取物（15 g/kg、30 g/kg、60 g/kg）能顯著減少醋酸注射導(dǎo)致的小鼠扭體反應(yīng)（與空白對照組比較，P＜0.05），抑制率（%）分別為：51.02、52.55、60.71/33.16、41.84、68.88/74.29、74.29、78.57（阿司匹林：87.76%）[15-16]。提示土甘草的水、乙醇和正丁醇提取物均有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用，高劑量組抗炎鎮(zhèn)痛效果與陽性對照阿司匹林（200 mg/kg）相當(dāng)。廣西學(xué)者利用大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，開展了成方制劑“桂龍藥膏”的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥效實驗，結(jié)果顯示桂龍藥膏（54.5 g/kg）對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎有明顯抑制作用，與陽性藥醋酸潑尼松（5 mg/kg）療效相當(dāng)。連續(xù)給藥32 d 后，大鼠足趾腫脹值由（8.30±0.67）mm 降低至（5.60±0.90）mm [醋酸潑尼：（5.20±1.14）mm]。此外，桂龍藥膏（72.8 g/kg）能明顯縮短小鼠足跖底部瘀斑消失時間（消癍時間：（78.0±13.0）h、抑制棉球肉芽組織增生（抑制率：18.2%）、提高小鼠痛閾（提高值：39.2%），抗炎鎮(zhèn)痛作用呈劑量依賴性[17]。

2.3 止咳祛痰 土甘草多用于治療咳血、咳嗽等癥，是壯族民間常用的止咳藥。藥理研究發(fā)現(xiàn)，土甘草水提取物（5 g/kg、10 g/kg、20 g/kg），乙醇提取物（7.5 g/kg、15 g/kg、30 g/kg）能夠有效延長小鼠對氨水引起的咳嗽的潛伏期，其中水提取物（20 g/kg）、乙醇提取物（15 g/kg）止咳效果最明顯（與空白組比較，P＜0.01），止咳率分別為342.21%和300.62%；土甘草水提取物（5 g/kg、10 g/kg、20 g/kg）和乙醇提取物（30 g/kg）明顯增加小鼠氣管酚紅排泌量（與空白組比較，P＜0.05），酚紅吸收度值分別為：（0.185±0.031）（0.194±0.027）（0.180±0.022）（0.217±0.061），提示土甘草具有明顯的祛痰作用[18]。

2.4 抗腫瘤 土甘草提取分離得到的黃酮類化合物-Alpinumisoflavone（AIF），具有明顯的抗黑色素瘤、食管鱗狀上皮細胞癌、膠質(zhì)細胞瘤和甲狀腺癌等作用。AIF 抗腫瘤作用具體表現(xiàn)為促細胞分化、抑制癌細胞黏附、轉(zhuǎn)移和侵襲能力、誘導(dǎo)DNA 損傷、細胞凋亡以及細胞周期阻滯。

GAO M 等[19]利用黑色素瘤的體外和體內(nèi)模型，評價了AIF的抗黑色素瘤轉(zhuǎn)移作用。體外實驗中發(fā)現(xiàn)，AIF 可以促進人黑色素瘤細胞A375 和SK-MEL-1 細胞分化，抑制其黏附、轉(zhuǎn)移和侵襲能力，其作用機制可能通過降低COX-2 的表達、增加miR-124 水平，降低miR-124 靶向蛋白SphK1 含量來抑制黑色素瘤細胞的轉(zhuǎn)移。此外，在小鼠黑色素瘤體內(nèi)模型中，AIF 明顯抑制了黑色素瘤的轉(zhuǎn)移。ZHANG B 等[20]體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，AIF 通過抑制輻射誘導(dǎo)的食管鱗狀上皮細胞癌細胞（ESCC）DNA 損傷、細胞凋亡以及細胞周期阻滯，從而顯著提高ESCC 對輻射的敏感性。其機制為通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2 的表達，間接抑制Nrf2 調(diào)控的抗氧化分子NQO-1 和 HO-1 的表達，從而增強輻照誘導(dǎo)的活性氧（ROS）生成。該研究提示AIF 是一種人食管鱗狀上皮細胞癌潛在的放射增敏劑，具有一定的抗凋亡、促進細胞分裂和抗氧化作用。ZHAO X Z 等[21]研究表明，AIF 能夠降低膠質(zhì)細胞瘤（GBM）細胞T98G 和U373 的存活率。AIF 治療中觀察到細胞內(nèi)Caspase-9 被激活、線粒體膜電位破壞以及線粒體細胞色素C 丟失等現(xiàn)象，表明AIF 可以通過兩種經(jīng)典凋亡途徑（線粒體途徑和非線粒體途徑）共同促進GBM細胞凋亡。此外，研究發(fā)現(xiàn)HK2 是AIF 抗GBM 細胞活性的分子靶點，敲除HK2 基因能夠增強AIF 的抗腫瘤活性。其機制可能是通過靶分子HK2，減少GBM 細胞的葡萄糖消耗和乳酸輸出（抑制GBM 細胞糖酵解），從而展現(xiàn)出抗膠質(zhì)細胞瘤的作用。FANG M 等[22]開展的AIF 抗甲狀腺癌（PTC）實驗研究顯示，AIF 顯著抑制了PTC 細胞的存活、遷移、侵襲以及上皮細胞的間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，并誘導(dǎo)細胞凋亡。通過基因敲除實驗證實miR-141-3p 可能介導(dǎo)了AIF 對PTC 細胞的抑制作用。體內(nèi)的研究也證實了AIF 的抗生長和抗轉(zhuǎn)移活性至少部分是通過iR-141-3p 的上調(diào)介導(dǎo)的，提示AIF 可以作為一個治療PTC 的潛在化合物。

2.5 骨骼保護作用 CONG W 等[23]利用卵巢切除的小鼠模型，研究AIF 對骨骼的保護作用。結(jié)果顯示AIF 可以通過P38MAPK、ERK 和JNK 通路抑制c-Fos和NFATc1 的表達，進而抑制破骨細胞的分化，減輕卵巢切除小鼠的骨質(zhì)流失。WANG Y 等[24]通過大鼠模型研究成骨細胞和骨細胞的凋亡，探討AIF 對糖皮質(zhì)激素地塞米松引起的全身性骨質(zhì)疏松的保護作用。結(jié)果表明AIF 能有效預(yù)防地塞米松所致的骨質(zhì)疏松癥。其機制可能在于AIF 激活了成骨細胞和骨細胞Nrf2 信號通路，抑制了ROS 的產(chǎn)生，從而逆轉(zhuǎn)了地塞米松誘導(dǎo)的成骨細胞和骨細胞凋亡。YIN J 等[25]發(fā)現(xiàn)AIF 能有效保護MLO-Y4 細胞免受地塞米松誘導(dǎo)產(chǎn)生的細胞凋亡。上述研究表明，AIF 可以抑制細胞NAD（P）H 氧化酶（Nox2）的表達，進而減少了MLO-Y4 細胞中ROS 的產(chǎn)生和細胞凋亡，提示AIF 可能通過激活A(yù)MPK 通路來對過度氧化應(yīng)激反應(yīng)引起的骨損傷和骨細胞凋亡產(chǎn)生保護作用。

2.6 降血糖 鄧麗姚等[26]研究表明，土甘草石油醚提取物高劑量組（800 mg/kg）能顯著提升糖尿病小鼠體質(zhì)量（13.86%）、降低胰腺指數(shù)（9.47%）、提高肝臟指數(shù)（13.30%），提高血清SOD、GSH-Px水平（45.14%、125.21%），降低MDA 含量（64.58%），與陽性藥二甲雙胍效果相當(dāng)。土甘草石油醚提取物能顯著改善2 型糖尿病小鼠糖耐量，減輕糖尿病小鼠的氧化應(yīng)激。HE 染色及免疫組化結(jié)果顯示，土甘草油醚提取物通過抗氧化作用保護胰腺和肝臟，使胰島細胞凋亡和炎癥因子表達顯著下降，從而發(fā)揮降糖作用。楊麗芳等[27-28]進一步研究發(fā)現(xiàn)，土甘草石油醚提取物能顯著提高糖尿病小鼠血清胰島素，小鼠胰島素敏感指數(shù)升高，TC、TG 含量降低，HDL-C 含量升高，小鼠炎性指標IL-1β、MCP-1 水平降低，肝臟內(nèi)TLR-4、NF-κB、Caspase-3、mRNA及蛋白的表達顯著降低，減緩了糖尿病小鼠的肝損傷。此外，小鼠腹腔注射土甘草石油醚提取物（PEEDEH）可以降低空腹血糖、血尿氮和血清肌酐水平，改善腎指數(shù)，降低體內(nèi)白細胞介素6（IL-6）和腫瘤壞死因子的水平。免疫組織化學(xué)檢測顯示，使用PEEDEH 后，TLR-4、NF-κB、半胱天冬蛋白酶-3和COX-2 的表達均降低。以上研究表明，土甘草石油醚提取物可能是通過提高糖尿病小鼠胰島β 細胞分泌胰島素、調(diào)節(jié)血脂，增加小鼠的抗炎能力、保護肝臟，通過TLR-4/NF-κB/半胱天冬蛋白酶-3 通路發(fā)揮抗糖尿病腎病作用。

3 小結(jié)

土甘草化學(xué)成分和藥理活性研究取得了一定的進展。目前從土甘草中分離鑒定了63 個單體化合物，其中黃酮和三萜類化合物是其主要化學(xué)成分，具有廣泛藥理活性，AIF 具有一定的抗腫瘤和骨骼保護作用。土甘草水提取物、醇提取物、石油醚粗取物具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛、止咳、降血糖作用，且安全性較高。以土甘草為主要原料的制劑“桂龍藥膏”對大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎有非常好的治療作用?？v觀化學(xué)成分和藥理活性研究，目前國內(nèi)外關(guān)于土甘草藥理作用研究主要集中在水、醇提取物及黃酮類單體化合物AIF，除此之外的其他化合物的藥理活性至今未見相關(guān)報道。因此，我們認為土甘草的藥理學(xué)和化學(xué)研究工作開展的還不夠充分，化學(xué)成分僅鑒定了數(shù)十個化合物，大量新的化合物有待發(fā)掘?？寡?、鎮(zhèn)痛等藥理研究一直停留在提取物層面，對已發(fā)現(xiàn)和鑒定的化合物應(yīng)加大藥理研究力度，進一步完善該藥材的基礎(chǔ)研究資料。