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        培養(yǎng)基激素配比對(duì)粉麗人長(zhǎng)壽花莖段培養(yǎng)的影響

        2022-03-27 01:21:18王明山韓春葉
        河南農(nóng)業(yè)·教育版 2022年2期
        關(guān)鍵詞:組織培養(yǎng)培養(yǎng)基

        王明山 韓春葉

        摘要:以粉麗人長(zhǎng)壽花莖段為材料,MS 為基本培養(yǎng)基,研究激素不同濃度配比對(duì)粉麗人長(zhǎng)壽花快速繁殖生長(zhǎng)的影響,以期尋找粉麗人長(zhǎng)壽花莖段再生體系的最佳激素配比。結(jié)果表明,適宜粉麗人長(zhǎng)壽花花芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,適宜粉麗人長(zhǎng)壽花生根的培養(yǎng)基為1/4MS+NAA0.5mg/L。

        關(guān)鍵詞:粉麗人長(zhǎng)壽花;組織培養(yǎng);培養(yǎng)基

        一、材料與方法

        (一) 試驗(yàn)材料

        粉麗人長(zhǎng)壽花購于鄭州市雙橋花卉市場(chǎng),取帶腋芽的粉麗人長(zhǎng)壽花的莖段2cm左右。

        (二) 試驗(yàn)方法

        1、粉麗人長(zhǎng)壽花腋芽誘導(dǎo)方法。在接種前,將粉麗人長(zhǎng)壽花用洗衣粉洗凈并放在自來水下沖洗1h,然后將整株的外植體剪成帶腋芽的莖段,將外植體帶入無菌操作室,在超凈工作臺(tái)上用70%酒精溶液浸泡30s,無菌水沖洗4次,接著用0.1%升汞溶液浸泡8min,用無菌水沖洗6次,將粉麗人長(zhǎng)壽花莖段上的水珠用無菌紙吸干,然后進(jìn)行接種。以MS+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L為基本培養(yǎng)基(下同),加入1.0mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA,每個(gè)處理接種15瓶,每瓶分別接種2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)莖段,培養(yǎng)條件(下同) 為溫度25±2℃, 相對(duì)濕度為70% ~80% , pH 值5.8, 光照強(qiáng)度1000~1500 lux。培養(yǎng)一個(gè)月后,記錄每瓶誘導(dǎo)出芽的數(shù)目和污染的數(shù)目,計(jì)算其誘導(dǎo)率。

        2、腋芽莖段初生培養(yǎng)方法。采用不同的6-BA和NAA激素配比,以MS為基本培養(yǎng)基,對(duì)帶腋芽的粉麗人長(zhǎng)壽花的莖段進(jìn)行初代培養(yǎng)。6-BA 濃度(mg/L) 為1.0、1.5、2.0, NAA 濃度(mg/L) 為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0,共21個(gè)處理,每個(gè)處理15瓶,每瓶接種2個(gè)帶腋芽的莖段。2周后觀察、統(tǒng)計(jì)莖段的腋芽誘導(dǎo)率與污染率。然后將獲得的無菌外植體接入到新鮮的培養(yǎng)基,進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

        3、外植體生根培養(yǎng)方法。分別以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基,加0.5mg/L NAA進(jìn)行生根培養(yǎng),每個(gè)處理接種15瓶,每瓶分別接種2個(gè),60d后統(tǒng)計(jì)生根率。再以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,分別加入0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4mg/L、0.5 mg/L 的NAA,以不加NAA為對(duì)照,每個(gè)處理接種15瓶,每瓶分別接種2個(gè)。60d后,統(tǒng)計(jì)生根率。誘導(dǎo)率、污染率、生根率的計(jì)算公式如下:

        二、結(jié)果與分析

        (一) 培養(yǎng)基接種數(shù)與誘導(dǎo)出芽的外植體數(shù)的關(guān)系

        從表1可以看出,培養(yǎng)基里每瓶放置4個(gè)外植體時(shí),腋芽的誘導(dǎo)率為75%;當(dāng)培養(yǎng)基里每瓶放置3個(gè)外植體時(shí),腋芽的誘導(dǎo)率為33.33%;當(dāng)培養(yǎng)基里每瓶放置2 個(gè)外植體時(shí),腋芽的誘導(dǎo)率為100%。

        上述分析結(jié)果表明,一個(gè)培養(yǎng)基里放置2個(gè)外植體,其腋芽誘導(dǎo)率最高,即每瓶接種2 個(gè)外植體誘導(dǎo)出芽效果最好。

        (二) 激素對(duì)外植體誘導(dǎo)的影響

        1、6-BA濃度對(duì)外植體誘導(dǎo)率的影響。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑用生長(zhǎng)素(NAA) 和細(xì)胞分裂素(6-BA),其中,6-BA是根尖合成向上運(yùn)輸,主要作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂和器官分化,促進(jìn)側(cè)芽分化和生長(zhǎng);NAA具有調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)和生根的作用。

        進(jìn)行初代培養(yǎng)14d后,對(duì)630個(gè)莖段的培養(yǎng)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果見表2。對(duì)21個(gè)不同激素配比進(jìn)行比較可知,在激素6-BA濃度為1.0~2.0mg/L、NAA的濃度為0~1.0mg/L時(shí),都能長(zhǎng)出定芽,在6-BA濃度為1.0mg/L、NAA濃度為0.2mg/L時(shí),能較早分化出定芽,且定芽的增殖速度很快;當(dāng)6-BA為1.0mg/L時(shí),外植體的誘導(dǎo)率最高,其平均值為54.29%。所以,6-BA的最佳濃度是1.0mg/L。

        增加1.5mg/L6-BA和2.0mg/L6-BA兩個(gè)濃度與7組不同NAA濃度構(gòu)成14個(gè)不同的濃度配比,探究增加6-BA的濃度能否增加誘導(dǎo)率。由表2可知,在增加的14個(gè)不同的濃度配比中誘異率有3 個(gè)峰點(diǎn),分別是6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L配比中的誘導(dǎo)率為66.67%,6-BA2.0mg/L+NAA0mg/L配比中的誘導(dǎo)率為76.67%,6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L配比中的誘導(dǎo)率為50.00%。6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L 有3 個(gè)最低點(diǎn), 分別是6 - BA1.0mg/L +NAA1.0mg/L 誘導(dǎo)率為26.67% 、6 - BA1.5mg/L +NAA0.3mg/L 誘導(dǎo)率為33.33% 、6 - BA2.0mg/L +NAA1.0mg/L誘導(dǎo)率為26.67%。

        由表2可知,增加6-BA的濃度并不一定能增加誘導(dǎo)率,只有NAA的濃度在0和0.3mg/L、0.4mg/L時(shí),增加6-BA的濃度,可以增加外植體的誘導(dǎo)率,誘導(dǎo)率增加情況分別為: 由66.67% 增加為76.67% 、由33.33% 增加為36.67%、由43.33%增加為50.00%;NAA 在其他濃度下,增加6-BA的濃度,反而降低誘導(dǎo)率。

        2、NAA 濃度對(duì)外植體誘導(dǎo)率的影響。設(shè)置NAA 濃度(mg/L) 從0開始,以0.1的等差到0.5共6個(gè)不同濃度的激素梯度,探究培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/L+NAA的最佳濃度配比,并了解當(dāng)NAA與6-BA濃度相等時(shí),培養(yǎng)基的濃度與前6組相比是否為最佳濃度配比。由表2可知,當(dāng)濃度配比為6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L時(shí),外植體的誘導(dǎo)率最高,而且污染率也相對(duì)較低。當(dāng)NAA與6-BA濃度相等時(shí),即二者均為1.0 mg/L時(shí),外植體的誘導(dǎo)率為26.67%,其誘導(dǎo)率最低。

        上述分析表明,NAA與6-BA濃度相等,并不是培養(yǎng)基中NAA與6-BA的最佳濃度配比。

        (三) 激素配比對(duì)生根培養(yǎng)的影響

        1、MS培養(yǎng)基的濃度對(duì)粉麗人長(zhǎng)壽花生根率的影響。由表3可知,在適當(dāng)?shù)臐舛确秶鷥?nèi),MS培養(yǎng)基的濃度越低,粉麗人長(zhǎng)壽花的生根率越高。本研究以1/4MS培養(yǎng)基的生根率最高,為80%,表明1/4MS培養(yǎng)基既滿足了粉麗人長(zhǎng)壽花生長(zhǎng)的營養(yǎng)需求,又能很好地誘導(dǎo)生根。

        2、NAA濃度對(duì)生根培養(yǎng)的影響。由表4可知,當(dāng)MS培養(yǎng)基的濃度一定時(shí),NAA濃度增加為0.1mg/L,粉麗人長(zhǎng)壽花的生根率增加,當(dāng)濃度增加到0.4mg/L NAA時(shí),粉麗人長(zhǎng)壽花的誘導(dǎo)生根率最大,為76.67%;再增加NAA濃度到0.5 mg/L時(shí),生根率反而降低,降低為50.0%。

        三、結(jié)論與討論

        粉麗人長(zhǎng)壽花莖段誘導(dǎo)率與培養(yǎng)基接種數(shù)關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,每瓶培養(yǎng)基接種2個(gè)外植體時(shí),莖段的誘導(dǎo)率最高,達(dá)100%,而且植株的生長(zhǎng)情況良好。每瓶接種外植體越少,外植體可利用營養(yǎng)物質(zhì)越充分,有利于莖段誘導(dǎo)出新的定芽。外植體越少,污染率相對(duì)越低,有利于植株生長(zhǎng)。

        不同濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)粉麗人長(zhǎng)壽花帶腋芽的莖段初代培養(yǎng)有較大影響。汪宏剛[2]、李玉梅[3]、崔廣榮[4]等研究表明, 粉麗人長(zhǎng)壽花芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+ 6- BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L,芽增殖的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.5 mg/L;孫男[5]、高建莉[6]等研究表明,6-BA的最佳濃度是1.0mg/L,張瑞姿[7]、陳梅[8]等研究表明,NAA最佳濃度是0.5mg/L,孫利娜[9]研究表明,NAA最佳濃度是0.2mg/L,關(guān)艷清等[10]、李鳳蘭[11]、程軍[12]研究結(jié)果顯示,NAA最佳濃度是1.0mg/L。本實(shí)驗(yàn)表明,對(duì)粉麗人長(zhǎng)壽花的芽增殖初代培養(yǎng)中,6-BA濃度為1.0mg/L,NAA濃度為0.1mg/L能夠較早分化出芽,且芽的增殖速度很快,外植體的誘導(dǎo)率最高。

        粉麗人長(zhǎng)壽花的生根誘導(dǎo)時(shí),有不少學(xué)者使用低濃度的MS培養(yǎng)基,用1/2MS培養(yǎng)基比用MS培養(yǎng)基粉麗人長(zhǎng)壽花的誘導(dǎo)生根率高,不少學(xué)者也研究了NAA濃度對(duì)粉麗人長(zhǎng)壽花生根率的影響,但結(jié)果不盡相同,也有人提出最適生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.2~0.5 mg/L[13-15]。本實(shí)驗(yàn)研究表明,在適宜的MS范圍內(nèi),基本培養(yǎng)基的濃度越低,粉麗人長(zhǎng)壽花的生根率越高,1/4MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)生根率最高,且在基本培養(yǎng)基相同的條件下,加入0.5mg/LNAA,粉麗人長(zhǎng)壽花的誘導(dǎo)生根率最大。

        參考文獻(xiàn):

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        基金項(xiàng)目:2018年度河南省科技攻關(guān)資助項(xiàng)目“土壤結(jié)構(gòu)對(duì)解決草莓連作障礙根際微生態(tài)效應(yīng)的影響研究”,項(xiàng)目編號(hào):162102110092。

        作者簡(jiǎn)介:王明山(1978-),男,河南尉氏人,講師,研究方向:農(nóng)業(yè)信息技術(shù)。

        (責(zé)任編輯 曹雯梅)

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