侯改霞， 習(xí)雪峰， 劉倩倩， 付素?zé)ǎ?唐書曼， 卞寒雪

有氧間歇運(yùn)動(dòng)對(duì)2型糖尿病大鼠心肌線粒體自噬的影響*

侯改霞， 習(xí)雪峰△， 劉倩倩， 付素?zé)ǎ?唐書曼， 卞寒雪

（河南大學(xué)體育學(xué)院，河南 開封 475001）

探討線粒體自噬在運(yùn)動(dòng)（Exe）干預(yù)2型糖尿病心肌病中的作用及可能機(jī)制。自發(fā)性2型糖尿病Goto-Kakizaki （GK）大鼠隨機(jī)分為2組：糖尿病組（GK組）和GK+Exe組，每組8只；另增設(shè)8只同周齡雄性Wistar大鼠作為對(duì)照組（Wistar組）。GK+Exe組大鼠經(jīng)有氧間歇運(yùn)動(dòng)干預(yù)8周，每天60 min，每周5 d。在最后一次運(yùn)動(dòng)結(jié)束48 h后，過(guò)夜禁食12 h后，將大鼠腹腔麻醉、剖腹，腹主動(dòng)脈采血，檢測(cè)空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FINS）及血清乳酸脫氫酶（LDH）和肌酸激酶（CK）水平。制作心肌透射電子顯微鏡切片，觀察心肌細(xì)胞及線粒體的超微結(jié)構(gòu)。Western blot法測(cè)定心肌組織中p-AMPK、p-ULK1、TFEB、PINK1、parkin、LC3-II、LC3-I和p62蛋白表達(dá)，并計(jì)算LC3-II/LC3-I比值。與Wistar組相比，GK組大鼠FBG及血清LDH和CK水平顯著升高（<0.01），F(xiàn)INS水平顯著降低（<0.01）；心肌線粒體結(jié)構(gòu)欠缺，有空泡現(xiàn)象，偶見自噬體；心肌p-ULK1表達(dá)顯著下降（<0.01），p62表達(dá)顯著升高（<0.01）。與GK組相比，GK+Exe組大鼠FBG和血清CK水平顯著降低（<0.05），F(xiàn)INS水平顯著升高（<0.05）；心肌線粒體結(jié)構(gòu)基本完整，空泡現(xiàn)象減輕，自噬體形成增多；心肌p-AMPK、p-ULK1、TFEB和parkin表達(dá)及LC3-II/LC3-I顯著升高（<0.05或<0.01），p62表達(dá)顯著下降（<0.05）。有氧間歇運(yùn)動(dòng)對(duì)2型糖尿病心肌病具有一定的緩解作用，其機(jī)制可能與激活心肌AMPK/ULK1信號(hào)通路，提高心肌線粒體自噬有關(guān)。

糖尿病心肌??；有氧間歇運(yùn)動(dòng)；線粒體自噬；AMPK/ULK1信號(hào)通路

2型糖尿病是一種以胰島素分泌和利用缺陷為特征的慢性代謝性疾病。糖尿病患者發(fā)生心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)（39%）是非糖尿病患者（23%）的近兩倍，心力衰竭是糖尿病患者死亡的主要原因［1］。線粒體對(duì)于心肌收縮、電穩(wěn)定性、細(xì)胞存活和凋亡非常重要。在高血糖環(huán)境下，心肌細(xì)胞內(nèi)受損/缺陷線粒體積累增多，心肌細(xì)胞代謝和功能異常［2］。線粒體自噬可選擇性的清除衰老或損傷的線粒體，維持心肌細(xì)胞線粒體的數(shù)量與形態(tài)平衡，達(dá)到抑制氧化應(yīng)激、減少細(xì)胞損傷的作用。因此，線粒體自噬與糖尿病心肌病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

AMPK（AMP-activated protein kinase）及其下游調(diào)節(jié)因子ULK1（Unc-51 like autophagy activating kinase 1）已被證明在線粒體自噬中發(fā)揮關(guān)鍵作用。運(yùn)動(dòng)是防治2型糖尿病及其并發(fā)癥的常用輔助療法之一。運(yùn)動(dòng)（exercise， Exe）可通過(guò)激活A(yù)MPK，提高運(yùn)動(dòng)后骨骼肌線粒體自噬水平；若抑制AMPK活性或敲除基因，運(yùn)動(dòng)則無(wú)法誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞線粒體自噬的變化［3］。運(yùn)動(dòng)可有效誘導(dǎo)自噬的發(fā)生，一次急性運(yùn)動(dòng)可使心肌細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)發(fā)生變化，運(yùn)動(dòng)對(duì)心肌的保護(hù)作用部分是通過(guò)運(yùn)動(dòng)增加自噬實(shí)現(xiàn)的［4］，但具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。已有研究表明，運(yùn)動(dòng)對(duì)糖尿病心肌病確有一定的緩解作用［5-6］。但是，關(guān)于線粒體自噬在運(yùn)動(dòng)緩解糖尿病心肌病中作用和機(jī)制的研究還較少。因此，本研究將以AMPK/ULK1信號(hào)通路作為出發(fā)點(diǎn)，探討線粒體自噬在運(yùn)動(dòng)干預(yù)2型糖尿病心肌病中的作用及可能機(jī)制。

材料和方法

1　材料

18只自發(fā)性2型糖尿病Goto-Kakizaki （GK）大鼠（300～350 g）和8只Wistar大鼠（400～450 g）均購(gòu)自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司［16周齡，雄性，SPF級(jí)，許可證號(hào)為SCXK（京）2019-0010］。

乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase， LDH）和肌酸激酶（creatine kinase， CK）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所）；胰島素ELISA試劑盒（聯(lián)科生物）；兔抗大鼠p-AMPK多克隆抗體（CST）；兔抗大鼠p-ULK1多克隆抗體和小鼠抗大鼠PINK多克隆抗體（Abcam）；兔抗大鼠parkin多克隆抗體和小鼠抗大鼠GAPDH多克隆抗體（Servicebio）；兔抗大鼠微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule-associated protein 1 light chain 3， LC3）多克隆抗體（武漢三鷹）；小鼠抗大鼠p62單克隆抗體（Santa）；兔抗大鼠轉(zhuǎn)錄因子EB（transcription factor EB， TFEB）多克隆抗體（BIOSS）；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

透射電子顯微鏡（HITACHI）；臺(tái)式高速冷凍型微量離心機(jī)（Dragon Lab）；酶標(biāo)檢測(cè)儀（Rayto）；電泳儀（北京六一儀器廠）；圖像采集分析系統(tǒng)（Nikon）；血糖儀（日本京都）；動(dòng)物跑臺(tái)（成都泰盟）。

2　方法

2.1實(shí)驗(yàn)分組GK大鼠經(jīng)過(guò)1周的適應(yīng)性喂養(yǎng)后，檢測(cè)隨機(jī)血糖，并進(jìn)行口服糖耐量實(shí)驗(yàn)。GK大鼠隨機(jī)血糖≥11.1 mmol/L且口服糖耐量降低為2型糖尿病GK大鼠成模標(biāo)準(zhǔn)［7-8］，共篩選出16只GK大鼠用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將篩選出的GK大鼠隨機(jī)分為2組：糖尿病組（GK組）和GK+Exe組，每組8只。另設(shè)8只同周齡雄性Wistar大鼠作為對(duì)照組（Wistar組）。所有大鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水、攝食，室溫為（22±2） ℃，相對(duì)濕度為40%～60%，光照/黑暗周期為12 h（8：00～20：00）。

2.2運(yùn)動(dòng)干預(yù)［9］GK+Exe組大鼠采用有氧間歇跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)（aerobic interval training， AIT）。正式運(yùn)動(dòng)前先進(jìn)行1周的適應(yīng)性運(yùn)動(dòng)。第2周開始進(jìn)行正式AIT，每天60 min，每周5 d，共8周。正式運(yùn)動(dòng)時(shí)，首先進(jìn)行10 min的熱身運(yùn)動(dòng)，然后在22 m/min、7 min和15 m/min、3 min之間交替進(jìn)行共60 min的運(yùn)動(dòng)。

2.3實(shí)驗(yàn)取材為了避免急性運(yùn)動(dòng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，在最后一次跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)結(jié)束48 h后，過(guò)夜禁食12 h，采用血糖儀檢測(cè)大鼠空腹血糖（fast blood glucose， FBG），將大鼠腹腔麻醉、剖腹，腹主動(dòng)脈采血，全血3 000 r/min離心20 min，取血清置于-80 ℃冰箱保存，用于檢測(cè)空腹胰島素（fasting insulin， FINS）、LDH和CK。取部分左心室置于2.5%戊二醛固定液，以備心肌透射電鏡切片的制作及觀察；另取部分左心室置于-80℃冰箱保存，用于測(cè)定心肌線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。

2.4血液指標(biāo)的檢測(cè)FINS、LDH和CK的檢測(cè)完全按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2.5心肌透射電鏡制片及觀察（1）固定：取大鼠左心室1 mm×1 mm×1 mm大小的組織置于電鏡固定液進(jìn)行固定。（2）后固定：1%鋨酸室溫固定2 h。（3）脫水：依次放入30%、50%、70%、80%、95%、100%和100%乙醇脫水，每次20 min，100%丙酮兩次，每次15 min。（4）滲透包埋：丙酮∶包埋劑=1∶1， 2～4 h， 丙酮∶包埋劑=1∶2，滲透過(guò)夜，純包埋劑，5～8 h，均在37 ℃條件下進(jìn)行。（5）聚合：置于60 ℃烤箱聚合48 h。（6）超薄切片：60～80 nm超薄切片，150目銅網(wǎng)撈片。（7）染色：銅網(wǎng)置于醋酸鈾飽和乙醇溶液避光染色8 min，枸櫞酸鉛溶液避二氧化碳染色8 min。（8）透射電鏡下觀察，采集圖像分析。

2.6Western blot檢測(cè)取100 μg心肌組織加入1 mL裂解液充分裂解，離心，收集上清。BCA法測(cè)定蛋白濃度，SDS-PAGE分離，PVDF膜轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶封閉，4 ℃孵育Ⅰ抗（1∶1 000）過(guò)夜，孵育Ⅱ抗（1∶5 000）30 min，化學(xué)發(fā)光法顯影、定影，掃描膠片存檔。以GAPDH為內(nèi)參照。采用ImageJ軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行半定量分析。

3　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。組間比較采用單因素方差分析。以<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1　大鼠的一般體征

Wistar組大鼠體形正常，皮毛呈白色且有光澤，飲食、大小便正常，精神狀態(tài)良好，反應(yīng)敏捷；GK組大鼠體型較瘦，毛色發(fā)黃，缺少光澤，反應(yīng)遲鈍，出現(xiàn)多飲多尿癥狀；GK+Exe組大鼠體形、皮毛色澤、精神狀態(tài)、反應(yīng)等情況均有一定程度的改善。

2　大鼠血液相關(guān)指標(biāo)的比較

如表1所示，與Wistar組相比，GK組大鼠FBG、LDH和CK水平顯著升高（<0.01），F(xiàn)INS水平顯著降低（<0.01）；與GK組相比，GK+Exe組大鼠FBG和CK水平顯著降低（<0.05），F(xiàn)INS水平顯著升高（<0.05），但GK+Exe組大鼠FBG和LDH水平仍顯著高于Wistar組（<0.01），F(xiàn)INS水平顯著低于Wistar組（<0.01）。

表1　不同組別大鼠FBG、FINS、LDH和CK水平的比較

3　大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)的比較

如圖1所示，Wistar組大鼠心肌線粒體結(jié)構(gòu)完整，無(wú)空泡、無(wú)腫脹變形，基質(zhì)致密，線粒體嵴排列整齊、無(wú)斷裂；GK組大鼠部分線粒體結(jié)構(gòu)欠缺，線粒體嵴部分?jǐn)嗔?，有空泡現(xiàn)象，基質(zhì)密度降低，偶見自噬體；GK+Exe組大鼠線粒體結(jié)構(gòu)基本完整，空泡現(xiàn)象減輕，線粒體基質(zhì)致密，膜基本完整，自噬體形成增多。

Figure 1.Ultrastructure of myocardial mitochondria in the rats of different groups （×6 000， scale bar=1 μm）.

4　大鼠心肌p-AMPK和p-ULK1水平的變化

與Wistar組相比，GK組大鼠心肌p-ULK1水平顯著下降（<0.01）；與GK組相比，GK+Exe組p-AMPK和p-ULK1水平均顯著升高（<0.01），見圖2。

Figire 2.Comparison of expression of p-AMPK and p-ULK1 in myocardium of rats in different groups. Mean±SD. n=8. **P<0.01 vs Wistar group； ##P<0.01 vs GK group.

5　大鼠心肌TFEB表達(dá)的變化

與Wistar組相比，GK組大鼠心肌TFEB表達(dá)無(wú)顯著差異（>0.05）；與Wistar組和GK組相比，GK+Exe組TFEB表達(dá)顯著升高（<0.05或<0.01），見圖3。

Figure 3.Comparison of expression of TFEB in myocardium of rats in different groups. Mean±SD. n=8. **P<0.01 vs Wistar group； #P<0.05 vs GK group.

6　大鼠心肌PINK1和parkin表達(dá)的變化

與Wistar組相比，GK組大鼠心肌PINK1和parkin表達(dá)無(wú)顯著差異（>0.05）；與Wistar組相比，GK+Exe組大鼠心肌PINK1表達(dá)顯著升高（<0.05）；與Wistar組和GK組相比，GK+Exe組大鼠心肌parkin表達(dá)顯著升高（<0.01），見圖4。

Figure 4.Comparison of expression of PINK1 and parkin in myocardium of rats in different groups. Mean±SD. n=8. *P<0.05， **P<0. 01 vs Wistar group； ##P<0.01 vs GK group.

7　大鼠心肌LC3-II/LC3-I和p62表達(dá)的變化

與Wistar組相比，GK組和GK+Exe組大鼠心肌p62表達(dá)顯著升高（<0.05或<0.01）；與GK組相比，GK+Exe組大鼠心肌LC3-II/LC3-I顯著升高（<0.01），p62表達(dá)顯著下降（<0.05），見圖5。

Figure 5.Comparison of expression of p62 and LC3-II/LC3-I in myocardium of rats in different groups. Mean±SD. n=8. *P<0.05，**P<0.01 vs Wistar group； #P<0.05， ##P<0.01 vs GK group.

討論

線粒體是心肌細(xì)胞的“能量工廠”，其體積占據(jù)細(xì)胞質(zhì)體積的35%～40%，為心臟跳動(dòng)提供95%的ATP。在心肌細(xì)胞中，線粒體對(duì)于心肌收縮、電穩(wěn)定性和細(xì)胞存活或凋亡非常重要，在生理?xiàng)l件和病理應(yīng)激損傷中調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生理過(guò)程［10］。在糖尿病機(jī)體中，健康的線粒體對(duì)于心肌細(xì)胞存活至關(guān)重要。然而，在持續(xù)的高血糖刺激下，心肌細(xì)胞的線粒體斷裂、活性氧（reactive oxygen species， ROS）增多，線粒體膜電位和電子傳遞鏈活性降低，心肌細(xì)胞能量缺乏，心肌細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致心功能不全。線粒體功能障礙可能是糖尿病心肌病的中心介質(zhì)［11］。在本研究中，2型糖尿病GK大鼠FBG及血清CK和LDH水平顯著升高，F(xiàn)INS水平顯著降低，電鏡觀察結(jié)果顯示心肌線粒體損傷嚴(yán)重；而規(guī)律的有氧間歇運(yùn)動(dòng)降低了GK大鼠FBG和血清CK水平，升高了FINS水平，心肌細(xì)胞線粒體自噬體增多，線粒體損傷減輕。這提示2型糖尿病GK大鼠心肌細(xì)胞遭到了一定程度的損害，運(yùn)動(dòng)對(duì)其緩解作用除了與降低血糖、提高胰島素水平相關(guān)外，可能與增強(qiáng)心肌細(xì)胞線粒體自噬，降低線粒體的損傷相關(guān)。

線粒體自噬可選擇性降解受損或衰老的線粒體，并使其循環(huán)利用［12］。以往研究表明，在代謝綜合征心臟中，線粒體自噬要么下調(diào)［13］，要么上調(diào)［14］。線粒體自噬在糖尿病心肌病中的潛在機(jī)制尚未完全明確。Tong等［15］發(fā)現(xiàn)，在糖尿病心肌病早期發(fā)展過(guò)程中，線粒體自噬被激活，但不足以保護(hù)心臟。增強(qiáng)線粒體自噬功能可減輕線粒體功能障礙，減少脂質(zhì)積聚，并防止心臟舒張功能障礙。通過(guò)藥物（如非諾貝特、二甲雙胍和白藜蘆醇等）干預(yù)激活自噬可挽救糖尿病引起的心臟功能障礙，而抑制自噬會(huì)加劇糖尿病心肌病。

AMPK和ULK1已被證明在線粒體自噬中發(fā)揮關(guān)鍵作用［16］。線粒體受損時(shí)，線粒體中AMPK表達(dá)量約增加3倍，表明AMPK被招募到線粒體以應(yīng)對(duì)線粒體損傷。AMPK可與ULK1富含絲氨酸/脯氨酸的區(qū)域相互作用，并直接磷酸化ULK1的多個(gè)位點(diǎn)，導(dǎo)致ULK1構(gòu)象變化，從而促進(jìn)ULK1與其復(fù)合物其他組分的相互作用，增加ULK1活性和穩(wěn)定性。在基因敲除的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，ULK1不能被激活，自噬被抑制，受損線粒體積聚，證明AMPK誘導(dǎo)的ULK1磷酸化在自噬中十分重要［17］。本研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病GK大鼠心肌p-ULK1水平下降，而運(yùn)動(dòng)可提高GK大鼠心肌p-AMPK和p-ULK1水平，提示運(yùn)動(dòng)可能通過(guò)提高GK大鼠心肌p-AMPK和p-ULK1的水平，開啟增強(qiáng)心肌線粒體自噬的通路。前人關(guān)于運(yùn)動(dòng)與骨骼肌線粒體自噬的研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。急性運(yùn)動(dòng)可刺激AMPK和ULK1磷酸化［18］，AMPK是運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)ULK1特異性磷酸化參與下游線粒體自噬途徑所必需的。同樣，骨骼肌基因缺失也會(huì)抑制線粒體自噬［3］，而且ULK1在將溶酶體靶向受損/功能失調(diào)的線粒體方面具有重要作用。

TFEB是自噬的主要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可協(xié)調(diào)約60種溶酶體水解酶以及溶酶體和自噬體膜相關(guān)輔助蛋白的表達(dá)，同時(shí)也調(diào)節(jié)自噬囊泡的形成、定位和通量［19］，激活整個(gè)自噬溶酶體途徑。本研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)提高了GK大鼠心肌TFEB表達(dá)，這可能與運(yùn)動(dòng)提高了GK大鼠心肌p-AMPK水平有關(guān)。激活A(yù)MPK可通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)TFEB表達(dá)［20］。TFEB可上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞的自噬相關(guān)基因的表達(dá)，通過(guò)促進(jìn)血管生成，改善心肌梗死后心臟功能的恢復(fù)［21］，TFEB的下調(diào)會(huì)導(dǎo)致心肌自噬通量受損、氧化應(yīng)激增加［22］。

在線粒體自噬過(guò)程中，PINK1/parkin信號(hào)通路的主要功能為監(jiān)控線粒體質(zhì)量，識(shí)別受損線粒體，標(biāo)記受損線粒體，募集自噬受體，開啟自噬過(guò)程。本研究結(jié)果表明，間歇性有氧運(yùn)動(dòng)可增強(qiáng)2型糖尿病大鼠心肌PINK1和parkin表達(dá)，與提高p-AMPK、p-ULK1和TFEB水平的作用一致，可能在增強(qiáng)糖尿病心肌線粒體自噬方面起到相輔相成的作用。現(xiàn)在研究認(rèn)為，AMPK和（或）ULK1的一些下游靶點(diǎn)可能參與PINK1/parkin信號(hào)通路。而parkin中ULK1磷酸化位點(diǎn)突變、遺傳性或基因缺失或藥理學(xué)ULK1抑制，都會(huì)延遲parkin的激活，導(dǎo)致parkin和線粒體自噬功能的缺陷［16］。同樣，TFEB與PINK1/parkin誘導(dǎo)的線粒體自噬也有關(guān)系。PINK1/parkin與線粒體結(jié)合依賴于TFEB［23］。反過(guò)來(lái)，PINK1/parkin也可促進(jìn)TFEB向細(xì)胞核的移位，激活溶酶體基因的表達(dá)，增強(qiáng)線粒體自噬［24］。

磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine， PE）是自噬小體的一種整合蛋白，Atg8家族蛋白與PE的結(jié)合是吞噬囊泡形成的一個(gè)關(guān)鍵因素。LC3是Atg8蛋白中的亞家族，通常以LC3-I的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)線粒體自噬發(fā)生時(shí)，LC3-I通過(guò)類泛素樣修飾的方式與PE共價(jià)結(jié)合，形成LC3-II。此后，LC3-II促進(jìn)自噬泡雙層膜的起始、延伸及閉合，提供自噬受體的結(jié)合位點(diǎn)，并與溶酶體膜融合。LC3-II與自噬小體數(shù)量緊密相關(guān)，是反映線粒體自噬活性的關(guān)鍵指標(biāo)。p62通過(guò)其LIR（LC3-interaction region）結(jié)構(gòu)域與LC3形成復(fù)合物，被包裹進(jìn)自噬小體，可作為自噬特異性底物在自噬溶酶體內(nèi)降解［25］。自噬發(fā)生時(shí)，p62被不斷降解；當(dāng)自噬功能受損或減弱時(shí)，p62蛋白明顯累積。因此，p62蛋白表達(dá)水平與自噬活性成反比，是檢測(cè)線粒體自噬的一個(gè)輔助指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，間歇性有氧運(yùn)動(dòng)可提高2型糖尿病大鼠心肌LC3-II/LC3-I水平和p62蛋白表達(dá)，從而促進(jìn)心肌線粒體自噬。研究發(fā)現(xiàn)，活化的AMPK可以調(diào)節(jié)ULK1磷酸化，進(jìn)而磷酸化FUN14結(jié)構(gòu)域包含蛋白1（FUN14 domain containing 1， FUNDC1）的Ser17位點(diǎn)，提髙FUNDC1與LC3的結(jié)合效率，促進(jìn)線粒體自噬［26］。此外，磷酸化ULK1還可通過(guò)對(duì)p62的UBA結(jié)構(gòu)域Ser403位點(diǎn)的磷酸化作用，導(dǎo)致p62泛素化，激活線粒體自噬［27］。

總之，鑒于上述的AMPK/ULK1與TFEB、PINK1/parkin、LC3和p62在線粒體自噬中的密切關(guān)系，結(jié)合本文的研究結(jié)果，提示間歇性有氧運(yùn)動(dòng)可能通過(guò)增強(qiáng)2型糖尿病大鼠心肌AMPK/ULK1信號(hào)通路的作用，提高了心肌線粒體自噬，從而緩解2型糖尿病心肌病。然而，具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

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Effects of aerobic interval training on autophagy of myocardial mitochondria in type 2 diabetic rats

HOU Gai-xia， XI Xue-feng△， LIU Qian-qian， FU Su-huan， TANG Shu-man， BIAN Han-xue

（，，475001，）

To investigate the effect of exercise （Exe） intervention on type 2 diabetic cardiomyopathy and its possible mechanism.Spontaneously type 2 diabetic Goto-Kakizaki （GK） rats were randomly divided into diabetic group （GK group） and GK+Exe group， while another 8 male Wistar rats served as control group （Wistar group）. The rats in GK+Exe group were treated with aerobic interval training， 60 min per day， 5 d per week for 8 weeks. The rats were anesthetized， and the blood was collected 48 h after the last Exe with overnight fasting. Fasting blood glucose （FBG）， fasting inslulin （FINS）， and serum LDH and CK levels were measured. Ultrastructure of cardiomyocytes and mitochondria was observed by transmission electron microscopy. The protein levels of p-AMPK， p-ULK1， TFEB， PINK1， parkin， LC3-II， LC3-I and p62 in myocardial tissues were measured by Western blot， and the ratio of LC3-II/LC3-I was calculated.Compared with Wistar group， the FBG， and serum LDH and CK levels were increased in GK group （0.01）， and FINS in GK group was decreased significantly （<0.01）. Incomplete mitochondrial structure， vacuole and occasional autophagy were observed in the myocardial mitochondria of GK rats. The expression of p-ULK1 was decreased， while p62 was increased in GK group （0.01）. Compared with GK group， the FBG and serum CK levels were decreased， while FINS was increased significantly in GK+Exe group （0.05）. Normal mitochondrial structure， less vacuoles and more autophagosomes were observed in GK+Exe group. Exe also elevated the levels of p-AMPK， p-ULK1， TFEB， parkin and LC3-II/LC3-I， but inhibited p62 expression （0.05）.Aerobic interval training attenuates type 2 diabetic cardiomyopathy through AMPK/ULK1 signaling pathway and myocardial mitochondrial autophagy.

Diabetic cardiomyopathy； Aerobic interval training； Mitophagy； AMPK/ULK1 signaling pathway

R587.2； R363.2

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2022.03.008

**0.01Wistar group；△<0.05GK group.

1000-4718（2022）03-0442-06

2021-12-01

2022-01-20

［基金項(xiàng)目］河南省重點(diǎn)研發(fā)與推廣專項(xiàng)（科技攻關(guān)）項(xiàng)目（No. 202102310318； No. 212102310262）；河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目（No. 20A890002）

Tel： 0378-22866474； E-mail： 271070602@qq.com

（責(zé)任編輯：盧萍，羅森）